Способ получения иммуностимулятора

Способ получения иммуностимулятора

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к способам получения лекарственных препаратов для повышения функции миндалин. Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта. Цель достигается способом получения биологически активного вещества из миндалин, включающим очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и лиофилизацию целевого продукта. В качестве сырья берут миндалины человека, а экстракцию проводят в 20 - 25 объемах уксусной кислоты.

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к выделению биологически активных веществ для повышения функции миндалин. Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта. Способ получения биологически активного вещества из миндалин включает очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрацию, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта. В качестве сырья используют миндалины человека, экстракцию проводят в 20-25 объемах уксусной кислоты. П р и м е р 1. Миндалины после тонзиллэктомии очищают от крови, пленок и налета и замораживают при -20^оС. Собранные миндалины в количестве 0,5 кг измельчают и загружают в реактор с мешалкой, заливают 10 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0,01 кг хлористого цинка и экстрагируют 48 ч, перемешивая в течение 1 ч через каждые 8 ч. По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 20 ч. Выпавший осадок высушивают, измельчают, растворяют 0,01 кг осадка в 0,5 л воды и экстрагируют 4 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации. В отфильтрованный раствор добавляют уксусную кислоту до рН 4,0 и стерильно фильтруют через пластины ЕКS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,005 кг. П р и м е р 2. Миндалины человека после тонзиллэктомии очищают от крови, пленок и налета и замораживают при -20^оС. Собранные миндалины в количестве 1 кг измельчают и загружают в реактор с мешалкой и заливают 25 л 3% -ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0,025 кг хлористого цинка и экстрагируют 56 ч, перемешивая в течение 1 ч каждые 8 ч. По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 24 ч. Выпавший осадок высушивают, измельчают, растворяют 0,02 кг осадка в 1 л воды и экстрагируют 5 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации, а в фильтрат добавляют уксусную кислоту до рН 4,0. Раствор стерильно фильтруют через пластины ЕКS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,005 кг. Биологическую активность вещества, выделенного из миндалин, оценивали по его влиянию на функцию лимфоидной и состояние эпителиальной тканей миндалин интактных кроликов. Функцию лимфоидной ткани миндалин оценивали в реакции бластной трансформации лимфоцитов миндалин. Реакцию бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) позволяет выявить способность этих клеток отвечать трансформацией в присутствии митогена: фитогемагглютинина (ФГА), конканавалина (Кон А) и др. Биологически активное вещество, полученное из миндалин, вводили 20 интактным кроликам-самцам по 1 мг на 1 кг массы тела в 1 мл физиологического раствора внутримышечно ежедневно в течение 5 сут. Другой группе животных (20 кроликов) в той же дозе и по аналогичной схеме вводили тималин (как контроль). Контрольной группе животных (20 кроликов) вводили по 1 мл физиологического раствора по аналогичной схеме. На 10 сутки от начала эксперимента всех животных забивали, выделяли миндалины и оценивали в них РБТЛ на Кон А и ФГА и гистологические изменения. РБТЛ в миндалинах контрольной и опытной групп животных (Мm) приведена в таблице. Установлено, что введение биологически активного вещества из миндалин увеличивало на 33-78% бласттрансформацию лимфоцитов миндалин по сравнению с контрольной группой животных. У кроликов, получавших тималин, не отмечено достоверных изменений изучаемых показателей. При гистологическом исследовании миндалин животных установлено, что введение биологически активного вещества из миндалин уменьшало клеточную инфильтрацию эпителия, что приводило к нормализации его структуры. Тималин не оказывал влияния на морфологическое состояние миндалин. Таким образом, вещество, полученное предлагаемым способом, оказывает специфическое стимулирующее влияние на функцию миндалин.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА путем очистки сырья, замораживания, измельчения, экстракции 3% -ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрования, обработки надосадочной жидкости ацетоном, отделения осадка, растворения и лиофилизации целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности целевого продукта, в качестве сырья используют миндалины человека, а экстракцию проводят в 20 - 25 объемах уксусной кислоты.

РИСУНКИ

Рисунок 1

PC4A - Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 27-1999

(73) Патентообладатель:ООО "Клиника Института биорегуляции и геронтологии"

Договор № 8618 зарегистрирован 28.04.1999

Извещение опубликовано: 27.09.1999