Патент ссср 152543
Иллюстрации
Реферат
Класс А 61k; 30h, 2вз № 152543
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Лодписная группа № И9.
3. П. Карманова, А. Ф. Локтев и Е. И. Турченко
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ИЗ КРОВИ
Заявлено 5 марта 1962 г. за № 767595 31-16 в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Опубликовано в «Бюллетене изобретений» № 1 за 1963 г.
Известны способы выделения лейкоцитов из крови при помощи фитогемагглютинина, полученного из бобов, и синкола или поливинила.
Указанные способы не обеспечивают достаточно высокого выхода лейкоцитов с небольшой примесью эритроцитов и низкой повреждаем остью.
В данном изобретении, с целью увеличения выхода лейкоцитов, снижения степени их повреждаемости, а также уменьшения примеси эритроцитов, к крови предварительно добавляют раствор цитрата натрия, а для получения осадка лейкоцитов применяют центрифугирование.
Фитогемагглютинин получают из бобов фасоли экстракцией
0,85i%-ным раствором хлористого натрия.
Для выделения лейкоцитов из крови в соответствии с предлагаемым способом в центрифужные пробирки наливают по 1 мл 2|%-ного раствора цитрата натрия и по 5 мл крови. Г1осле перемешивания прибавляют рабочий раствор фитогемагглютинина в количестве 0,1 л я для крови человека и 0,15 мл для крови кроликов. (Для получения рабочего раствора фитогемагглютинина 10 мг препарата растворяют в
1 мл подогретого до температуры 35 — 40 физиологического раствора).
Затем в пробирки приливают по 1 мл синкола или поливинила, тщательно перемешивают и центрифугируют 1 — 2 мин при 1000 об(мин.
К надосадочному слою прибавляют физиологический раствор из расчета 1: 3 и центрифугируют 7 — 8 мин при 1000 об(мин. Надосадочную жидкость отбрасывают, а оставшийся на дне осадок лейкоцитов промывают три раза физиологическим раствором и используют. № 152543
Прим ер. 100 г бобов фасоли замачивают в 500 мл 0,85%-ного раствора хлористого натрия и оставляют при температуре 4 на сутки.
Набухшие бобы тщательно измельчают в гомогенизаторе и полученную кашеобразную массу в течение трех часов энергично перемешивают при комнатной температуре. Плотные частицы отжимают через ткань, а жидкость центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин.
Надосадочную жидкость в течение 30 мин встряхивают с 5 — 10 г кизельгура, затем после предварительного центрифугирования фильтруют через воронку Бюхнера и доводят рН раствора до 7,3 — 7,6 прибавлением 20 %-ного раствора едкого натра. Операцию осветления кизельгуром повторяют и полученный вязкий сильно опалесцирующий раствор подвергают диализу (24 час в проточной водопроводной воде и 24 час в дистиллированной воде при температуре 4 ) . После центрифугирования бесцветную опалесцирующую жидкость сушат из замороженного состояния. Выход — 2t%, Предлагаемый способ позволяет достаточно быстро и с высоким выходом (до 70%) выделять из крови лейкоциты с низкой повреждаемостью и примесью эритроцитов, не превышающей 2 — 3%.
Предмет изобретения
Составитель В. Л. Таратута
Корректор В. П. Фомина
Редактор А. К. Лейкина Текред T. П. Курилко
Поди. к печ. 20/XII — 52 г. Формат бум. 70Р,108 /m
Зак. 3707/1 Тираж 425
ЦБТИ прн Комитете по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, М. Черкасский пер., д. 2/6.
Объем 0,18 изд. л.
Цена 4 коп, Типография, пр. Сапунова, 2.
Способ выделения лейкоцитов из крови при помощи фитогемагглютинина (полученного из бобов) и синкола или поливинила, о тл и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения выхода лейкоцитов и уменьшения их повреждаемости, а также уменьшения примеси эритроцитов, к. крови предварительно добавляют раствор нейтрального цитрата натрия и применяют для получения осадка лейкоцитов центрифугирование.