Способ получения биомассы micrococcus lysоdеiктiсus гиск 2665

Способ получения биомассы micrococcus lysоdеiктiсus гиск 2665

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к способу получения биомассы MICROCOCCUS LYSODEIKTICUS с высоким содержанием полигликана клеточной стенки, применяемого в биотехнологии и препаративной биохимии. С целью увеличения выхода полиглюкана и сокращения процесса в период культивирования осуществляют непрерывную подачу глюкозы и фосфорнокислого однозамещенного калия в питательную среду, содержащую пептон, дрожжевой экстракт и хлористый натрий, до достижения культурой середины логарифмической фазы роста, а концентрации этих компонентов устанавливают в начале логарифмической фазы роста соответственно 1,0 - 1,25 г/л в 1 ч и 0,5 - 0,6 г/л в 1 ч, а в середине логарифмической фазы роста - 1,5 - 2,0 г/л в 1 ч и 0,8 - 1,0 г/л в 1 ч. Преимущество способа заключается в увеличении выхода полиглюкона в 1,5-2 раза и сокращении времени получения биомассы в 1,5 - 2 раза, что в 2 раза снижает себестоимость как биомассы MICROCOCCUS LYSODEIKTICUS ГИСК 2665, так и выделяемого препарата-дисахарида.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

5 А1 (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4318813/30-13 (22) 21 . 10. 87 (46) 07.12. 89. Бюл. )1- 45 (71) Научно-производственное объединение "Биолар" (72) А.Ф. Муйжниеце, О.А. Цепле, Д.P. Жигуре, З.А. Виестуре, Н.М.Инкина, Е.Д. Ермолаев, А.А.Хагендорф, М.П. Баумане и Л.О. Острова (53) 577.15(088.8) (56) Kloos W.Е., Schultes L.Ã1.

Transformation in Micrococcus lysodeikticus. F.of. Jenera1 Microbiology, 1969, 55, )) 2, р. 307-317.

Авторское свидетельство СССР

У 758770, кл. С 12 N 9/36, 1979. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОГ1АССЫ MICR0C0CCUS LYS0DEIKTICUS ГИСК 2665 (57) Изобретение относится к способу получения биомассы Micrococcus lysodeikticus с высоким содержанием полигликана клеточной стенки, применяемого в биотехнологии и препараИзобретение относится к способу получения биомассы Micrococcus lysodeikticus с высоким содержанием полигликана клеточной стенки, применяемого в биотехнологии и препаративиой биохимии.

Цель изобретения — увеличение выхода полиглюкана и сокращение процесса.

Сущность способа заключается в том, что культивирование М1сгососсаз

lysodeikticus ГИСК 2665 ведут до се(51) 4 С 1 2 N ) / 20 / / (Ñ 1 2 N ) / 20, С 12 R 1:285) 2 тивной биохимии. С целью увеличения выхода; пол иглюка на и со краще ния процесса в период культивирования осуществляют непрерывную подачу глюкозы и фосфорнокислого однозамещенного калия в питательную среду, содержащую пептон, дрожжевой экстракт и хлористый натрий, до достижения культурой середины логарифмической фазы роста, а концентрации этих ком— понентов устанавливают в начала логарифмической фазы роста соответственно 1,0-1,25 г/л в 1 ч и 0 5

0,6 г/л в 1 ч, а в середине логарифмической фазы роста 1,5-2,0 г/л в

) ч и 0,8-1,0 г/л ч в 1 ч. Преимущество способа заключается в увеличении выхода полиглюкона в 1,5-2 раза и сокращении времени получения биомассы в 1,5-2 раза, что в 2 раза снижает себестоимость как биомассы

Micrococcus lysodeikticus ГИСК 2665, так и выделяемого препарата-дисахарида. редины логарифмической фазы роста, при этом в питательную среду, содержащую пептон, дрожжевой экстракт и хлористый натрий, непрерывно вводят глюкозу и калий фосфорнокислый однозамещенный, концентрации которых устанавливакт в начале логарифмической фазы роста соответственно

1,0-) 25 г/л в 1 ч и 0,5-0,6 г/л в 1 ч, а в середине логарифмической фазы роста 1,5-2,0 г/л в 1 ч и 0,81,0 г/л в 1 ч. Штамм Micrococcus

1527255

lysodeikticus 2665 депонирован н хранится в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича.

Пример 1. Культуру Micrococcus lysodeikticus 2665 поддерживают на косяках ИПА с пересевом 1 раз в месяц. Дпя инокуляции используют 48-часовую культуру, которую в дальнейаем пересевают в колбу с

200 мл питательной среды с последуюо щим культивированием 24 ч при 30 С на качалках при 100 об/мин. Лалее культуру в количестве 1 мп на 1 л питательной среды вносят в 300-литровый ферментер с количеством питательной среды 240 л. Культивирование ведут при 30 С в условиях аэра- 20 ции.

Питательная среда содержит следующие компоненты, Х:

Дрожжевой экстракт 0,5

Пептон 0,5

Натрий хлористый 0,5

Среду стерилизуют при 0,5 атм

30 мин, рН доводят до 8,210,2 при. помощи 20Х-ного раствора NaOH

Во время культивирования в питательную среду непрерывно вводят глюкозу и калий фосфорнокислый в период времени от 0-4 ч 1,0 г/л в 1 ч и

0,5 г/л в I ч соответственно, а в период 4-10 ч — 1,5 г/л в 1 ч и 0,8 г/л в 1 ч соответственно .

Культивирование ведут в течение

12 ч. Во время культивирования контролируют однородность культуры (микроскопически), прирост биомассы, сте- 40 пень аэрации, температуру и рН среды, которая поддерживается в пределах

7,8-8,8. Выход биомассы 4 г/л. Активность лизоцима к препарату 20000 ед/мг препарата. Содержание дисахарида 3,0Х 45 (в пересчете на сухую биомассу).

Пример 2. Во время культивирования каждый час добавляют глюкозу и калий фосфорнокнслый: 0-4 ч роста

l,1 г/л в 1 ч и 0,55 г/л в 1 ч соот50 ветственно, 4-10 ч 1,75 г/л в 1 ч и

0,9 г/л в 1 ч соответственно. Продолжительность культивирования 13 ч.

Остальное согласно примеру 1. Выход биомассы 6 г/л. Активность лизоцима 55 к препарату 22000 ед/мг препарата.

Содержание дисахарида 2,5Х (в пересчете на сухую биомассу).

Пример 3. Во время культивирования каждый час добавляют глюкозу и калий фосфорнокислый: 0-4 ч роста 1 25 г/л в 1 ч и 0,6 г/л в 1 ч соответственно, 4-10 ч роста 2,0г/л в l ч и 1,0 г/л в I ч соответственно .

Продолжительноать культивирования

l4 ч. Остальное согласно примеру

Выход биомассы 8 г/л. Активность лизоцнма к препарату 22000 ед/мг препарата. Содержание дисахарида 2,0Х (s пересчете на сухую биомассу).

Пример 4. Во время культивирования каждый час добавляют глюкозу и калий фосфорнокислый, 0-4 ч роста 0,9 г/л в 1 ч и 0,45 г/л в

1 ч соответственно, 4-10 ч роста

1,0 г/л в 1 ч и 0,6 г/л в 1 ч соответственно. Продолжительность культивирования 10 ч. Выход биомассы 2,5 г/л .

Активность лизоцима к препарату .18000 ед/мг препарата. Содержание дисахарида 0,65Х (в пересчете на сухую биомассу). Остальное согласно примеру l.

Пример 5. Во время культивирования каждый час добавляют глюкозу и калий фосфорнокислый: 0-4 ч роста 1,5 г/л в ч и 0,65 г/л в

1 ч соответственно, 4-10 ч роста

2,2 г/л в 1 ч и 1,1 г/л в 1 ч соответственно . Продолжительность культивирования 16 ч, Остальное согласно примеру ) . .Выход биомассы 9 г/л. Активность лизоцина к препарату 22000 ед/мг препарата. Содержание дисахарида

0,9Х (в пересчете на сухую биомассу).

Преимущество предложенного способа заключается в увеличении выхода поликлюкана в I 5-2 раза и в сокращении времени получения биомассы в 1,52 раза, что в 2 раза сникает себестоимость как биомассы Hicrococcus

lysodeikticus 2665, так и выделяемого препарата — дисахарида.

eoрмУла из обре те ния

Способ получения биомассы Ricrococcus lysodeikticus .ГИСК 2665 путем культивирования продуцента на питательной среде с использованием глюкозы, натрия хлористого, дрожжевого экстракта, пептона и калия фосфорнокислого однозамещенного в аэробных условиях с последукщим отделением биомассы, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода полиСоставитель В. Соина

Техред М.Дндык

Корректор Т.Палий

Редактор В. Данко

Заказ 7481/34 Тира к 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35 ° Рауаская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ухгород, ул. Гагарина, 101

5 1527255 6 глюкана и сокращения процесса, в пе рифмической фазы роста соответственриод культивирования осуществляют но 1,0-1,25 г/л в I ч и 0,5-0,6 г/л непрерывную подачу глюкозы и калия в 1 ч, а в середине логарифмической фосфорнокислого однозамещениого до фазы роста J 5-2 0 г/л в 1 ч и 0 85

° в е достюкения культурой середины лога- 1,0 г/л в I ч.