Способ определения т-лимфоцитов крови человека

Способ определения т-лимфоцитов крови человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунного статуса человека. Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа. У обследуемых производят забор крови, выделение лимфоцитов, инкубацию их с частицами меламин-формальдегидной смолы в течение 30 мин при температуре 4 °С, препараты высушивают, окрашивают и подсчитывают число розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов. В сравнении с прототипом сокращено в 2 раза время анализа. В результате использования частиц меламин-формальдегидной смолы упрощена процедура анализа путем исключения этапов фиксации и отмывки и, кроме того, частицы меламин-формальдегидной смолы дают одинаковые результаты в сравнении с эритроцитами барана независимо от сроков их хранения. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (ю 4 G Ol N 33 53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

К АВТОРСКОМУ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4332839/28-14 (22) 03.12.87 (46) 07.12.89. Бюл. У 45 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад. И.П.Павлова (72) А.А.Тотолян и Н.В.Шамкова (53) 615.375 (088.8) (56) Джондал М. Лимфоциты, выделение, фракционирование и характеристика. — M.: Медицина, 1980, с. 100-111. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т-ЛИ(ФОБИТОВ

КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57 ) Изобретение о тиос итс я к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунного статуса человека. Цель изобретения — сокращение времени анализа

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунного статуса человека.

Целью изобретения является сокра— щение времени анализа и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

В каждую лунку микрокамеры для иммунологических реакций (планшет

Терасаки) вносят по 0,005 мл лейкоцитов в концентрации 1,0-1,5 10 /мл и

О, 005 мл суспензии частиц меламинформальдегидной смолы с диаметром частиц 5, 0 мкм в концент рации 6, 0-7, О«

«1 0 /мл. Камеры цент рифу г ируют

5 мин при 1000 об/ми», инкубируют

2 и упрощение способа. У обследуемых производят забор крови, выделение лимфоцитов, инкубацию их с частицами меламинформальдегидной смолы в течео ние 30 мин при температуре 4 С, препараты высушивают, окрашивают и подсчитывают число розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов. В сравнении с прототипом сокращено в 2 раза время анализа. В результате использования частиц меламинформальдегидной смолы упрощена процедура анализа путем исключения этапов фиксации и отмывки и, кроме того, частицы меламинформальдегидной смолы дают одинаковые результаты в сравнении с зритроцита- O е ми барана независимо от сроков их хранения. 2 табл.

30 мин при 4 С, фильтровальной бумагой удаляют надосадок, камеры вы,сушивают и окрашивают по Лейшману.

При микроскопировании подсчитывают количество розеткообразующих лимфоцитов на 100 лимфоцитов (эа розетку принимают лимфоцит, присоединивший

3 и более частиц меламинформальдегиднои смолы) .

Пример 1. У 16 практически здоровых людей определяют количество

Т-лимфоцитов по предлагаемому способу.

Полученные результаты приведены в табл. 1.

Пример 2. У 5 практически

0 здоровых людей из веноэной крови вы1527590

Таблица!

Обследованный

Содержание Т-лимфоцитов, %

2

4

Ь

8

ll

12

14 !

l6

5!

61

77

72

73

76

71

79

71

74

62

51

67

Та блица 2

Количеств только ЕРОЛ, %

Обследо ванный

Количество

E-РОЛ и ОКТ11 лимфоцитов, %

Количество только ОКТ-11+ лимфоцитов, %

67

73

61

1

3

Составитель В.Литовченко

Редактор И,Горная Техред M.Äùùê Корректор A.Îáðó÷àð, Заказ 7507/51 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 деляют фракцию мононуклеаров, которую используют для постановки розеткообраэования с частицами меламинформальдегидной смолы. Затем полученную суспензию лейкоцитов и частиц меламинформальдегидной смолы инкубируют с моноклональными антителами ОКТ-11, меченными флюоресцеином. Определяют количество розеткообраэующих лимфо- fp цитов (Е-РОЛ) и ОКТ-11 лимфоцитов °

Полученные результаты приведены в табл ° 2.

Таким образом, в предлагаемом способе отсутствуют этапы фиксации глутаровым альдегидом (который является сильным канцерогеном) и отмывания клеток физиологическим раствором.

Кроме того, более чем в 10 раз сокращена длительность этапа приготовления 20 суспензии индикаторных частиц, общая длительность способа составляет не более 60 мин, в то время как длительность известного способа 120-135 мин.

Кроме того,при хранении эритроци- 25 ты барана теряют свою активность (срок хранения не более 2 недель), частицы меламинформальдегидной смолы ,дают одинаковые результаты независимо от сроков хранения. 30

Формула изобретения

Способ определения Т-лимфоцитов крови человека, включающий забор крови, выделение лимфоцитов, инкубацию их в присутствии индикаторных частиц, подсчет числа розеткообразующих клеток,отличающий с ятем, что, с целью сокращения времени анализа и упрощения способа, в качестве индикаторных частиц используют частицы меламинформальдегидной смолы.