Колонка электрофореза и электрофокусирования

Колонка электрофореза и электрофокусирования

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биологии, биотехнологии и медицине. Цель изобретения - повышение надежности работы колонки. Колонку выполняют из токонепроводящего материала. Она состоит из камеры разделения, соединенной с электродными сосудами. Внутренняя полость камеры отделена от электродных сосудов полупроницаемыми мембранами. Электродные сосуды содержат штуцеры для обменного прокачивания электродного буферного раствора. В камере разделения колонки имеется токопроводящий герметизирующий подвижный поршень. 1 ил.

С0103 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51) 5 С 25 В 7/00

ГОСУДАРСТЮЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРИТИ .1М

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4358685i 3- б (n) 05. 01.88

{46) 15.01. 30 Е .ол. Н > (j1) нститут проблем о . ..оло i .ê им. Р.Е.Кавецко(72) В.А.Шпяховенко, г.З.Негргй и А.А.Ратуыняк

{53) 537.363 {088.8) (56) Авторское свидетельство ГССР

У 1057836, i ë С 01 "> ?7/26, 198Ç, „„БО„„ИЗ58ВВ

2 (54) КОЛОНКА ЭЛЕКТРОФОРЕЗА И ЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЯ

{57) Изобр:тение относится к биологии, биотехнологии и медицине, Цель изобретения — повышенис надежности работы коленки. Колонку выполняют из токочепроводящего материала. Она состоит из камеры разделения, соединенной с злектродными сосудами. Внутренняя по1535898 лость камеры отделена от электродных сосудов полупроницаемыми мембранами.

Электродные сосуды содержат штуцеры для обменного прокачивания электродИзобретение относится к электрофоретическому разделению и может быть использовано в биологии и медицине.

Целью изобретения является повыше- 1 ние надежности работы колонки, На чертеже показана колонка.

Колонка выполнена из токонепроводящего материала. В ее состав входит камера разделения 1, соединенная с электродными сосудами 2. Внутренняя полость камеры отделена от электродных сосудов полупроницаемыми мембранами 3. Электродные сосуды содержат штуцеры 4 для обменного про- 25 качивания электродного буферного раствора. В камере разделения колонки 1 имеется токопроводящий герметизирующлй подвижный поршень

Устройство работает следующим об30 разом.

Камера разделени я 1 и;-; li,aродные сосуды 2 заполняются соогветстгующнми буферными растворами. Через узел выода 6 в колонку подается биообъект, подлежащий разделению электродам подводится напряжение, дикт немое условиями эксперимента, проводится электрофорез или электрофокусирование биообьекта. После окончания разделения г пространство между полу40 проницаемой мембраной 3 и гелевым поршнем 5 через штуцер 8 при помощи насоса 9 подается вытесняющая жидкость или газ, в результате чего поршень 5 плавно скользит в полости. камеры разделения и вытесняет содержимое колонки через штуцер сбора фракций 10, После окончания сбора материала гелевый поршень 5 при помощи того же насоса 9 может снова быть

50 приведен в исходное положение, 1. Работа в режиме электрофокусирования. з

В колонку с рабочим объемом 25 см

npv, помощи перистальтического насоса введен 2 -ный раствор амфолина ЛКБ, стабилизированный градиентом концентрации глицерина (5-204). В раствор ного буферного раствора. В камере разделения колонки имеется токопроводящий герметизирующий подвижный поршень. 1 ил. введен бычий сывороточный альбумин

3 мг. В нижней части рабочего объема колонки сформирован подвижный герметизирующий поршень из 104-ного полиакриламидного геля. Электродные отсеки заполнены соответственно 0,01 н.NaOH (катодный) и 0,01 í. H@POII (анодный), В процессе фокусирования напряжение на электродах плавно повышалось от 50 до 300 В. Длительность фокусирования

24 ч. После окончания фокусирования напряжение на электродах отключено и в пространство под гелевым поршнем начата плавная подача дистилллрованной воды. Одновременно при помощи коллектора фракций начат сбор разделяемых фракций по 0,5 мл, В каждой фракции определены величина рН и концентрация белка.

Результат. В процессе изоэлектрофокусирования в колонке сформировался градиент рН в пределах 4,0-9,5.

Белок сфокусирован в 3 фракциях с максимальным содержанием в области рН

4,9.

2. Фракционирование белков сыворотки крови методом электрофореза в условиях измененного рабочего оСъема.

Путем закачивания буферного раствора в пространство под токопроьодящий поршень последний перемещен вверх, что привело к изменению рабочего объема колонки до 15 см . Рабочий объем колонки заполнен раствором

0,05 М трис.боратного буфера, с1абилизированного градиентом концентрации глицерина (5-20 ), общий об ьем

15 мл. Электродные отсеки соединены с дополнительными емкостями (по

300 мл) магистралями, через ко1орые осуществляется непрерывное прокачивание буферных растворов того же состава при помощи перестальтических насосов. Через соответствующий штуцер на поверхность градиента осторожно нанесено 0,3 мл сыворотки крови человека, содержащей 0,01 бромфенолового с1лнего. Электроды подключены к источнику постоянного напоя535898

Извес-.на конструкция установки для электрсфореза 3, содержащая колонку Э0 и электродные камеры, отделяемые от колонки полупро:а;цаемьи . мембранами, блок перисталь-нческих насосов и кап< вЂ,лярный коллектор фракций, Последний работает тг;<им образом, что в капиллярную 1рубку через заданные интервалы времени при помощи дополнитель:ого насоса вводятся пузырьки воздуха, предупреждающие перемешивание собранных проç J°

Недостатком данной KQHcTpукции ляе-<:я возмож ;ос r ь перемешивания содержимого колонки с вытесняющей жидкостью либо с воздухом, или сбор

Формула изобретения

Колонка электрофореза и электрофокусирования, включающая электродные камеры, между которыми помещена камера разделения, отделенная от электродных камер полупроницаемыми мембранами, штуцера для ввода и вывода рабочих растворов, о т л и ч а ю щ ая с я тем,что, с целью повышения надежности работы колонки, она снабжена перегородкой, выполненной из полупроницаемого токопроводящего материала и размещенной с возможностью перемещения в камере разделения.

Составитель 0.3обнин

Редактор А.,Дол« ич Техред М.Дядь<к . Корректор С.LJeKMap

Заказ 85 Тираж 528 Подписное

ВН)1ИП 1 Госуд=.рственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Произволе<ее но-издательский комбинат "Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина,101

5 1 жения 150 В. Продолжительность процесса контролировалась визуально по подвижности маркерного красителя в рабочем пространстве колонки. После достижения красителя нижнего конца колонки напряжение отключено. В пространство под подвижным гелевым поршнем начата подача воздуха. Одновременно при помощи автоматического коллектора начат сСор фракций содержимого колонки по 0,5 мл. В пробах определено содержание белка.

Белки сыворотки крови расфакционированы на 5 фракций, наибольшую по обьему и наиболее подвижную из которых представляет альбумин.

Разра"станлая колонка может быть использован» для процессов разделения биополимеров методами эле1<трофореза и электрофокусирования. Использование подвижной токопроводящей перегородки рагш. ряет рабочие возможности колонки » исключает необходимость использования растворов высокой плотности для фракционирования ее содержимого. фра кций осущес т вляется методом от ка-,. чивания без заполнения освобождающе- гося пространства инертной жидкостью.

Этот недостаток особенно проявляется в условиях микрогравитации, когда любые жидкости имеют одинаковую плотность °

Использование в составе колонки

10 для электрофореза и изоэле метрического фокусирования токопроводящей герметизирующей перегородки, установленной с возможностью перемещения, позволяет более эффективно осуществлять сбор

15 разделяемых в колонке фракций, исключая их перемешивание, что существенно повышает надежность ее работы. При этом отпадает необходимость применения вытесняющей жидкости высокой плотр0 ности. Кроме того,это позволяет менять рабочий обьем колонки без изменения ее конструкции, что расширяет возможности ее использования. Наиболее целесообразным является применение уст25 ройства в условиях микрогравитации, когда использование жидкости с высокой плотностью не гарантирует от перемешивания ее с содержимым колонки.