Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных
Иллюстрации
Показать всеРеферат
Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных. Цель изобретения - повышение титра антител в крови животных. Для этого подопытному животному одновременно с итактивированной вакциной, приготовленной из штамма вируса гриппа А/385/80- R, внутрибрюшинно вводят полисахарид B. MUCILAGINOSIS в количестве 1,0 - 5,0 мкг/кг. Использование предлагаемого способа иммунизации животных обеспечивает повышение титра антител в 3,5 - 4,3 раза по сравнению с контролем. 3 табл.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (19) (11) ОПИСЛНИК ИЗ0БРКтЕния
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ П.(НТ СССР
{21) 4258325/30-13 (22) 05.06.87 .(46) 07.02.90, Бюл. У 5 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им, Пастера (72) Ф,С,Носков, E.Я.Виноградов, Г,Г,Няникова, Л,Е,Никитина и Т.С.Разоренова (53) 576,8.097.3:612,017,1(088.8) (56) Лазарева Д,Н,, Алехин Е.К.
Стимуляторы иммунитета. — M,: Медицина, 1985, Авторское свидетельство СССР
Ф 540640, кл. А 61 К 39/18, 1976.
Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных, Цель изобретения — повышение титра антител в крови у животных, Способ осуществляют следующим образом.
Подопытному животному одномоментно с гриппозной вакциной внутрибрюшинно вводят полисахарид Bacillus mucilaginosus в количестве 1,0-5,0 мкг/кг, Используемый иммуностимулятор полисахарид В,mucilaginosus получают известным способом. Культуру слизистых бацилл В.mucilaginosus (штамм BKMB1446 ) выращивают на мясо-пептонном агаре (MIIA), содержащем 4-5% глюкозы, о при температуре 37-39 С в течение (gI)g А 61 К 39/00, 39/27, 39/12
2 (54) СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКОГО
ИММУНИТЕТА К ВИРУСУ ГРИППА У ЖИВОТН11Х (57) Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных. Цель изобретения — повышение титра антител в крови животных, Для этого подопытному животному одновременно с инактивированной вакциной, приготовленной из штамма вируса гриппа A/385/80-R, внутрибрюшинно вводят полисахарид
В,тесilaginosis в количестве 1,05,0 мкг/кг. Использование предлагаемого способа иммунизации животных обеспечивает повышение титра антител в 3,5-4,3 раза по сравнению с контролем, 3 табл, 18-24 ч. Выделившуюся слизь смывают с поверхности агара изотоническим раствором хлорида натрия и центрифугируют при 600 об/мин в течение 30 мин, К надосадочной жидкости прибавляют 3 объема
96%-ного этилового спирта. Через 24 ч выпавший осадок отделяют, депротеинизируют и диализируют против дистиллированной воды.
Для осуществления предлагаемого способа иммунизации 1 мкг полисахарида В.mucilaginosus растворяют в
10 мл физиологического раствора (из расчета на 40 животных), смешивают и с 10 мл гриппозной вакцины и эту смесь вводят по 0,4 мл на мышь одним шприцом внутрибрюшинно, однократно, Вакцина инактивированная, элюатно-хроматографическая, .приготовленная из штам"
1540831 ма вируса гриппа H>N< А/385/80-R, высокое количество гемагглютинина
20 мкг/мл. Доза полисахарида В.mucilaginosus составляет 1 0 мкг/кг. На
14-е сутки животных обескровливают, сыворотки крови обрабатывают нейраминидазой нехолерного вибриона (уд, ак-" тивность 5,6 ед/мг) и затем исследуют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Об иммуностимулирующей активности полисахарида В,mucilaginosus судят по содержанию антител в сыворотках крови животных, Пример 1. Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг веса животного и вводят по 0,2 мл этого раствора мышам белым нелинейным весом 16-18 г внутрибрюшинно совмест- 20 но одним шприцом с 0,2 мл вакцины инактивированной, элюатно-хроматографической, приготовленной из штамма вируса гриппа А/385/80-К (20 мкг/мл по гемагглютинину). Контрольной группе 25 таких же мышей вводят по 0,2 мл той же вакцины, но вместо полисахарида
0,2 мл физиологического раствора. Через 14 сут мышей кровопускают, сыво.ротки исследуют в РТГА, В контроле . 30 титр антител в 4,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.
Пример 2.Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 10,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16-18 r внутрибрюшинио совместно с .0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R. Контроль и кровопускание проводят по при- 40 меру 1. В контроле титр антител в
2,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.
Пример 3. Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 0 1 мкг/кг и вводят но 0,2 мл мышам весом 1б18 г внутрибрюшинно совместно с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R. Контроль и кровопускание проводят по при-50 меру 1. В контроле титр антител в 2,1 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.
Результаты опытов обрабатывают методом вариационной статистики.
Иимуностимулирующее действие полисахарида В.mucilaginosus приведено в табл,1
Из табл,1 следует, что эффективными дозами полисахарида являются
1,0 и 5,0 мкг/кг. С увеличением дозы препарата его иммуностимулирующая активность снижается и при дозах
500 мкг/кг различие в среднегеометрическом титре антител статистически недостоверно, Снижение оптимальной дозы препарата на 1-2 порядка не влияет на иммуногенез, и содержание антител в сыворотках крови животных,.получивших 0,01 мкг/кг полисахарида, не превышает контрольного уровня.
Пример 4, Полисахарид В.muсilaginosus растворяют в физиологическом растворе иэ расчета 1,0.мкг/кг и вводят по 0,2 мл в смеси с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R мышам весом 16-18 г: первой группе — внутрибрюшинно, второй — интраназально,-Че рез 14 сут мышей кровопускают и ста-. вят РТГА, В первой группе животных при внутрибрюшинном введении препарата и вакцины титр антител в 2 ° 5 раза вьппе, чем при интраназальном спосо+ бе введения.
Пример 5, Полисахарид B,mucilaginosus растворяют в фиэиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 1618 г внутрибрюшинно первой группе од: новременно с 0,2 мл гриппозной вакци-. ны штамма А/385-80-R второй группе эа 24 ч до введения той же вакцины
Третью (контрольную) группу мышей иммунизируют той же вакциной, но вместо полисахарида смешивают с 0,2 мл физиологического раствора. Через
14 сут мышей обескровливают, сыворотки исследуют в РТГА. В первой группе животных прирост титров антител по., сравнению с контролем составляет 4,2 во второй 1,6, т,е. введение полисахарида. В.mucilaginosus за 24 ч до введения гриппозной вакцины дает незначительный иммуностимулирующий эффект по сравнению с одновременным введением полисахарида и вакцины.
Пример 6. Полисахарид В,mu -.
cilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 1618 г внутрибрюшинно первой группе одновременно с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R, второй группе через
24 ч после введения той же вакцины.
Контроль и обескровливание осуществляют по примеру 5, Результаты РТГА,поСреднегеометрический титр антител, log 2
КоличестКратность Уровень прироста значимоститра ти P антител
Доза полисахарида, . мкг/кг во жи-вотных, шт.
3,0
4,3
5,4
5 ° О
4,5
4,2
3,8
3,3
0 01
0,1
1 0
5,0
10,0
100,0
500, О
Не вводили
)0,1 (О, 001 (0,001 (О, 001 (0,001 (О, 05 (0 l
0,8
2,1
4,3
3,5
2,3
1,9
1,4
Таблица 2
Доза полисахарида, мкг/кг
Время введения ПС ных, шт.
1,0
4,2 (О, 001 (0,1
ОдновременЧ но
За 24чдо введения вакцины
1,0
1,6
10 казали, что в первой группе мьппей содержание титров антител в крови в
4,2 раза больше, чем в контроле, Во второй группе содержание титров антител такое же, как в контроле, т.е. введение полисахарида В.mucilaginosus через 24 ч после введения вакцины не влияет на иммуногенез, В табл,2 приведена зависимость иммуностимулирующей активности полисахарида В,mucilaginosus от времени введения его животным, Предлагаемый в качестве иммуностимулятора полисахарид при проверке на мышах оказался нетоксичным. Это подтверждается следующим опытом, Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе и вводйт мышам весом 16-18 r внутрибрюшинно однократно по 0,5 мл в дозах
25 ° 125.и 250 мг/кг, В течение 14 сут ведут учет гибели животных, Определение токсичности полиса,харида В.mucilaginosus и результаты опыта приведены в табл,3 °
Из табл.3 видно, что к 14-м суткам из 20 мьппей в 1-й и 2-й группах погибли по 1 мыши, что составляет
Опыт Группа Количество живот40831 б
0,57, а в 3-й группе — 2 мыши, т,е.
1%, Если принять во внимание, что. в контрольной группе погибла 1 мышь, то
5 их гибель в опытных группах можно считать не связанной с действием полисахарида, Учитывая, что гибель животных ни в одной иэ групп не достигла
50%, а также то, что испытуемые дозы превьппают эффективную дозу препарата в несколько тысяч раэ, можно сделать вывод, что предлагаемый препарат— нетоксичен.
Формула изобретения
Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных, включающий введение иммунизи20 рующего агента совместно с полисахарицом, отличающийся тем, что, с целью повьппения титра антител в крови, в качестве иммунизирующего агента используют инактивированную
25 вакцину, приготовленную из штамма вируса гриппа А-385/80-К, из полисахаридов используют Bacillus mucilaginosus ВКМВ-1446D в количестве 1,05,0 мкг/кг, а введение осуществляют
30 внутрибрюшинно.
Таблица 1
Кратность Уровень знаприроста чимости Р титров
1540831
Продолжение табл. 2
6 7
3 (контрольная)
l0 (0,001
4,2
1,0
Одновременно
Через 24 ч после введения вакцины
1,0
1аo
3 (контроль- 10 ная) Таблица 3
Гибель животных, сут
2 3 4 5 6 . 7 8 9 10 13
КоличестДоза ПС, кг/иьппь во живот ных, шт, 1
Составитель С,Пылова
Редактор Н,Тупица Техред М.Моргентал Корректор О.Дипле
Заказ 1011 Тираж 563 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/S
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101
125
250
0 (конт-, рольная) 20
0 0 О
0 0 0
0 0 0
1 0 0
0 0 О
0,0 0
О O 0
О .О. 0
0 1 О 0 0 0
1 0 О 0 О О
1 0 1 0 0 0
0 0 0 0 0 0