Штамм каллусной культуры аrisтоlоснiа маnsнuriеnsis - продуцент аристолохиевых кислот

Штамм каллусной культуры аrisтоlоснiа маnsнuriеnsis - продуцент аристолохиевых кислот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности. Целью изобретения является новый штамм культуры многолетней лианы (кирказона маньчжурского)ARISTOLOCHIA MANSHURIENSIS ВСКК-ВР N 33 (ЛАБОРАТОРНЫЙ НОМЕР A<SB POS="POST">1</SB>), ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ К РОСТУ, РАЗМНОЖЕНИЮ И ОДНОВРЕМЕННОМУ СИНТЕЗУ АРИСТОЛОХИЕВЫХ КИСЛОТ. ПОСЛЕ 49 СУТ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА АГАРИЗОВАННОЙ СРЕДЕ ВЫХОД СУХОЙ МАССЫ КАЛЛУСОВ С ОДНОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ КОЛБЫ СОСТАВЛЯЕТ 540-750 МГ. СОДЕРЖАНИЕ АРИСТОЛОХИЕВЫХ КИСЛОТ В КУЛЬТУРЕ 0,24-0,60%, ИЗ НИХ АРИСТОЛОХИЕВЫЕ КИСЛОТЫ 1 И 4 СОСТАВЛЯЮТ 0,21-0,54%, А АРИСТОЛОХИЕВЫЕ КИСЛОТЫ Д И ЕЕ Β=D-ГЛЮКОЗИД -0,03-0,15% ОТ СУХОЙ МАССЫ КАЛЛУСОВ. 1 ТАБЛ.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1I) (51) 5 С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4425856/31 — 1 3 (22) 12.05.88 (46) 23.03.90. Бюл. h - 11 (71) Биолого-почвенный институт

Дальневосточного отделения AH СССР (72) В.П.Булгаков и Ю.Н.Журавлев (53) 663.15(088.8) (56) Тахтаджян А.Н. Флористические области земли. — Л., 1978, 247 с.

Phytorhemistry, 1982, ч. 21, У 7, р. 1759-1762. (54) IUTAMM КАЛЛУСНОИ КУЛЬТУРЫ ARISTOLOCHIA MANSHURIENSIS — ПРОДУЦЕНТ

АРИСТОЛОХИЕBbK КИСПОТ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности. Целью

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промьппленности.

Целью изобретения является новый штамм каллусной культуры многолетней лианы (кирказона маньчжурского)

Aristo1ochia manshuriensis Kom, обладаннций способностью к росту, размножению и одновременному синтезу аристолохиевых кислот.

Штамм Aristolochia manshuriensis

А получен селекцией каллJcHOH тка1 ни кирказона маньчжурского. Хранится в специализированной коллекции культивируемых клеток высших растеэ ний ВСКК-BP Института физиологии растений имени К.А.Тимирязева под

М 33 и характеризуется следующими признаками.

2 изобретения является новый штамм культуры многолетней лианы (киркаэона маньчжурского) Aristolochia manshuriensis ВСКК-ВР 11 33 (лабораторный номер А1), обладающий способностью к росту, размножению и одновременному .синтезу аристолохиевых кислот. После

49 сут культивирования на агариэованной среде выход сухой массы каллусов с одной культуральной колбы составляет 540-750 мг. Содержание аристолохиевых кислот в культуре

0,24-0,60Х, иэ них аристолохиевые кислоты 1 и 4 составляют 0 21-0 54Х а аристолохиевые кислоты Д и ее PD-глюкозид 0,03-0,15Х от сухой массы каллусов. 1 табл.

1 1орфологические и цитологические признаки. Растущая каллусная культура представляет собой ткань плотной консистенции желто-коричневого цвета. Имеет слабый запах эфирных масел, горьковатый вкус. На разрезе ткань бело-желтого цвета, упругая, часто содержит зоны желтой окраски.

Популяция состоит из клеток меристемного типа овальной формы. Длина клеток 18-48 мкм, ширина 9-24 мкм.

Клетки содержат хорошо раэличимун цитоплазму, при окраске ацетокармином видны ядра размером 6-8 мкм, содержащие интенсивно окрашенные ядрышки и хромоцентры. максимум митотической активости наблюдается на 17-й день культивирования. Количество клеток, X: имеющих 28 хромосом (дипло1551736

440

0,025

0,025

0,25

0,82

37,3 идный,набор) 32-40; 24 хромосомы 2226; менее 24-х хромосом 24-28; более

28 хромосом 8-14.

Физиологические признаки. Цикл выращивания характеризуется S-образной кривой с лаг-фазой (до 7 сут), фазой экспоненциального роста (7-21 сут), линейной фазой (21-42 сут), фазой замедления роста (42-49 сут) и стационарной фазой (49-56 сут).

Ростовой индекс культуры при выращивании на агаровой питательной среде за 49 сут роста составляет 19,920,7 для каллусов начальной массой

60 мг, содержание сухого вещества

10 — 12Х.

Фитохимическая характеристика.

Штамм является продуцентом аристолохиевых кислот — веществ, обладающих 20 противоопухолевым действием. Суммарное содержание аристолохиевых кислот в культуре составляет 0,24-0,607 от сухой массы. При этом содержание аристолохиевых кислот 1 и 4 составля- 25 ет 75-90Х от общего количества кислот, а содержание аристолохиевой . кислоты Д и ее р-D-гликоэида 25-107..

Пример. В колбы Эрленмейера на 300 мл разливают по 75 мл агариэо- 3р ванной питательной среды при рН 5,6 следующего состава, мг/л:

Нитрат калия 2500

Сульфат аммония 170

Дигидрофосфат калия 170

Хлорид кальция, 2-х води.

Сульфат магния, 7-и води. 370

Борная кислота 6,2

Сульфат марганца, 4-х води, 23,3

Сульфат меди, 5-и води.

Хлорид кобальта, 2-х води.

Сульфат цинка, 7-и води. 8,6

11олибдат натрия, 2-х води, Иодид калия

Сульфат железа, 7-и води. 27,8

Динатриевая соль

ЭДТА, 2-х води.

0,2

Гидрохлорид тиамина

Гидрохлорид пиридоксина

Никотиновая кислота

0 5

0,5

5,0

Гидрохлорид цистеина мезо-Иноэит

Гидролиэат каэеина

6-Бензиламинопурин

Индолилуксусная

6000

Ф и р м у л а и з о б р е т е н и я!

Штамм каллусной культуры Aristolochia manshuriensis ВСКК-ВГ 11 - 33 продуцент аристолохиевых кислот. кислота

Сахароза

Агар

Дистиллированная вода До I л

Колбы со средой стерилизуют при

117 С в течение 20 мин, затем в асепо тических условиях в каждую колбу помещают по три инокулята, которые изолируют из исходного каллуса в виде кубиков со сторонами 4 мм. Начальный вес каждого инокулята 60 мг.

Колбы с культурами инкубируют в темноте при 25+1 С.и относительной влажности воздуха 70+10K в течение

49 сут. Выросшую биомассу высушивают и характеризуют по росту и содержанию аристолохиевых кислот.

После 49 сут культивирования выход сухой массы каллусов с одной культуральной колбы составляет 540750 мг. Содержание аристолохиевых кислот в культуре 0,24-0,60K, иэ них аристолохиевые кислоты I и 4 составляют 0,21-0,547, а аристолохиевые кислоты Д и ее P-D-глюкозид 0,030,15ь от сухой массы каллусов.

Характеристика полученных партий каллусных культур представлены в таблице.

11олученный штамм Aristolochia

manshuriensis ВСКК-HP М 33 пбэволяет при выращивании на одной питательной среде получить одновременно с хорошим ростом высокое содержание аристолохиевых кислот. Содержание аристолохиевых кислот в клетках штамма превышает их содержание в интактном растении в I 3 раза.

1551736

Содержание аристолохиевых кислот, 7 от сухой массы ткани

Партия сырья

Аристоло- Общая хиевая сумма кислоты Д и ее глюАристолохиевые кислоты

1 и 4 козид

Составитель Л.Минеева

Редактор Н.Рогулич Техред М.Дидык Корректор С.Черни

Тираж 483

Подписное

Закаэ 309

ВНИИПИ осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-иэдательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина, 101

Масса сухой ткани, мг на один культураль ных сосуд

570

0 54

0,45

0,45

0,31

0,21

0,32

0,31

0,44

0,06

0,15

0,10

0,04

0,03

0,08

0,04

0,06

0,60

0,60

0,55

0 35

0,24

0,40

0,35

0,50