Способ получения s-аденозилметионина

Способ получения s-аденозилметионина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии, в частности к биотехнологическим способам получения значительных количеств как немеченных, так и меченных радиоактивными изотопами препаратов S-аденозилметионина. Цель изобретения - увеличение выхода S-аденозилметионина на 1 г ткани печени и получение меченного радиоактивными изотопами S-аденозилметионина с высоким включением метки. Цель достигается путем внутрибрюшинного введения животным за 2 - 6 ч до забоя 150 - 250 мг/кг массы тела диоксипропиладенина и за 20 мин до забоя L-метионина в дозе 100 мг/кг массы тела, извлечения печени, гомогенизации, центрифугирования, экстракции эфиром, хроматографии на фосфоцеллюлозе CELLEX-P, элюции целевого продукта и лиофилизации. Изобретение позволяет получить выход S-аденозилметионина 2,5 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченного S-аденозилметионина достигает 20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ в области экспериментальной онкологии и биотехнологии S-аденозилметионином. 2 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„,Я0„„15520

А1 (51)5 G 01 N 7/00, 7/06, С 12 P 19/40

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTGPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

f.

1 !

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

flail ГННТ СССР

1 (21) 4447422/30-13 (22) 24.05 ° 88 (46) 23 ° 03 ° 90. Бюп. У 11 (71) Всесоюзный онкологический научный центр АМН СССР (72) Ю.В.Букин и Е.Н.Орлов (53) 547.85.04 (088.8) (S6) Eloranta I.0. — Biochem. J., 1977, ч.166, р.521-529. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ S-АДЕНОЗИЛИЕТИОНИНА (57) Изобретение относится к биохимии, в частности к биотехнологическим способам получения значительных количеств как немеченых, так и меченых радиоактивными иэотопами препаратов S-аденозилметионина. Цель изобретения — увеличение выхода Sадеиозилметионина на 1 r ткани печенк и получение меченого радиоакИзобретение относится к биохимии, в частности к способам получения веществ, обеспечивакацих процессы трансметилирования, трансаминопропилирования, транссульфирования в организме и используемых в экспериментальной онкологии, генной и белковой инженерии.

Целью изобретения является увеличенне выхода S-аденоэилметионина на

1 r ткани печени и получение меченого радиоактивными иэотопами S-аденозилметионина с высоким включением метки.

На фиг.1 представлен график динамики изменения содержания S-аденоэилметионина в ткани печени крыс пос.-, 2 тивными изотопами S-аденозилметионина с высоким включением метки.

Цель достигается1путем внутрибрюшинного введения животным за 2-6 ч до забоя 150-250 мг/кг массы тела диоксипропиладенина и за 20 мин до за- . боя L-метионина в дозе 100 мг/кг массы тела, извлечения печени, гомогенизации, центрифугирования, экстракции эфиром, хроматографии на фосфоцеллюлозе Се11ех-Р, элюции целевого продукта и лиофилизации. Изобретение позволяет получить выход S-аденоэилметионина 2,5 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченого

S-аденоэилметионина достигает

20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ в области экспериментальной онкологии и биотехнологии S-аденозилметионином. 1 з.п. ф-лы, 2 ил. ле введения диоксипропиладенина; на фиг.2 — график динамики изменения радиоактивности функций S-аденозилметионина, полученных после хроматографии экстрактов ткани печени крыс после внутривенного введения Ь-(u- С), Ф1., .метионина., I, Основу предлагаемого способа,обеспечивающую достижение поставленной цели, составляет. предварительное (эа

2-6 ч до забоя) внутрибрюшинное вве- 1, девке крысам производного аденина (диоксипропиладенина), который способствует накоплению Б«аденозилметионина в клетках печени..Данный прием ,позволяет получить 6 кратное увели1552073 чение количества S-аденозилметионина на 1 r печени крыс по сравнению с известным способом. Получение в этих условиях меченого соединения обеспе" чивается за счет внутривенного введения 2,5"-, 10 мКи/кг массы тела животных меченого радиоактивными изотопами Ь-метионина за 4-6 мин до забоя.

Предлагаемый способ дает возможность получения меченого радиоактивными изотопами ь-аденозилметионина с высоким уровнем включения метки.

Пример 1. Самцам белых беспородных крыс весом около 200 г эа

4 ч до забоя внутрибрюшинно вводят диоксипропиладенин в дозе 200 мг/кг массы тела в концентрации 200 мг/мп физиологического раствора. Затем за

20 мин до забоя внутрнбрюшинно вводят L Net в дозе 100 мг/кг массы тела. Животных забивают тоанслокацией шейного позвонка, извлекают печень, охлаждают в ледяном физиологическом растворе и гомогенизнруют с 1U H G и 4Ч 503-ной трихлоруксусной кислоты. Затем гомогенат центрифугируют в течение 20 мин при 6000 об/мин, су-! пернатант трижды экстрагируют 1U эфира, водную фазу фильтруют и на,носят на колонку (1 7 см) с Се11ех-Р.: уравновешенную 1 иЫ КС1. Примеси отделяют пропусканием 100 мл 50 <8i НС1, АйоКе элюируют с 20 мл 0,5 M НС1 и элюат лиофилизируют.

Содержание АйоИе после указанных воздействий составляет в печени оКо ло 2,5 мкг/г ткани. Количественное содержание S-аденозит:иетионина определяют спектрофотометрически при

257 нм.

П р и и е р 2. Проводят аналогично примеру 1, но для получения

Айо1|ей, меченого радиоактивнымн изотопами, дополнительно за 5 иин до забоя внутривенно вводят 5 мКи/кг массы тела 31 - метил в C) -AdoMet c 4 ( удельной активностью 40 мкКи/ммоль.

При этом выделяют около 60 икКи

Ш-(метил- С -Adol iet: или 30 мкКи

L-(метил- "

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить 2,5 мкмоль

Б-аденозилметионина на 1 г ткани печеки крыс, а после введения меченого метионина выделяют препараты DL-(метил- Cj-Ы-аденоэилметионина или 1.И

-(метил- С)-Ы-аденоэилметионина с

И удельной активностью 20 мкКи/ммоль.

Чистота продукта при этом составляет более 957.

Полученные предлагаемым способом

10 препараты S-аденозилметионина по своим характеристикам (степени гомогенности, удельной активности) удовлет- . воряют требованиям, предъявляемым к этому соединению при его использовании для серийных определений активностей специфических ферментов обмена S-аденоэилметионина, а также в исследованиях процессов метилирования различных клеточных метаболитов, для которых S-аденозилметионин является донором метильных групп. Кроме того, предлагаемый метод получения Б-аденозилметионина характ еризуется методической доступностью и быстротой.

Применение .предлагаемого способа облегчит обеспечение работ в области экспериментальной онкологии и биотехнологии необходимым количеством крайне мобильного соединения — S-аденозилметионина. 4

Формула изобретения

1. Способ получения S-аденозилметионнна, включающий внутрибрюшинное введение L-метионина, забой животного, извлечение печени, ее гомогенизирование, экстракцию эфиром, хроматографию на фосфоцеллюпозе Се11ех-P, лиофилизацию выделенного продукта, отличающийся тем, что, 40 с целью увеличения выхода S-аденозилметионина на 1 г ткани печени, за 2-6 ч до забоя животным вводят диоксипропиладенин в дозе 150—

250 мг/кг массы тела в концентрации

150-250 мг/мл физиологического раствора.

2. Способ по п. 1, о т л .и ч а юшийся тем, что, с целью получения меченого изотопами S-аденозилметиоьжна с высоким уровнем включения метки, за 4-6 мин до забоя животным дополнительно внутривенно вводят 2,5-10 мКи/кг массы тела ме— ченого радиоактивными изотопами Ь-метионина.

1552073 9

1Ю ь Ю

Время, ч з

Ъ м 1266 %

g 860

М

OM

- а

6.8 Ш дрем, prw

ФАЗ

Составитель Н.Александрушкнна

Редактор И.Дербак Техред М.Ходанич Корректор А.Обручар

Заказ 325 Тира к 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская -наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101