Способ получения аффинного сорбента для очистки лектинов

Способ получения аффинного сорбента для очистки лектинов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии, касается синтеза аффинных сорбентов и может быть использовано для очистки лектинов. Целью изобретения является увеличение сорбционной емкости сорбента. В предлагаемом аффинном сорбенте нерастворимая при PH 5,0 часть гликопротеидов куриного яйца содержит богатый углеводами гликопротеид овомуцин, который путем поперечной сшивки глутаровым альдегидом может быть превращен в гель, пригодный для аффинной очистки лектинов. 1 табл.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4377008/3 1-13 (22) 08 .02.88 (46) 07,04.90. Бюл. В 13 (71) Львовский государственный медицинский институт (72) В.А.Антонюк (53) 615.779.94 (088.8) (56) Луцик М.Д. Украинский биохимический журнЮ, 1984, т. 56, 432-436 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АФФИННОГО СОРБЕНТА ДЛЯ ОЧИСТКИ ЛЕКТИНОВ (57) Изобретение относится к биотехИзобретение относится к биотехнологии, касается синтеза аффинных сорбентов и может быть использовано для очистки лектинов.

Целью изобретения являетбя увеличение сорбпионной емкости сорбента.

Предлагаемый способ получения аффинного сорбента заключается в том, что нерастворимую при рН 5,0 часть гликопротеидов куриного яйца, содержащую богатый углеводами гликопротеид овомуцин, обрабатывают глутаровым альдегидом для поперечной сшивки и получения Геля, пригодного для аффинной очистки лектинов.

Пример. Белки 20 куриных яиц отделяют от желтка, затем их подкисляют до рН 5,0 10Х-ной ацетатной кислотой, образующийся осадок отделяют центрифугированием 10 мин при 6000 g, затем его взвешивают и тщательно перемешивают с 252-ным раствором глутарового альдегида, добавленного до (51)5 В 01 J 20/22 С 12 N 11/00 нологии, касается синтеза аффинных сорбентов и может быть использовано для очистки лектинов. Целью изобретения является увеличение сорбционной емкости сорбента. В предлагаемом аффинном сорбенте нерастворимая при рН 5,0 часть гликопротеидов куриного яйца содержит богатый углеводами гликопр*теид овомуцин, который путем поперечной сшивки глутаровым альдегидом может быть превращен в гель, пригодный для аффинной очистки лектинов ° 1 табл.

17-ной конеч ной концентра ции, и оставляют на 24 ч для поперечной сшивки. Затем полученный гель измельчают путем перетирания через металлическое сито с диаметром отверстий 0,25 мм, полученные частички промывают дистиллированной водой, затем последовательно обрабатывают 1_#_-ным раствором трис-(оксиметил)аминометана и 2-ЗЕным раствором глицина по 12 ч при

4 С. Полученный гель промывают сооть ветствуюшим буферным раствором и используют в работе. Для улучшения гид родинамических свойств полученного геля рекомендуется выдерживание его в -ечение 30 дней в ЗЕ-ном растворе фенола. Обработанный таким образом гель значительно меньше изменяет свои размеры в кислой и щелочной средах. Выход аффинного сорбента около

200 см из 20 куриных яиц. Хранить гель необходимо в 1-37.-ном растворе фенола. При таком хранении на протя1554961

DGaLNAc

DGaLNAc

DGaL

P-DGàL

Олиг осахарид

DGaLNAc 3DGaL

DGaL

DGaL

P -DGaL

87

87

87

87

?5

92

50 жении двух лет не наблюдается заметных изменений свойств геля. При работе его необходимо отмыть от фенола и уравновесить соответствующим буфер5 ным раствором. Гель можно использовать в работе многократно.

Сорбционная способность полученного аффинного сорбента излучается по следующей методике. 10

К равному объему аффинного сорбента, отмытого от консерванта и уравновешенного 0,2 М ацетатным буферным раствором, рН 6,5, содержащего по 1 мМ СаС1 и МпС1, добавляют равный объем раствора лектина с титром гемягглютиняции от 1:64 до 1:2048 (в зависимости от природы лектина}.

Смесь перемеып вают в течение 10 мин при комнатной температуре, а затем после оседания геля на дно пробирки измеряют титр гемагглютинации надосадочной жидкости. Если титр гемагглютинации B нядосадочной жидкости уменьшается в два раза, то лектин на геле не сорбируется, так как уменьшение титра гемагглютинации идет за счет разбавления раствора в два раза. Если наблюдается уменьшение титра гемагглютинации в 4 раза, то на сорбенте .сорбируется примерно 507. лектина, если титр гемагглютинации уменьшается в 8 или 15 раз, то на геле сорбируется соответственно 75 и 873 лектина. Чем больше снижается

35 титр гемагглютинации в надосадочной .жидкости, тем больше сорбционная емкость сорбента по отношению к данному лектину.

Семена ширицы хвостатой

Семена ширицы запрокинутой

Омела белая

Семена арахиса

Семена фасоли обыкновенной

Семена лимской фасоли

Кора бузины красной

Семена сои, Семена бобовника анагиролистного

Результаты изучения сорбции лектинов различной углеводной специфич-, ! ности на предлагаемом геле представ лены в таблице.

Анализ полученных результатов показывает, что областью применения предлагаемого афинного сорбента является очистка N-ацетил-D-галактозамин- и D-галактозоспецифичных лектинов, а также лектинов, специфичных к олигомерам И-ацетил-D-глюкозамина, сорбция которых на предлагаемом аффинном геле высока. Аффинный гель непригоден для очистки D-глюкозоспецифичных и Ь-фукозоспецифичных лектинов.

Десорбцию лектина с геля можно осуществлять либо специфическим иНгибитором (углевод), либо боратным буферным раствором (pH 8-10), либо понижением рН до 3-4 с помощью кислоты или буферного раствора. Выбор способа десорбции необходимо проводить в каждом конкретном случае в зависимости от природы лектина.

Формула изобретения

Способ получения аффинного сорбента для очистки лектинов, включающий поперечную сшивку источника гли-,, копротеидов из куриного яйца глутаровым альдегидом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения сорбционной емкости по отношению к

D-галактозо- и N-ацетил-D-галактозаминспецифичным лектинам, в качестве источника гликопротеидов используют фракцию гликопротеидов, нерастворимую при рН 5,0.

1554961

Продолжение таблицы

LFuc

87

П р и м е ч а н и е. Прочерк обозначает отсутствие сорбции на гелях.

Составитель В. Варламов

Г

Редактор И.Горная Техред Л.Олийнык Корректор О.Кравцова

Заказ 518 Тираж 410 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Кора бобовника анагиролистного

Клубни картофеля

Зародыши пшеницы

Семена гороха

Семена чечевицы

Семена конских бобов (DGLcNAc)+ (DGLcNAc)

Виап, DGLc

Виап, DGLc

ВИап, 001.с