Способ определения активности холинацетилтрансферазы в ткани сердца

Способ определения активности холинацетилтрансферазы в ткани сердца

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы (ХАТ). Цель - повышение чувствительности и упощение способа. Сущность способа состоит в том, что при радиохимическом определении холинацетилтрансферазы образовавшийся ацетилхолин выделяют на микроколонках с Дауэксом 1 в ацетатной форме, элюируют дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционный флакон при соотношении объемов Дауэкс: вода = 1:1,2 - 1:5.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (111 (51)5 G 01 N 33 68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTGPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4334021/28-14 (22) 26.11.87 (46) 07,04.90. Бюл. Ф 13 (71) 1-й Иосковский медицинский институт им. И.М.Сеченова, Институт медико-биологических проблем и Научно-исследовательский институт мозга

Всесоюзного научного центра психического здоровья АИН СССР (72) С.В.Тришкин, К.Б ° Винницкая, В.А.Кузнецов и С,IO.Ïoíoìàðåâ (53) 612.015(088.8) (56) J.Physiol 1982, v. 322, р.53-69, Изобретение относится к медицине а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы (ХАТ).

Цель изобретения — повышение чувствительности и упрощение способа путем замены экстракции на хромато14графическое выделение С-ацетилхолина (С-АХ), позволяющее более

14 ° гаолио выделить продукт реакции.

Пример. Цельное сердце крысы гомогенизируют в реде, содержащей

200 мИ NaC1, 40 мМ натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), 10 мМ ИВС1, 0,2 мМ эзерин-салицилата и 0 5% Тритона

Х-100, в соотношении 1: 19 (м/v). Гомогенат инкубируют в среде, содержащей 280 мМ Na01, 24 мМ натрий-фосфатный буфер (рН 7,4), 6 мИ ИрС1

0 2 мМ ээерин-салицилата, 10 мИ хо;лин-хлорида, 0,2-0,25 мИ С-АсКоА

1Ф

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ХОЛИНАЦЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ В ТКАНИ СЕРДЦА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы.

Цель — повышение чувствительности и упрощение способа. Сущность способа состоит в том, что при радиохимическом определении холинацетилтрансферазы образовавшийся ацетилхолин выделяют на микроколонках с Дауэксом I в ацетатной форме, алюируют дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционный флакон при соотношении объемов Дауэкс:вода=1: 1,2-1:5. (5 0,5 мг/мл бычьего сыво роточного альбумина и 0,3% Тритона

Х-100, Контрольные образцы, кроме того содержат 21((И Br-AX. Объем исследуемого гомогената 30 мкл, финальный объем инкубируемой смеси 50 мкл.

Гомогенаты проб инкубируют в течение

30 мин при 37 С.

Остановку ферментной реакции осуществляют добавлением 50 мкл 2 М уксусной кислоты.

Далее пробы наносят на микроколонки с 500 мкл Дауэкса 1х4 100-200 меш в ацетатной форме и элюируют 700 мкл дистиллированной воды непосредственно в сцинтилляционный флакон с диоксановым сцинтиллятором, содержащем на 1 л раствора: 4 r ППО, 0,2 r ПОПОП и 100 г нафталина. Количество радиоактивности измеряют на сцинтилляционном счетчике.

1555671

Формула изобретения

Способ определения активности холинацетилтрансферазы в ткани сердца

Составитель А.Сабурова

Техред М.Дидык Корректор M,Kó÷åðÿâàÿ

Редактор Н.Бобкова

Заказ 554 Тираж 510 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г Ужгород, ул. Гагарина, 101

Активность обусловленной ХАТ оценивают по разнице радиоактивности .между суммарным синтезом С-AX Ф (5677,6 расп./мин) и Br-АХ чувствительным синтезом С-АХ (3665,8 расп

/мин) и она равна 2011,8 расп./мин (1,829х10 моль; 1,016х10 моль/с и бх10 " кат/г ткани). путем гомогенизации, добавления холина и 1 " С)-ацетилкоэнзима А, инкубиг 1ф рования, остановки реакции, выделения продукта реакции, подсчета радиоактив./ ности, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, радиоактивный продукт реакции выделяют на

1р микроколонке с Дауэксом I в ацетатной форме, элюирование проводят дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционную жидкость при соотношении объемов Дауэкс:вода=1:0,6 — 1:S.