Способ получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот

Способ получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, применяемых в кормопроизводстве и пищевой промышленности, а также к способу получения нуклеозидов, которые могут быть применены как препараты в медицине и в научных исследованиях. Цель изобретения - расширение функциональных возможностей способа: получение из дрожжей одновременно двух продуктов - дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот и нуклеозидов. Способ обработки дрожжей заключается в следующем: дрожжевую суспензию нагревают в течении 15-30 мин на кипящей водяной бане, затем осадок отделяют центрифугированием, промывают его, разводят водой, устанавливают PH=9,0-10,5. К дрожжевой суспензии добавляют ферментный препарат 5Ъ - экзонулеазы и щелочной фосфатазы из ACTINOMYCES COELICOLOR смесь при непрерывном перемешивании выдерживают при температуре 37-40°С. Спустя 30 минут после начала процесса гидролиза, в дрожжевую суспензию добавляют хлористый магний в концентрации 5<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-3</SP> - 1<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-2</SP> М. Длительность гидролиза 5-6 ч. Дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот отделяют от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды. 2 табл., 1 ил.

СОЮЗ СОВЕТ1НИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕа1УБЛИН (51)5 С 12 1»1 1/08 // С 12 P 19 38

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A ВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 44) 6865/30-13 (22) 05.03.88 (46) 23.04.90 ° Бюл. ¹ 15 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) Т.В.Орлова, Т.В Д1ахова и С.А.Коновалов (53) 663.14:636.085(088.8) (56) Авторское свидете..còâî СССР ,№ 947186, кл. С 12 Р 19/38, 1981.

Петков П., Тулева Б., Костов В.

Намалявана съдържанието на нуклеиновите киселини в Saccharomyces carlsbergensis через въездействие с рибонуклеази. — Acta microbiol. bulg. № 3, 1979, 30-36.

Авторское свидетельство СССР № 767204, кл. С 12 Н 15/00, 1980. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ С НИЗКИИ СОДЕРЖАНИЕМ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, применяемых в кормопроизводстве и пищевой промышленности, а также к способу получения нуклеозидов, которые могут быть применеИзобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, применяемых в кормопроизводстве и пищевой промьппленности, а также к способу получения нуклеоэидов, которые могут быть применены как препараты в медицине и в научных исследованиях.

„„80„„3 558979 А 1 ны как препараты в медицине и научнь»х исследованиях. Цель изобретения — расширение функциональных возмож нос тей способа: получение иэ дрожжей одновременно двух продуктов дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот и нуклеозидов. Способ обработки дрожжей заключается в следующем: дрожжевую суспензию нагревают в течение 15-30 мин на кипящей водяной бане, затем осадок отделяют центрифугированием, промывают его, разводят водой, устанавливают рН = — 9,0-10,5. К дрожжевой суспензии добавляют ферментный препарат 5 -экзонуклеазы и щелочной фосфатазы из

Actinomyces coelicolor. Смесь при непрерывном перемешивании вьдерживают при 37-40 С. Спустя 30 мин после начала процесса гидролиза в дрожжевую суспенэию добавляют хлористый магний концентрации 5 -10 - 1 -10 И.

-1

Длительность гидролиза 5-6 ч . Дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот отделяют от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Целью изобретения является расширение функциональных возможнос тей способа за счет получения нуклеозидов.

На чертеже приведен график, поясняющий способ °

Способ осуществляют следующим образом.

1 558979

Суспензию дрожжей Saccharomyces

cerevisis.е прогревают на кипящей водяной бане в течение 15-30 мин, промывают водой, вводят в качестве

1 гйдролизующего агента препарат из культуры Actinomyces coelicolor u проводят гидролиз при 37-40 С, рН = 9,0 - 1 0,5 в присутствии хлористого магния в течение 5-6 ч, При этом одновременно получают два продукта: иуклеозиды и дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот.

Используемый ферментный препарат получают на основе известного штамма Actinomyces coelicolor ВКПМ S-464.

Пример 1. Навеску дрожжей

Saccharomyces cerevisiae в количестве 60 г разводят:в воде (1:5} и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой и берут навеску в количестве 38 r, разводят ее водопроводной водой до 48 мл и подщелачивают водным раствором амми- 25 ака до рН = 10,0, 0,8 г ферментного препарата

Actinomyces coelicolor (активность

5 -экзонуклеазы 51800 ед/r и фосфатазы 1036 ед/г) растворяют в 5 мл воды.

К полученной дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата 5 -зкэонуклеазы и щелочной фосфатазы и выдерживают при 37 С в те- чение 5 ч . В суспензию добавляют хло35 ристый магний концентрации 5 10 M через 30 мин после начала процесса.

Но скончании процесса осадок — дрожжи с.низким содержанием нуклеиновых кислот от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды, разделяют центрифугированием при 5000 об/мин в тетечение 15 мин. Остаточное содержаНие нуклеиновых кислот в дрожжах

0,53Х, степень гидролиза нуклеиновых кислот 88Х.

Надосадочную жидкость качественно анализируют с помощью жидкостной хроматографии под давлением в,0,05 М

Na-формиатном буфере с рН = 4,654,8. Результаты анализа показывают наличие в надосадочной жидкости нук" леозидов . гуанозина (2), аденозина (3), цитидина (4), уридина (1 ) (см, чертеж).

Пример 2. Навеску дрожжей

Saccharomyces cerevisiae разводят в воде (1!5) и нагревают на кипящей во

/ дяной бане в течение 20 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой, и берут навеску в количестве

24,3 г и разводят в 52 мл воды, водным раствором аммиака подщелачивают до рН = 9,0.

0,4 г ферментного препарата (активность 5 -зкзонуклеазы 45000 ед/г, активность фосфатаэы 915 ед/г) Actiromyces coelicolor суспендируют в

5 мл воды.

К дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата, раствор хлористого магния концентрации

1 ° 10 Ì, гидролиз проводят при 40 С в течение 6 ч. Ос та точное содержание нуклеиновых кислот в дрожжах

0,72Х, степень гидролиза нуклеиновых кислот 90Х.

Надосадочную жидкость качественно анализируют с помощью жидкостной хроматографии под давлением, как в примере 1. Результаты анализа показывают наличие в надосадочной жидкости нуклеозидов: гуанозина, аденозина, урицина, цитидина (см. чертеж).

Пример 3. Навеску дрожжей

Saccharomyces cerevisiae разводят в воде (1:5) и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30. мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой, берут навеску в количестве

47,3 г и разводят в 65 мл воды, водным раствором аммиака подщелачивают до рН = 10,5.

0,55 г ферментного препарата Actinomyces coelicolor (активность 5 -экзонуклеазы 51800 ед/г, фосфатазы

1036 ед/г) растворяют в 5 мл воды.

К дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата и вы" держивают при 38,5 С в течение 5,5 ч.

Через 30 мин после начала гидролиза добавляют хлористый магний концентрации 7,5 10 М. Осадок от надосадочной жидкости отделяют как в примере 1. Остаточное содержание нуклеиновых кислот в дрожжах 0,98Х, còåпень гидролиза нуклеиновых кислот

87 .

Надосадочную жидкость качественно анализируют как в примере 1 . Результаты показывают наличие в надосадочной жидкости нуклеозидов: гуанозина (2), аденозина (3 ), уридина (1 ), цитидина (4) (см. чертеж).

Характеристика качества получаемого белково-углеводного продукта, коолучаемый елково-угеводный проукт (дрожжи низким соержанием уклеиновых ислот ) Исх

Компоненты дро

Сырой протеин

38,5

4I,5

7 1

6,36

39, 98

Лип иды

Углеводы 20

42,3

Нуклеи новые кислоты

0,9

6,0

6,0

5,0

Таблица 2

Получаемый белков о-углеводный продукт (дрожжи с низким со держанием нуклеиновых кислот) та яда рты

АО/ВОЗ

Аминокислоты сходные рожжи

4,66

8,1

5,46

8,2

Лизин

Валин

Лейцин

5,5

5,5

7,9

7,9

7,9

Изолейцин

5,18

5,6

5,5

4,8

Треонин

5,53

5,1

2,1

Метионин

Фенилаланин

Триптофан

Цистин

Треонин

2,09

295 4,85

4,6

4,5

1,19

1,2

192

1,15

1,78

1,0

5,53

5,25

5,1

5 155897 торый может быть использован B Kop» мопроизводстве и в пищевой промышленности, дана в табл. 1 и 2.

Формула изобретения

1. Способ получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, включающий прогрев, последующее охлаждение, обработку клеток гндролизующим агентом с последующим отделением биомассы дрожжей от жидкой фазы, о т лич ающ ийс я тем, что, с целью расширения функциональных воэможностей способа эа счет получения нуклео эндов, суспензию дрожжей Saccharomyces cerevisiae прогревают на кипящей водяной бане в течение 15-30 мин, а в качестве гидролизующего агента используют ферментный препарат из Actinomyces

coelico1or ВКПМ S-464.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а— ю шийся тем, что гидролиз ведут при рН 9,0 — 10,5 в присутствии

9 6

5 10 3M — 1 10 2М хлористого магния при 37 — 40 С в течение 5-6 ч.

Та б лица I

1558979

Составитель Г. Осипов

Техред M.Õîäàíè÷ Корректор Т. Иалеп

Редактор Н, Гунько

Тирах 491

Подписное

Заказ 820

BHHHHH Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101