Способ получения пептидов

Способ получения пептидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к получению пептидов общей формулы:I: @ (II) где R<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">2</SB>-C<SB POS="POST">10</SB>-алкил, циклогексил, циклогексилметил

R<SB POS="POST">2</SB>-H

R<SB POS="POST">3</SB>--NH-CH(CH<SB POS="POST">3</SB>)-COOR<SB POS="POST">5</SB>

R<SB POS="POST">4</SB> - H, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">6</SB>-алкил

R<SB POS="POST">5</SB> - H, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">6</SB>-алкил, бензил, которые могут найти применение в медицине. Цель изобретения - получение новых, более активных пептидов. Способ включает ацилирование соединения формулы II, где R<SB POS="POST">2</SB>,R<SB POS="POST">2</SB> и R<SB POS="POST">4</SB> имеют указанные значения, соединением формулы R<SB POS="POST">1</SB>-CO- HAL, где R<SB POS="POST">1</SB> имеет указанные значения HAL - галоид, причем функциональные группы, не участвующие в реакции, могут быть защищены с последующим, в случае необходимости, избирательным удалением защитных групп. 1 табл.

СОЮЗ COBETCHMX

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ1ЕНЧЯ с „,...„. 1 "ль. - с- э с ф (5a "М

gp „ (C3 ! с0

I и

i%

ГУ;УДДРС.ЩЕИИЩ ЦСЦЩЕТ

ПО ИЗОЕРЕТЕНИЙЧ И ОТНРЬГВ НМ

ГАМ ГНМТ СССР (21 ) 4203671 /23-04 (62) 4028527/23 -04 (22) 1 7, 11 . 87 (23) 24, 11,86 (31 ) РСТ/US 85/02351; 900934 (32) 25 .11 . 85; 27, 08,86 (ЗЗ) US (46) 23.04.90. Бюл. Г 15 (71 ) Пфайзер Инк . (U S) (72) Джеимс Патрик Риззи (US). (53) 547. 964,4. 07 (088.8) (56) Вейганд-Хильгетаг. Сов ременные методы органической химии. И.: Химин, 1 964, с. 431 . (54) CHOCO ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ (57) Изобретение относитсн к полученчо пептидов общей дюрмулы д,-с(о)ин В Со®

СИ (e соиси® b-с 01 с

Изобретение относится к способу получении пептидов — новых биологических активных соединений, которые могут найти применение в медипине.

Пель изобретения — способ получении новых пептидов, обладающих более высокой нммунсстимулирующей активносT5 IO

Пример 1. 11-Изовалерил-Ргамма-глутамип-гпипил-0- алании

1А. Хлористоводородная соль слож- ного бензилового эфира глишюл-Э-ала нина, „Я0„„156ОО58 (11 1 5 С 07 К 5! 06 „А 61 К 37 сс O? щ-,=д, к=х .=-с==ъ.= —.=-:=. =H 2N g 3 С() ОВ ц

СН

1 - 0(П (cH )., есщискГйz3 — с где R< — С -С о-ялкил, пиклогекснл. пиклогексилметил ? — 1!; Ч.-. — МН--

CH(CH3) -COOR; R+ - Н, С,-С,.— лк: л;

El

В., — Й, С,-С -алкил, бекэип, которве г могут найти и римекен ие в медиан - е .

Пель изобретения — получение новых, более активных пептидов, Способ в ..нюхает яцилировяние соединения Ьормулн

Ii, где R, Л.з и,, имеют укяэякнь,е значекия, соединением Формула Р„

CO" Hal, где R < имеет укаэанные зкя. е— нив, На1 - гялоиц, причем дьуккциокялькые группьс,, ке участвующие в рея.:<пик могут бьгть защищены с последуюг, м, в случае необходимости, избирятелькь удалением защитных г рупп . 6 табл.

К холодному (О С) раствору 100 мл хлористого метилена, содержащего 10 (57 ммоль) N-трет-бутилокси-кярбо— нилглииина, 20 г (57 ммоль) соли п-толуопсульфокислоть сложного б "нэклового эфир а П -аляниня и 5, 7 7 г (57 ммоль) триэтиламина, добявл. ..ют

12 3 r (60 ммоль) дипиклогекс пкярбодиимида. Полученную реякцйокную смесь оставлжат длн нагревякик до комнат sov температуры. Через 18 ч эту снес-:. отфильтровывают и филь трят кокпектрч руют в словах вакуума. Ос-.я г<-.к цяст1 560058 воряют в 200 мл этилацетата и органи" ческий слой промывают 2,5 .-ной хлористоводородной кислотои водой, на4 сыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния и выпаривают при пониженном давлении. К полученному маслу добавляют 200 мл диоксана, насыщенного хлороводородом. Через 30 мин добавляют 400 мл простого диэтилового эфира и полученный продукт фильтруют под слоем азота. Выход 1 О, 9 r (70%).

1 В. N-трет-Бутоксикарбонип-Э-гамма-глутамнп(альфа-бензиловый эфир)— оксисукцинамидный эфир.

К 1500 мл хлористого метилена, содержащего 50 г (143 ммоль) альфа-бензилового эфира N-трет-бутоксикарбо- 2р нип-Э-гамма-глутаминовой кислоты и

17,3 r (150 ммоль) N-оксисукцинамида, добавляют 30,9 r (15 ммоль) дицнклогексилкарбодиимнда и полученную реакционную смесь оставляют для пере- 25 мешивания при комнатной температуре в течение 18 ч . Твердые вещества фильтруют и фильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток превращают

1 в порошок с помощью простого диэтило- 30 вого эфира и твердые вещества фильтруют под слоем азота. Выход 43,7 r (68 ) .

1 С. Хлористоводородная соль слож ного бензилового эфира Э-гамма-глу35 тамил (альфа-бензиловый эфир) -глицилЭ-алан ина . раствор, содержа щий 4,3 « (9,45 ммоль) N-трет-бутоксикарбонип-, Э-гамма-глутамип (альфа-бензиловый 40 эфир) -оксисукцинамидного .эфира, 2, 71 г (9, 92 ммоль) хлористоводородной соли:, сложного бензилового эфира глицил-Эаланина и 1,0 г (9,92 ммоль) триэтипамина в 100 мл хлористого метилена 45 оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 18 ч, а затем концентрируют в условиях вакуума. Остаток растворяют в 200 мл этил ацетата и раствор промывают. 2,5%-ной хлористоводородной кислотой, водой, 10 .-ным карбонатом калия и раствором; рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и вью паривают при пониженном давлении. Остаток обрабатывают 200 мл диоксана, насыценного хлороводородом, и оставляют для перемешивания в течение 2 ч.

Этот раствор концентрируют до сухого состояния в условиях вакуума, а остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира, Твердые вещества фильтруют под слоем азота, Выход 3,41 г (73 ) .

1D. N-Изовалерип-Э-гамма-глутамнпглицил Э-алании.

К раствору 1,0 .г (2,03 ммоль) хлористоводороднои соли сложного бензилового эфира D-гамма-глутамил (альфабензиловый эфир) глипнл-Э-аланина и Я 6 мг (6,09 ммоль) триэтиламина в

50. мл хлористого метилена добавляют

480 мг (4,06 ммоль) хлорангидрида изовалериановой кислоты н реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 80 ч. Хлористый метилен выпаривают в условиях вакуума и остаток растворяют в этилацетате, Полученный раствор промывают 2,5%-ной хлористоводородной кислотой, водой, 10 -ным карбонатом калия, водой и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира, фильтруют под слоем азота (910 мг) и

700 мг растворяют в 50 мл метанола.

К этому раствору добавляют 200 мггидроокиси палладия и эту смесь взбалтывают в атмосфере водорода при давлении 50 фунтов на 1 кв.дюйм в течение 3 ч. Катализатор фильтруют и растворитель удаляют в условиях вакуума. Остаток растворяют в воде и лиофилизируют с образованием 364 мг.

Выход целевого продукта 65 ..

МИР-спектр (ЭИБО-Йt;) ч. на млн:

8,25-8,05 (m, ЗН); 4,33-4,12 (m, 2Н);

3,72 (d, Л = 6 Гц, 2Н); 2,21 (й, J =

= 8 Гц, 2H); 1,88-1,68 (m, 1Н); 2,081,9 (m, 4Н); .,1,28 (d, J = 8 Гц, ЗН);

0,9.(d, J=7 Гц, 6Н), Пример 2 ° При использовании в качестве исходных материалов хлорангидрида соответствующей кислоты и хлористоводородной соли сложного бензилового эфира D-гамма-глутамнп(альфа-бензиловый эфир) -глицил-D-аналина и выполнении процедуры, описанной в примере 1Э, получены соединения, перечисленные в табл. 1 ° Все соединения получены с выходом 30-75%.

Пример 3, N-(3-(S)-Иетилгептаноип) -D-гамма-глутамип-? -аланил-Эалании.

0058 б

5 156

3А. Сложный бензиловый эйир N-третбутоксика рбонип-!--алан ил-Э-аланина

К раствору 23,0 r (0,.121 моль)

N-трет-бутокс и-карбонил-Е-аланина, 42, 6 г (О, 1 21 моль) соли па ра-толуолсульфокислоты сложного бензилового эфира D-.àëàíèíà и 17 мл (0,121 ммоль) .триэтипамина в 400 мл холодного (О С) хлористого метилена по каплям добавляют 25,0 г (0,121 моль ) дициклогексипкарбодиимида в 100 мл хлористого метилена. После перемешивания.в течение ночи при комнатной температуре твердые вещества фильтруют и Ьипьтрат концентрируют до образования масла.

Остаток растворяют в 400 мл этилацетата, который промывают -1 -ньм раствором хлористоводородной кислоты, l О -ным раствором карбоната калия, водой и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют до образования масла. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтило,вого эфира и полученные твердые вещества фильтруют под слоем азота, 16,0 г. Дополнительные 12,7 г пелевого продукта крысталлизуют на Ьипьтрате.

ЗВ. Хлористоводородная соль сложного бензилового эфира L-аланил-Эаланина.

Берут суспензию 28,7 r сложного бензилового эфира И-трет-бутоксикарбонип-! -аланил-D-аланина в 150 мл диоксана, насыщенного хлоровородором.

Эту смесь перемешивают в течение 4 ч ,при комнатной температуре. Растворитель удаляют в условиях вакуума и остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира. Полученные твердые вещества фильтруют, вновь растворяют в хлористом метилене и раствор концентрируют до достижения объема, равно го 1 50 мл . Дсбавляют простой эфир и твердые вещества, фильтруют под слоем азота. Выход 22,0 r (35 ) .

3С. Сложный бензиловый эфир N-третбутоксикарбонип-Э-гамма-глутамип (альфа-бенз иловый эфир) -L-аланил-D-аланина .

К суспензии 5,0 г (9,54 ммоль) дициклогекс илам ина аль Ьа-6 енз илового ., эфира N-трет-бутоксикарбонип-Э-гаммаглутамина и 2,76 г (9,64 ммоль) хлористоводородной соли сложного бензилового эЬира L-аланил-D-аланина в

100 мл хлористого метилена, охлажденного до О С, добавляют 2,0 г (9,64 ммоль) диииклогексипкарбодиимида в 20 мл такого же растворителя.

После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре твердые вещества фильтруют и Ьильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток обрабатывают 150 мл этилацетата, твердые вещества фильтруют и фипьтрат промывают 1 Е-нбй хлористоводородной кислотой, 1 О .-ным раствором карбоната; каг.ия, водой и раствором рассола. Органическую фазу высушивают над суль— фатом натрия и концентрируют с образованием белого твердого вещества, которое превращают в порошок с помо-: щью простого эфира, в результате чего получают 4,I г целевого продукта, ЗЭ. Хлористоводородная соль сложного 6ензилового зАира D-гамма-глутамил (альоша--бензиловый эЬир) -.1-аланилD-аланина.

К суспензии 4,1 г (7,21 ммоль) сложного бензилового эЬира N-трет-бутокси-карбонип-Э-гамма-глутамип (альфа-бенз иловый эфир) -L-аланип-Э-аланина в 50 мл диоксана добавляют 100 мл диоксана, насыщенного хлороводородом, и реакгионную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, Растворитель удаляют в условиях вакуума и остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира. Выход 3,5 r.

ЗЕ. Сложный бензиловый эфир N-(3(S) -ме тип г еп тано кч )-Э -гамма -глутамил(альфа-бензиловый эАир) -! -аланип-Эаланина.

К 1,0 r (1, 98 ммоль) сложного бензилового эфира D-гамма-глутамип(альфа — б ен з илов ый эфир) -L-алан ил-Э-аланина и 0,833 мл (5,93 ммоль) триэтиламина в 50 мл хлористого метилена добавляют 390 мг (2, 37 ммоль) 3-(S) -Метилгептаноипхлорида и реакционную смесь перемешивают под слоем азота в течение 45 мин. Реакпионную смесь выливают в 150 мл этилацетата и органическую фазу промывают 10%-ной хлористоводородной кислотой, 1 0 .-ныл раст; вором карбоната калия, водой и раствором рассола. Органическую фазу высуп-ивают над сульфатом натрия и концентрируют до сухого состояния. Остаток превращают в порошок с помощью простого эфира и Ьипьтруют под слоем азота ° Выход 900 мг.

7 15600

3F. N- 3-(S) -Метилгептаноил-0-гамма-глутамип-1--аланил-0-алании.

Смесь 200 мг гицроокиси паляадия на угле и 900 мг сложного бензилового эфира N-(3-(S) -метилгептаноип )-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)L-аланип-D-аланина в 50 мл метанола взбалтывают в атмосфере водорода при давлении 50 фунтов на 1 кв, дюйм в. течение 1 ч. Катализатор фильтруют, а растворитель удаляют в условиях вакуума. К остатку добавляют воду и удаляют при пониженном давлении с образованием 492 мг продукта в виде бе- 15 лого твердого вещества, т.пл. 1 65

168 С.

ЯКР-спектр (IMSO-dg), ч. на млн .

8,21-7,98 (m, ÇH),; 4,41-4,1 (m, ЗН);

2,3-2, 06 (m, 4H); 2, 06-1,56 (m, 6Н); 20

1, 43 -1, 02 (m, 11 H); 1, 02-0, 73 (m, 6Н)

Пример 4. N-(3-(S, К)-утилгексаноип j-D-гамма-глутамип(альфа-нбутиловый э*ир) -глицил-Э-алании .

4А. Соль N-трет-бутоксикарбонип- 25

D-гамма-глутамил(альфа-н-бутиловый эфир)дипиклогексиламина.

Раствор 39 5 г (0,172 моль) ангидрида N-трет-бутоксикарбонил-Э-глутаминовой кислоты в 75 мл сухого тет- щ рагидрофурана в течение 2 ч по.каплям добавляют к раствору 47 мл. (0,516 моль) и 34,3 мл (0,172 моль), дициклогексиламина в 300 мл простого эфира при О С. Реакционную смесь .осо о тавляют для перемешивания при О С в течение 3 ч. и в течение ночи хранят в холодильнике. Твердые вещества отфильтровывают, суспендируют в этаноле, фильтруют, получают 43,3 г. 40

4В. Хлористоводородная соль сложного бензилового эфира D-гамма-глутамил(альфа-н-бутиловый спирт) -глицил-.

D-аланина.

Продукт, полученный в примере 4А (10, r, 0 021 моль), и 6,7 r (0,024 моль) хлористоводородной соли сложного бензилового эфира глицил-Dаланина суспендируют в 200 мл хлорис.того метилена под слоем азота и охлаждают до 0 С, В эту суспензию доо бавляют дициклогексипкарбодиимид (4,25 г, 0,021 моль ) и смесь оставляют для нагревания до комнатной температуры в течение ночи. Побочный продукт мочевины Фильтруют, а растворитель удаляют в условиях вакуума.

Остаток об рабатывают этила петатом и фильтруют. Фипьтрат последовательно промывают водой, 2,57-ной хлористово— дородной кислотой водой 1 07.-ныл раствором карбоната калия и рассолом.

Органическую фазу высушивают над сульфатом. магння, растворитель удаляют в условиях вакуума, а остаток растворяют в 300 мл диоксана, насыщенного хлороводородом. После перемешивания в течение 4 ч при комнатной температуре растворитель удаляют, а остаток превращают в порошок в смеси этипацетата и гексана (1:1) и Аипьтруют, Выход 7,4 г, 4С. N-(3-(S, R) -этилгексаноил )-Эглутамил(альфа-н-бутиловый эфир) -глицил-D- алании, К продукту, полученному в примере

4В. (1,0 г, 2,35 ммоль), 0,99 мл (7, 05 ммоль) триэтиламина и 50 мл хлористого метилена добавляют 460 мг (283 ммоль) 3-(S, R) -этилгексаноилхлорида, после чего реакпионную смесь перемешивают в течение ночи под слоем азота. Растворитель удаляют в условиях вакуума, а остаток растворяют в этилапетате. Органическую фазу последовательно промывают l OX-ной хлористоводородпой кислотой, водой., 10 -ным карбонатом калия и рассолом. ,Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния, а растворитель удаляют в условиях вакуума, Oc— таток растворяют в 10 мл этанола и взбалтывают с 1.70 мг 107.-ной гидроокиси палладия в атмосфере водорода при начальном давлении, равном 50 фунтам на 1 кв.дюйм, в течение 1,5 ч.

Отработанный катализатор отфильтровывают и растворитель удаляют в условиях вакуума. Выход 100 мг.

ЯИР-спектр (DMSO& g), ч . на млн:

8,18 (d, J = 6 Гц, 1Н); 8,10 (d, J =

6 Гц, 1Н); 8,02 (t, J = 5 Гц, 1Н);

4284? 0 (m, 2Н); 400 (t, J =6 Гц, 2Н); 3,78-3,56 (m, 2H); .2,18 (t, J =

6 Гц, 2Н); 202 (d, 1 = 6 Гц, 2H)

2 Ä 00-1, 60 (m, ÇH); 1, 58-1, 42 (m, 2P);

1,28-1,08 (m, 8H); 1,24 (d, J = 6 Гц, ЗН);

О, 92-0,76 (m, 9Н) .

Пример 5. В результате примененияя п ро педу ры, on ис анно и в и римере 4; и использования в качестве исходных материалов необходимых реагентов были получены соединения, приведенные в табл. 2.

Пример 6, Сложньпт этиловый эйир Ч-(3-(R, 8) -зтилгексаноип )-Dгамма-глутамип-глииил-D-аланина.

1560058

6А, Хлористоводородная соль слож-. ного этчловог о эфира D-гамма -глутамил (альфа-бензиловый эфир) -глицил-0аланина .

К суспензии 14,8 г (0,0285 моль) соли дипиклогексиламина альфа-бензилового эфира N-трет-бутокси-карбонипD-гамма-глутаминовой кислоты и 6 г (О, 0285 моль) хлористоводородной соли сложного этилового эфира глицилD-аланина в 200 мл хлористого метилена добавляют 5,6 r (0,0270 моль) диг циклогексипкарбодиимида, после чег о эту смесь перемешивают в атмосфере азота в течение ночи, мочевину AHJTbTруют, а растворитель удаляют в условиях вакуума. Остаток обрабатывают

300 мл этипацетата, фипьтруют и <Ъильтрат последовательно промывают 2, 5%ной хлористоводородной кислотой, водой, 1 0%-ньм раствором карбоната калия и рассолом. Органическую *азу отделяют, высушивают над магнием и концентрируют в -условиях вакуума. Остаточное масло растворяот в 450 мл диоксана, насыщенного хлороводородом.

Этот раствор перемешивают в течение

2 ч, после чего растворитель удаляют в условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого эфира и фильтруют. Выход 11,2 г.

6В. Сложный этиловый эфир N- 3(R, S) -этилгексаноип)-Э-гамма-глутамил-глицил-D- аланина.

K продукту, полученному в примере

6А (1,0 г, 2,35 ммоль ), и О, 98 мл (6,98 ммоль) триэтиламина в 30 мл хлористого метилена, находяшихся в атмосфере азота, добавляют 378,мг (2,33 юдоль) 3-(Л, Я -этилгексаноип- хлорида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1,5 ч эту смесь выливают в 1 00 мл этипацетата, после чего органическую Лазу последовательно промывают 10%-ным раствором карбоната калия и рассолом.

Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума. Белый твердый остаток растворяют в 30 мл метанола и гидроокиси палладия в атмосфере водорода при начальном давлении„ равном 50 фунтам на 1 кв, дюйм. Через 2 ч катализатор фильтруют, фильтрат концентрируют до сухого состояния. Остаток превращают в порошок с помощью простого эфира и фильтруют. Выход 275 мг (35%) .

Я1Р-спектр . (ПИВО-d @) ч, на млн;

8,26 (d, J = 8 Гц, I H); 8 14-8,02 (m, 2Н); 4,31-4, 00 (m, 2Н); 4, 06 (q, — i О Гц, 2Н); 3,78-3,60 (m, 2H); 1,17 (t, J = 8 Гп, 2H); 2,08-1,65 (m, 1Н);

2 08 (e, 3 = 8 Гц, 2Н); 1,82 1,53 (m, ЗН); 1,40-0,96 (m, 5H); 1,23 (Л, J = б Гц, 3Н); 1,14 (с, J = !О Гп, ЗП) О, 90-0, 64 (m, 6H) .

Пример 7. В результате ис-. пользования соответствующих реагентов в качестве исходных материалов и выполнения процедуры, описанной в примере, получены соединения, приведенные в табл. 3.

Пример 8. Повторяют процедуру, описанную в примере 6, с использованием соответствующих реагентов в качестве исходных материалов, эа исключением выполнения гидрогенизации, в ре зуль тате чего получают соедине ния, приведенные в табл, 4.

Пример 9. Кристаллический

N-(3- (S) -метилгептаноил )-Э-гамма-глутамил-глицил-В-алании.

Сложный бензиловый эбир N-(3-(S)— метилгептаноип)-D-гамма-глутамил(аль— фа-бензиловый эфир)глицил-П-аланина (30,8 r) суспендируют в 300 мл абсолютного этанола в 2-литровом автоклаве. К этой суспензии добавляют 5%-ный палладированный уголь (I, 54 г, смочен

50% воды ). г1осле этого смесь гидрогенизируют при давлении, в 4 раза превышающем атмосферное, в течение чего завсршается поглощение водорода.

Катализатор отделяют фильтрованием сначала на бумаге, а затем на пористом нейлоне с размером пор 0,45 мкм с применением 100-1 50 мл этанола для переноса и промывки. Фильтрат, соеди" ненный с промывньми щелоками, наносят на влажное белое твердое вещество, которое растворяют. в 150 мл горячей смеси абсолютного этанола и аиетонитрила при соотношении 1 . 10, осветляют путем горячего фильтрования, уваривают до. 35 мл, медленно. охлаждают до комнатной температуры, гранулируют и фильтруют с образованием кристаллического плотного неэлектростатического продукта, укаэанного в заголовке.

Выход 20, 1 г (94%) .

ИК-спектр (нуджоловая паста), см

3340; 3300; 2900; 2836; 1725; 650;

1628; 1580; 1532; 1455; 1410;,! 370;

1280; 1240; 216; 1175.

156

0058

Этот кристаллический продукт (9,4 г ) далее очищают путем растворения в 1000 мл ацетона при нагревании

v с обратным холодильником в течение

1 ч. Этот раствор охлаждают до комнатной температуры и производят затравку следовым количеством указанных кристаллов. После перемешивания в течение 6 ч указанный в заголовке продукт выделяют фильтрованием путем промывки минимальньм количеством ацетона и высушивают в условиях вакуума при 35 С. Выход 7, 25 r . Обладает идентичными характеристиками инфракрасно

ro спектра.

Пример 10. Сложный бензило- вшй эйир N- 3-(R) -метил-4-гептеноип)D-гамма-глутамип(альфа-бензиловый эфир) -глицил-Р-аланы а, В результате выполнения процедуры, описанной в примере 10, и использова" ния 2,77 r (5 ммоль) хлористоводород" ной соли сложного бензилового эфира

D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир) -глицил-D-аланина и хлорангидрида кислоты, полученного из:747 мг, (5 ммоль) 3-(R)метил-4-гептеновой кислоты, получают указанное B заголовке соед инеи ие .

Пример 11. N-(3-(R)-метил4-геп тано ип 1-D -гамма-глутамил-глипилD-алании, Смесь 500 мг продукта, полученного в примере 1 О, и 26 мг 5Х-ного палладированногс угля (смоченного 50Х воды) в 125 мл этанола взбалтывают в атмосфере водорода при начальном дав лении, в 4 раза превышающем атмосферное давлен ие, в течение 2, 5 ч . Катализатор фильтруют, а растворитель удаляют в условиях. вакуума. Полученный продукт очищают в соответствии с пропедурой, описанной в примере 9, при этом он во,всех отношениях идентичен продукту, полученному в том же примере.

Способ получения А. Пиклогексилаце т илхло рид .

А1 . Этилциклоге,кс ила цетат, К 4,9 г 60Х-ноге гидрида натрия в масле добавляют достаточное количество гексана для растворения масла. К несодержащему масла гидриду натрия в атмосфере азота добавляют 1 00 мл сухого тетрагидрофурана, а затем раствор 22,2 мл триэтилфосфоноацетата в

80 мл сухого тетрагидрофурана. После перемешивания при комнатной темпера10 l5

55

50 туре в течение 1 ч добавляют 1 О, 5 мл ииклогексанона в 40 мл тетрагидрофу-. рана, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи„Реакционную смесь выливают . в воду и экстрагируют простым диэти» ловым эфиром. Органическую фазу промьвают 1 н. раствором гидроокиси натрия, водой и рассолом. Органическую фазу отделяют, высушивают:над сульфатом магния и концентрируют при по.ниженном давлении.

Остаток растворяют в 250 мл метанола, обрабатьвают 1,5 r 10Х-ной rидробкиси палладия на угле, после чего эту смесь взбалтывают в атмосфере водорода под давлением 50 грунтов на

1 кв,дюйм в течение 4 ч. Катализатор фильтруют, а Фильтрат концентрируют в условиях. вакуума. Остаток перегоняют при 45-50 С и давлении 0,4 Торр с образованием 15,4 r (выход 90Xj целевого промежуточного продукта, А2 . Пиклогек сила це тилхло рид. .К 1 00 мл метанола, содержащего

15,4 г этилциклогексилацетата, добав. ляют 15,2 г гидроокиси калия, после чего этот раствор нагревают с обратньи холодильником в течение 3 ч. Метанол удаляют в условиях вакуума, а остаток об раб ать1вают водой. Рас тво р экстрагируют простым диэтиловым эфиром,.а затем подкисляют ОХ-ной хлористоводородной кислотой. Подкисленный раствор экстрагируют свежим простым эфиром, органическую фазу отделяют и промывают водой и раствором рассола. Удаление растворителя после высушивания позволяет получить жидкий остаток.

Этот остаток растворяют в 60 мл хлористого метилена и обрабатьвают

18 мл оксалилхлорида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 4 ч реакционную смесь конпентрируют в условиях вакуума, а остаток перегоняют при 45-50 С и давлении

0,4 Торр с образованием 12,5 г продукта (выход 86Х) .

Способ п олуч ен ия В, В. результате выполнения общей процедуры, описанной в способе получения

А,;.й использования в качестве исход1 ных материалов триэтилйосйоноаиетата и соответствующего альдегида или кетона получают хлорангидриды кислоты, приведенные в табл. 5 ..

Способ получения С.

С1, 6-Метилгептаноилхлорид с 1,3ок с и-4 -ме т ил-1 -и ен т ил .

К 90 мл 1,0 И раствора бромистогс винилмагния в тетраггдройуране, охлажденного до 5 С, по каплям добавляют 6,3 мл изобутиральдегида в

30 мл тетрагидрофурана, после чего полученную смесь оставляют для нагревания до комнатной температуры.

Через 2 ч реакционную смесь добавляют к насыщенному раствору хлористого аммония и экстрагируют простым эфиром.

Эфирные .экстракты соединяют, промывают насыщенным расTBoром хлористого аммония, насщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола и вь сушивают над сульфатом магния. Растворитель удаляют в условиях вакуума с образованием 6, О г пеле гродукта.

С2. Сложный этиловый эйир 6-метил4-гептановой кислоты.

Смесь 18,2 г 3 — окси — 4- метил-1-пен- 25 тена, 200 мл триэтилортоформиата и

500 мл и-толуолсульфокислоты обрабатывают 400 мл толуола и нагревают дс температуры кипения с обратным холодильником над молекулярными ситами с о размером ячеек 4А в течение 24 ч, Растворитель удаляют в условиях вакуума, а остаток перегоняют. фракция, перегоняемая при 45-64 С и давлении

0,5 Торр, позволяет получить 7,5 г

35 целевого продукта.

СЗ. Сложный этиловый эфир 6-метилгептановой кислоты.

К 7,5 r сложного этилового эфира

6-метил-4-гептеновой кислоты в 75 мл

40 метанола добавляют 700 мг 107.-ной гидроокиси палладия на угле, после чего эту смесь взбалтывают в атмосфере водорода под давлением 50 @унтов на 1 кв, дюйм в теч ен ие 1, 5 ч . Катали- 45 затор фильтруют, а растворитель удаляют в условиях .вакуума с образованием 5,7 г целевого продукта..

С4, 6-Иетилгептаноилхлорид.

В результате выполнения процедуры, описанной в способе получения А2, при использовании 5,7 г сложного этилового эфира 6-метилгептеновой кислоты получают 2, О г целевого продукта, т. к ил. 30-34 С при давлении о

0,5 Торр.

Способ получения D. 2-Метилгептаноичхлорид.

D1 ° 2-Метилгептановая кислота.

1 560058 14

К холодному (О С) раствооу 100 мл сухого тетрагидрофурана, содержащему:

11,8 мл cyxor диизопропиламина и

55 мл 1,6 И раствора н-бутиллития, добавляют 5,4 мл н-гептеновой кислоты, после чего эту смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный раствор охлаждают до О С и добавляют

7,2 мл иодистого метила. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под слоем азота в течение

1,5 ч, а затем выливают в )OX-ную хлдристоводородную кислоту и экстрагируют простым диэтиловым эфиром (3 100 мл) . Экстракты соединяют, промывают 1 О -ной хлористоводородной кислотой, водой, 207-ным бисульАатом натрия и раствором рассола, после чеrо высушивают над сульфатом маг ия.

Растворитель удаляют в условия> вакуума, а остаток (5,61 г) растг.вяют в метаноле, содержащем 5,1 r гь., роокиси калия. После перемешивани. в течение ночи метанол удаляют, а остаток растворяют в 150 мл воды. Водный слой промывают простым эфиром (2 >

<100 мл) и подкисляют 107-ной хлористоводородной кислотой. Полученный продукт экстрагируют простым эфиром, промывают 207-ным раствором бисульфата натрия и рассолом, а затем высушивают над сульфатом магния. Удаление простоro эфира позволяет получить

5,0 г продукта в виде жидкости желтого пве та.

D2. 2-Метилгептаноилхлорид.

В результате использования 5 r 2метилгептановой кислоты и 7,6 мл оксалилхлорида и применения процедуры, описанной в способе получения А2, получают 3,3 г нелевого продукта, т.кип, 32-34 С при давлении 0,6 Торр, Способ получения F.. 3-(S) -Метилгептаноилхлорид.

El Монометиловый эфир 3-(R)-метилглутаровой кислоты.

В 5-литровую четырехгорлую колбу, оснащенную мешалкой и электродом для регулирования показателя рН наливают 2,5 л О, 01 М буферного раствора фосфата калия с показателем рН 7,0 с последующим добавлением 150 мг эстеразы печени поросенка и 150 г диметил-3-метилглутарата. Показатель рН этой смеси сохраняюò ðàâíûì 6,85 путем периодического добавления 10Ж-ного раствора карбоната калия. Через

15 15

2,5 ч реакционную смесь подкисляют

10 -ной хлористоводородной кислотой до достижения показателя рН 2,0, после чего продукт экстрагируют простым диэтиловым эйиром. Экстракты соединяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют.в условиях вакуума с . образованием 114 r целевого..продукта.

I d 3 = -1,48 (СН СО, С = 0,086 г7мл);

Г2. Метил-3-(R)-метил-5-оксипентаноат, К 114 г монометилового эфира 3(R) -метилглутаровой кислоты в 61 5 мл сухого.тетрагидрофурана., охлажденного о до 0 С, медленно добавляют 391 мл

2 М раствора диметилсульфида борана

t в тетрагидрофуране, После завершения добавления реакционную смесь перемешивают в течение ночи при Комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждают и медленно добавляют 50.мл воды.

Реакционную смесь экстрагируют (3«

«1 00 мл) простым эфиром. Экстракты соединяют, промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола, после чего высушивают над сульфатом магния. Удаление растворителя позволяет получить

37 r целевого продукта, ЕЗ. Метил-3-(R) -метил-5-(грет-бутилдиметилсилилокси)пентаноат.

К раствору 37 г (0,253 моль) метил-3-(R)-метил-5-оксипентаноата и

37 r (0,543 моль) имидазола в 500 мл диметилформамида добавляют 37 г . (0,249 моль) трет-бутилдиметилсилилхлорида, после чего реакционную смесв перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, Реакционную смесь выливают в воду и экстрагируют (4x, «1 00 мл) п рос тым эфиром. Соединенные экстракты промывают. 10 "ной хлористоводородной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрии, водой и раствором рассола, а затем высушивают над сульфатом магния, Удаление растворителя позволяет получить 121,78 r, сырого продукта, после перегонки которого получают 107,12 r чистого про-. дукта, т.кип. 80-81 С при давлении

0,4 Торр.

Е4. 3-(8) -Метил-5-(трет-бутилдиметилсилилокси)-I ïåíòàíîë.

К 8,5 г (0,224 моль) алюмогидрида лития в 250 мл простого диэтилового эфира, находящегося под слоем азота, добавляют 53,5 г (0,206 моль) метил3-(S) -метил-5-(трет-бутилдиметилси60058

16 лилокси) пентаноата в 125 мл простого эфира. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0ОС, а затем по каплям добавляют 8,4 r воды, 8,4 мл

5 !

15%-ного раствора гидроокиси натрия и 25,5 мл. воды. Твердые вещества фильтруют, органическую фазу отделяют и промывают водой, 2,5 .-ной хлористоводородной кислотой и раствором рассола, Органическую базу высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума с образованием 46 r продукта.

Е5. 3-(R)-летия-5-(трет-бутилдиметилсипилокси) -1 -пентанал.

К 56,3 г оксалилхлорида.в 300 мл сухого хлористого метилена, охлаждено ного до -60 С и находящегося в атмос20 фере азота, по каплям добавляют

74,81 г диметилсульфоксида н 100 мл сухого хлористого метилена. Через

15 мин по каплям добавляют 92,0 г

3-($) -метил-5-(трет-бутилдиметилси25 лилокси) -1 -пентанола в 250 мл такого; же растворителя. Через 30 мин добавляют 206,1 r триэтиламина, находящегося при температуре -60 С, с последующим удалением охлаждающей ванны.

Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре .в течение

1,5 ч, а затеи выливают в воду и экстрагируют хлористым метиленом. Экстракты промывают 2, 5 -ной хлористово35 дородной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и раствором рассола, а затем высушивают над сульфатом магния. Растворитель удаляют, остаток растворяют в простом эфи40 ре и вновь промывают и высушивают, как описано ранее. Удаление. простого эфира позволяет получить 90,9 г целевого продукта.

Еб. 5-(8) -Кетил-7-(трет-бутилдиме45 тилсилилокси) -2-гептен.

К суспензии 80 г (0,2155 моль) бромистого трийенил-этилфосйония в

800 мл сухого тетрагидрофурана, охлажденного до 0 С, добавляют 165,7 мл

1,3 M раствора н-бутиллития (0,2155 моль) в таком же растворителе. Через 2 ч к реакционной смеси по, каплям добавляют 45 r (0,196 моль)

3-(R)-метил-5-.(трет-бутилдиметилси55 лилокси) -1 -пентанола в 200 мл сухого тетрагидрофурана. Реакционную смесь оставляют для перемешивания в течение

2 ч при комнатной температуре, а затем выливают в воду и экстрагируют

0058 !

8 жим введения зависел от используемых инфекционных микроорганизмов: за

24-0 ч до заражения Klebsiella pneumoniae у нормальных мышей; эа 3, 2

5 и день до заражения Escher.ichia coli или Staph. aureus у мышей с нарушенным иммунитетом. Заражение ;роиззодили внутримьш.ечно (1Р) в случае

Г.coli u Staph. aureus.

Дпя заражения использовали объем .

0,2 мл. Смертность регистрировали через 7 дней в случае K.pneumoniae u через 3 дня в случае заражения двумя другими М роорганизмами °

Приготовление культуры.

К.pneumoniae, Е.cali или Staph.

aureus. культуру выделяют в чистом виде из замороженной крови на агаре

20 с сердечно-мозговым экстрактом (В11Х) .

Три колонии отбирают иэ культуры на чашках Петри, выращиваемой в течение

18 ч, и помещают в 9 мл буж она с сердечно-мозговым экстрактом. чульон25 ную культуру выдерживают в течение

2 ч при 37 С в круговой качалке, после чего 0,2 мл переносят на поверхность нескольких скошенных агаров с сердечно-мозговым экстрактом. После о выращивания в течение 18 ч при 37 С скошенные агары промывают бульоном с сердечно-мозговым экстрактом, плотность культуры регулируют с помощью вещества "Спектроник 20", после. чего производят соответствующее разбавле35 ние до достижения уровня заражения у нормальных мьш ей, соответствующего дозе, приводящей к смерти 907 особей.

Результаты испытаний приведены в

4р табл. 6.

Проведенные испытания показали что в испытуемых дозах предлагаемые соединения не проявляют признаков токсичности, т.е. могут быть отнесены к категории малотоксичных.

Таким образом, ссединения, полученные в условиях предлагаемого способа, малотоксичны и обладают более высокой иммуностимулирующей активностью, чем известное соединение FK-156.

Формула изобретения

Способ получения пептидов. общей формули O

17

156 простым эфиром. Объединенные экстракты промывают водой и раствором рассола, после чего высушивают над сульфатом магния. Удаление растворитсля в условиях вакуума позволяет получить желтое масло, из которого после перегонки получают 37,4 г продукта, т.кип. 74-79 С при давлении 0,20,1 Торр.

Е7 . 3- (S) -Ye mr — 1 -геп танол.

К раствору 74,8 г 5- (S) -метил-7(трет-бутилдиметилсилилокс и )-2-гептена в 500 мл метанола добавляют 7,5 r

10Х-ной гидроокиси палладия на угле, после чего эту смесь взбалтывают.в атмосфере водорода в течение 1,5 ч под давлением 50 фунтов на 1 кв.дюйм.

Катализатор отфильтровывают, а растворитель удаляют в условиях вакуума.

Выход 30 г.

Е8. 3-(S) -Ретилгептановая кислота.

К 10 г 3-(S) ìåòèë — 1-гептанола в ! 75 мл ацетона в течение 45 мин по каплям добавляют 90 мл реагента Джонса, находящегося при 15-20 С. Через

15 мин добавляют 15 мл изопропанола и продолжают перемешивание в течение

30 мин. Реакционную смесь выливают в воду и образовавшийся продукт экстрагируют простым эфиром. Экстракты соединяют, промывают водой, раствором бисульфата натрия и раствором рассола, а затем высушивают над сульфатом магния. Удаление растворителя позволяет получить 10 r продукта в виде жидкости, т.кип. 84-88 С при давлении

0,4 Торр. (I) = - 4,46 (СН ОН, С =

О, 1 05 г/мл) .

Е9. 3- (S) -Ретилгептаноилхлорид.

В результате выполнения процедуры, описанной в способе получения А2, с использованием 5, О r 3-(S)-метилгептановой кислоты и 7,5 мл оксалипхлорида получают 2, 9 г целевого хлорано гидрида кислоты, т.кип. 29-32 С при давлении О, 25 Торр.

Проведены биологические. испытания полученных соединений.

Процедура испытания, в которой ис- . пользовали самцов мышей, обработачных С Н/HeN, представлена ниже. Nbiшей акклиматизировали в течение

5 дней до начала испытания, а затем . им вводили подкожно (Б С) или различные растворы (100; 10; 1 и 0 1 MI /кг) испытуемого соединения или плацебо, (физиологический раствор без пироген-, ного препарата ) в объеме 0,2 мл. Ре-

li

g COOS g OH „О

II (СН2) 2СОИСН- С- Z 2

1 560058 20

10.Приорите

Hакам.

2 5;11.85 при R водород.

27 . 08. 86 при R к ил ° т по и риз

15 — водород;

R 5 С,-С6Таблица 1

О

ll

Я,Сии,а СО2Н сн

I Э (CHg) р CONHCHg CON HCHC О g B

I Сн т.< ., С

3 сн (сн ) )175

>110 (разложение) > 1 ГО. (разложение) СН З(СН1) g

>110 (разложение) » — C< „,-алкип, циклогексил, циклогекс илметил;

R — водород1

R - — -НН-СН-.COOR

- 9

t сн, КФ вЂ” водород, С1 С4-алкил4

R - водород С. -С -алкил бену»

9 зил, отличающийся тем, что соединение общей формулы Н2И Э СООБЩА„

СН О

11 (Cu2) > COeV Cu-C -R >

И2 где R; R и «» имеют указанные зна- . т» чения, подвергают апилированию соединением общей формулы

R "СО-На1, где R имеет указанные значения;

Hal — галоид, причем функциональные группы, не участвующие в реакции, могут быть защищены с последующими, в случае необходимости, избирательным удалением, защитных групп.

ЯМР-спектр, ч. на млн » 1 У» (IlMSO-Й,(,) 8, 17-8, 22 (m, 2Н) ;

4,35-4,13 (ш, 2H)1 ;3,83 (d, J = 6 Гтт.» 2Н); 2,22 (t«J =

= 6 Гц, 2Н); 2,15. (с» J =

6 Гц» 2Н)1 2,08-1,65 (m, 2Н) 1 1,45-1,18 (m, 17Н};

090 (с, Л7 Гц, ЗН) (Ю1ЯО-й ) 8, 2-8, 08; (m, 2Н);

: 8,02 (й» .Т = 9 Гтт, 1Н);

4,3-4,1 (m, 2Н)1 3,72 (d, J = 7Гц, 2Н); 2»53-2,40; (ш, 1Н), 2,22 (с, .Х

9 Гц, 2Н); 2,1 -1,7 (m, 2Н); 1,28 (d, J = 9 Гц, ЗН); 1,08-0,9 (ш, 6Н) (ЖБОЙ g,) 8,3-7, 9 (m,ÇÍ) «»

4,33-4,17 (m, 2H);- 3,72 (d, Л - 5 Гц, 2Н); 2,32,1 (m, 2Н); 2,1 0-1, О (m, . 16Н) (DMSO& ) 8,25-8,05 (m, ЗН) э 4»35 4»22 (m» 2Н)»

3,72 (й» .Т =. 6 Гп, 2Н);

2,22 (e., 3 = 8 Гп, 2Б);

2 1 (с, J 8 Гц, 2P};

2, 08-1, 77 (m, 2H}; 1, 55

1560058

22 г

CH3(CHz) >! 90 (разложение) снэ(сн,),—

)180 (разложение) (С Нэ С Н ) фс Н

l (8) сн2— с 3

СН (СН2) CHCHg(s) СН2СНЗ

1 3 24 сн (и, s) (СН Сн СН»)ЯНСН

Продолжение табл. 1 (q, J = 8 Ги, 2Н);= 1,28 (d,,У = 8 Гтт, ЗР); 0,88 (t, J = 7 Гц, ЗН) (DMSO-d ) 8, 33-8,0(тт, 3H); 4, 35-4, 1 (m, 2Н);

-37 (d, Л=6Гц, 2H);

217 (t, J= 8 Гц, 2Н);

2,1 (»., Л = 8 Гтт, 2Н);

2, 05-1, 63 (m, 2Р); 1,48 (t, J = 7 Гтт, 2H); 1,21,1 (m, 7Н); 0 85 (t, J=7Гтт,3Н) (П 0) 4, 42-4, 28 (тп, 2Н);

391(в, 1H); 24 (t, 3= 7 Гц, 2Н); 2,27 (t, J = 7 Гц, 2Н); 2,221, 94 (n, 2Н); 1, 65-1,55 (m, 2Н); 1,39 (d, J =

8 Г