Способ определения токсичности химических веществ

Способ определения токсичности химических веществ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области контроля за загрязнением окружающей среды и может найти применение в водной токсикологии при медико-биологических исследованиях. Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение технологического процесса. Для этого воздействуют исследуемым веществом на дрожжи, при этом используют штамм. SACCHARAMYCES CORWISIAL 15В=П4, культивирование которого проводят на жидкой питательной среде, содержащей соль двухвалентного железа, с последующим переносом клеток штамма в аэрируемый раствор фосфата калия и выдерживают их в растворе до окисления накопленного дрожжами ферро-железа. После окисления клетки переносят в тестируемый раствор и по степени подавления ферриредуктазной реакции определяют токсичность исследуемого вещества. 1 табл.

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 щ) О 01 N 33/18, 33/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ г.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4382143/30-13 (22) 29,02.88 (46) 15.05.90. Бюл. Р 18 (71) Научно-исследовательский институт биологии при Иркутском государственном университете (72) Л.M.Ковалев, Ю.П.Козлов, М.А;Хабадаева и В,М.Янова (53) 615.9.576.8.097,29(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1097947, кл. С 01 II 33/18, 1983.

Авторское свидетельство СССР

У 1010557, кл: С 01 И 33/18, 1981, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ

ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к области контроля за загрязнением окружающей среды и может найти применение в водной токсикологии при медико-биоИзобретение относится к контролю за загрязнением окружающей среды, может найти применение в водной токсикологии при медико-биологических исследованиях.

Цель изобретения — повышение чувствительности и упрощение технологического процесса.

Для этого клетки штамм Saccharamyces cereyisiae 158-П4, взятые в экспоненциальной фазе роста, переносят в свежую питательную среду, содержащую глюкозу, KH РО, дрожжевой автолизат, 0,5Х желатины и 2 ммоль/л соли Мора (РеБО+" (ИН ) S04 10Н О) . После. 3-часовой инкубации клетки осаждают центрифугированием при 20008, дважды отмывают дистиллированной во2 логических исследования*. Цель изобретения — повышение чувствительности и упрощение технологического процесса. Для этого воздействуют исследуемым веществом на дрожжи, при этом используют штамм Saccharamyces cerevisiae 15В-П4, культивирование которого проводят на жидкой питательной среде, содержащей соль двухвалентного железа, с последующим переносом клеток штамма в аэрируемый раствор фосфата калия и выдерживают их в растворе до окисления накопленного дрожжами ферро-железа. После окисления клетки переносят в тестируемый раствор и по степени подавления ферриредуктазной реакции определяют токсичность исследуемого вещества.

1 табл. дой и вносят в интенсивно аэрируемыи раствор КН PO+ на 1,5 ч для окисления накопленного дрожжами ферро-железа. Затем клетки осаждают и переносят в среду, содержащую КН РО4, и глюкозу (контрольный вариант), а также исследуемое вещество в нужньгх концентрациях (опыт). В начале и в конце 3-часовой инкубации определяют содержание двухвалентного железа в клетках. .Инкубацию проводят в пробирках объемом 10 мл, При этом в контрольном варианте дрржжи восстанавливают аккумулированное железо, в опытном же варианте ферриредуктазная реакция подавляется токсичным веществом в зависимости от его концентрации. По

1564539 снижению скорости восстановления аккумулированного железа судят о токсичности исследуемого вещества.

Содержание двухвалентного железа в клетках определяют следующим образом, Культуральную жидкость центрифугируют при 2000 g. К осадку быстро,. приливают 0,05 М водный раствор

2,2 -дипиридила, тщательно перемеши1 вают, добавляют 10 мМ раствор MgS04 встряхивают, снова центрифугируют при 2000g, К осадку приливают смесь ацетона и 10 мМ раствора MgS04 (1:1, V:Ч), встряхивают, снова центрифугируют. Затем определяют в супернатанте концентрацию (Fe(dipy)> ) + по оптической плотности при 522 ни. Далее рассчитывают скорость восстановления железа как разность концентраций двухвалентного железа в конце и в.начале инкубации, деленная на время инкубации и плотность клеток.

Пример. Влияние нитрита натрия (NaNO<) и Na SiF< (гексафторосиликата натрия) на восстановление железа.

Клетки штамма S, cerevisiae 15В-П4 выращивают на полной жидкой питательной среде, осаждают центрифугированием при 2000g вносят в среду, содержащую 2% глюкозы, 0,2% КН Р04, дрожжевой автолизат (20 мл/л), 0,5% желатины и 2 ммоль/л соли Мора. После 3-часовой инкубации клетки осаждают центрифугированием, дважды отмывают от среды дистиллированной водой, переносят в интенсивно аэрируемый раствор КНдР04 íà 1,5 ч для окисления накопленного дрожжами ферро-железа, После окисления клетки осаждают и вносят в среду, содержащую 0,2%

КН РО и 2% глюкозы — это контрольный вариант, Затем пипеткой разливают культуральную жидкость по 10 мл в стеклянные пробирки, в которые предварительно вносят концентрированные растворы (или навески) NaN0 (в других опытах Na

I перемешивают, добавляют 4-5 мл 10 мМ раствора MgS04 встряхивают, снова центрифугируют при 2000g. К осадку приливают 2 мл сиеси ацетона и 10 мМ раствора MgSO> встряхивают, снова центрифугируют. Затем определяют в супернатанте концентрацию (Fe(dipy) )" по оптической плотности при 522 нм.

Инкубацию проводят в термостате, при t = 30 С. В конце 3-часовой инкубации определяют содержание двухвалентного железа в клетках. Скорость восстановления железа рассчитывают как разность концентраций двухвалентного железа в. культуре через 3 ч и в начале инкубации, деленная на

180 мин и плотность клеток, В таблице приведена скорость восстановления аккумулированного железа в присутствии токсикантов и в контроле.

Нитрит натрия в концентрациях

2 ° 10 4 -5 «10 4 моль/л незначительно, а в концентрации 10" моль/л в 4 раза снижает скорость восстановления жег леза, в концентрации 1,5" 10 M полностью подавляет железо-восстановительный процесс. Гексафторосиликат натрия (Na

Способ определения токсичности химических веществ, включающий культивирование штамма Бассharamyces cerevisiae 15В"П4, на жидкой питательной среде воздействие на него исследуемого вещества с последующей оценкой полученных резулЬтатов, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения технологии, культивирование штамма проводят на питательной среде, содержащей соль двухванентного железа, затем выделенные клетки инкубируют в аэрируемом растворе фосфата калия до окисления аккумулированного феррожелеза, после этого клетки переносят в тестируемый раствор, а оценку проводят по степени поцавления ферриредуктаэной реакции, 1564539

Токсикант

Конце нтр ация токсиканта, моль/л

Скорость восстановления железа, нмоль сухой вес, r мин

Контроль

NaNO

Контроль

Na S Р6

Составитель С. Пылова

Техред Л. Сердюкова

Корректор С.Шекмар

Редактор Т. Парфенова

Заказ 1156

Подписное

Тираж 525

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

2 ° 10

5 ° 10

1,510

5 .10

2 10.

4 10

12,3

10,4

10,0

3,7

8,3

7,7

7,0

4,8

0 5

8,8

7 8

7,7

2,1

8,2

7,4

5,9

4,7

0,5