Способ выделения монолиний м-вируса картофеля

Способ выделения монолиний м-вируса картофеля

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к фитовирусологии. Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля. Указанная цель достигается использованием в качестве растения-индикатора маристенной, на листьях которой производят 2-3-кратное пассирование изолятов. После этого заражают от некроза растения томата сорта Петито для накопления вируса. Полученные при этом популяции вирусов отличаются по патогенности. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЩЕЛИСтИЧЕСКИК

РЕСПУБЛИК

И1)5 С 12 ? f 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ .И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4491064/30-13 (22) 26.07.88 (46) 23.05.90. Бюл. Р 19 (71) Украинский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) Л.П.Коломиец и Ф.Е.Козар (53) 616.153.962 (088.8) (56) Амбросов А.Л,, Блоцкая И.В.

Идентификация и исследование штаммов мозаичных вирусов картофеля. — Минск;

Ураджай, 1979, с. 7, Изобретение относится к области фитовирусологии, Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля.

Пример 1. Проводят исследования с целью выбора растения-индикатора, реагирующего наиболее устойчино некротической реакцией на заражение М-вирусом картофеля и оптимальных условий для проявления локальной реакции .

Опыты проводят в контролируемых условиях температуры и освещенности: в теплице (зимне-весенний период) резкие колебания температуры от 10 до 50 С и освещенности от 5000 до

20000 лк, в климатической камере при длительности светового дня 16 ч, температуре 25 С и освещенности 15000 лк в вегетационной камере при длительности освещения 16 ч, температуре

18-25 С, освещенности 2500 лк.

„„Я0„„1565886 А 1 (54) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ МОНОЛИНИЙ М-ВИРУСА КАРТОФЕЛЯ (57) Изобретение относится к фитовирусологии. Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля. Укаэанная цель достигается использованием в качестве растенияиндикатора мари стенной, на листьях которой производят 2-3-кратное пассирование изолятов. После этого заражают от некроза растения томата сорта Петито для накопления вируса.

Полученные при этом популяции вирусов отличаются .по патогенности.

1 табл.

Растения-индикаторы заражают механически. Для приготовления инокул.ома используют листья растений картофеля и томатов, инфицированных выделенными в природе изолятами М-вируса картофеля. Листья пораженных растений растирают в фарфоровой ступке с добавлением буферного раствора в пропорции 1:f-1 .3. Используют фосфатный

0,1 М, рН 7,2-7 5, и цитратный 0,1 ff рН 7,2-7,5 буферные растворы; при отсутствии положительной реакции на отдельных видах растений-индикаторов используют также цитратный

О, 1 М, рН 9,0, МН-глициновый О,f М, рН 7, 2-7,5 и трис-HCl О, 1 М, рН 7, 27,2 буферные растворы. Растения-индикаторы заражают в фазе развития, оптимальной для проявления М-вируса картофеля.

Результаты заражения растенийиндикаторов представлены в таблице.

1565886

Результаты проведенных опытов по вмазывают, что локальная реакция при заражении различнымн изолятами М-ви уса картофеля проявляется на ряде растений-индикаторов, но наиболее устойчиво на мари стенной (Chenopodium murale L). На инокулированных листьях мари через 18-25 дней после заражения появляются желтые пятна, 1затем некротизирукщиеся в центре.

Наиболее четкие некрозы на листьях ари стенной получали, заражая растения в фазе бутониэации, удаляя перед инокуляцией их верхушку. Причем реак, ция на большинство испытанных изоля,тов М-вируса картофеля получена на. растениях мари стенной в условиях

,вегетационной камеры.

Таким образом, из всех испытанных тест-растений марь стенная наиболее стабильно реагирует локальной реак-! цией на заражение исследуемыми изолятами M-вируса картофеля, и наиболее оптимальными для проявления этой ре акции являются условия вегетационной камеры.

Пример 2 ° Изучают возмож1 ность пассирования M-вируса через некроз с целью получения монолиний вируса при выделении штаммов.

Участок некроза на листе растения-индикатора вырезают пробойником с диаметром 3 мм, растирают в микро, ступке с добавлением буферного раствора, полученную суспензию наносят ,,на опудренные карборувдом листья рас тения-индикатора или растения-нако,пителя с помощью пипетки и растирают по поверхности листа поролоновым .тампоном, увлажненным буферным раствором

В работе используют изоляты М-вируса картофеля и растения-индикаторы, проявившие в первой серии опытов (пример 1) локальную реакцию." вигна, табак Дебнея, гомфрена rîëîâ÷àòàÿ, дурман индийский, марь белая, марь

Киноа, марь стенная. Для накопления вируса заражают растения .томата сорта Петито в стадии 1-2 настоящих листьев. Пассирование на определенном тест-растении проводят в тех условиях, которые наиболее способствовали проявлению локальной реакции на этом растении.

Устойчивое пассирование через некроз (3-8-кратное и более), а также успешная передача способом механической инокуляции на растение-накопитель исследованных иэолятов И-вируса картофеля получены только на растениях мари стенной (Chenopodium murale L).

На всех остальных растениях-индикаторах ни в одном случае не получено заражения от некроза.

Пример 3. 3-Кратное пассирование через некроз на листьях Chenopodium murale L в условиях вегетационной камеры и последующее заражение от некроза растений томата сорта

Petito для накопления вируса позволяет выделить штамм И-вируса картофеля из природных иэолятов этого вируса, используемых в дальнейшей работе:

М-139 — слабопатогенный (вакционный), № 17 ВИЗР, M-200 — сильнопатогенный, для оценки вирусоустойчивости селекционного материала, - 14 ВИЗР; М-35иммуногенный, для производства диагностической сыворотки к M-вирусу картофеля, № 16 ВИЗР.

35 формула изобретения

Способ выцеления монолиний M-вируса картофеля, включанхций пассирование

40 через некроз на листьях растения-индикатора с последующим заражением растения-накопителя, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью получения монолнний И-вируса картофеля, в качестве растения-индикатора используют марь стенную (Chenopodium

murale L), а в качестве растениянакопителя — томат сорта Petito.

1565886

Проявление локальной реакции при выращивании

Растения-индикаторы

В теплице В климатической В вегетационной ( камере камере Количество изолятов И-вируса картофеля, вызвавших локальную реакцию

„ на растении-индикаторе.

Количество исследованных изолятов М-вируса картофеля.

Составитель С.Светльппев

Редактор О.Юрковецкая Техред М.Дидык Корректор Э.Лончакова

Заказ 1199 Тирах 477 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ухгород, ул. Гагарина, 101

Vip s sinensis

Phaseolus vulgaris

Nicotiana debneyi

Datura metel

Gomphrena globosa

Chenopodium album

Chenopodium quinoa

Chenopodium murale

0 /59»"

О/52

10/31

29/59

9/15

3/10

3/35

53/59

20/59

О/20

2/15

10/30

20/59

2/27

2/27

31/59

О/59

0/27

11/28

2/12

27/59

3/18

2/42

57/57