Способ выявления изоферментов пероксидаз

Способ выявления изоферментов пероксидаз

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности способа выявления изоферментов пероксидаз. Для этого после электрофоретического разделения изоферментов в полиакриламидном геле зоны изоферментов выявляют путем инкубирования геля в растворе, содержащем, мас.%: гваякол 0,1-0,3, этанол 15-30 и 0,01-0,05 М ацетатный буфер PH 5,0 остальное, с последующим добавлением 1,5-3,0%-ного раствора перекиси водорода.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5))$ С 12 N 9/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3684794/23-63 (22) 03 ° 01.84 (46) 07.06.90. Бюл, ¹ 21 (71) Институт ботаники АН КазССР (72) И.Б. Беклемишев и В.И. Романюта (53) 543,866 (088.8) (56) Н.А. Stafford et al. Ontogeny

and hormonal control of polyphenoloxidase isozymes in tobacco pith.

Plant Physiology. 1970, v. 46, ¹ 6. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИЗОФЕРМЕНТОВ

ПЕР ОКСИДАЗ

Изобретение относится к биохимии, в частности к энзимологии, и может быть использовано при выявлении пероксидазы и ее изоферментов.

Целью изобретения является повьппение специфичности способа выявления е изоферментов пероксидаз.

Способ реализуется следующим образом.

После электрофоретического разделения изоферментов в полиакриламидном геле зоны изоферментов выявляют путем обработки геля раствором, содержащим, мас,X: гваякол О, 1-0,.3; этанол 15-30;

0,01-0,05 M ацетатный буфер рН 5,0, остальное, и в момент контакта раствора с полиакриламидным гелем в среду добавляют сульфид натрия до конечной концентрации 0,005 — 0,030%, а затем добавляют 1,5-3,0Х-ный раствор перекиси водорода, Пример. Анализируемые образцы наносят на поверхность полиакрил,амидного геля по 35икл на трубку.

„.Я0„„1569333 А 1

2 (57) Изобретение относится к области биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности способа выявления изоферментов пероксидаз. Для этого после электрофоретического раз деления изоферментов в полиакриламидном геле зоны изоферментов выявляют путем инкубирования геля в растворе, содержащем, мас ° %: гваякол О, 1-0,3, этанол 15-30 и 0,01-0,05 М ацетатный буфер рН 5,0, остальное, с последующим добавлением 1,5-3,0Х раствора перекиси водорода.

Обычным путем проводят диск-электрофорез в щелочной системе, при этом используют неоднородную (прерывистую) С разделяющую систему для концентрирования разделяемых веществ в узкой стартовой зоне.

ФиВ

В процессе проведения электрофоре- СЛ за готовят раствор, содержащий, мас.Х: 1 ф гваякол 0,2, этанол 20, 0,01 M ацетатный буфер рН 5,0 остальное. От- фр дельно готовят 3%-ный раствор перекиси водорода и 0,010Х-ный раствор сульфида натрия. Все растворы должны быть холодными. Предварительно готовят сухие пробирки, которые перед окончанием электрофореза заполняют раствором гваякола и этанола в ацетатном буфере, а затем добавляют раствор сульфида натрия до конечной его 3 концентрации 0,01Х. Полиакриламидные гели вынимают из электрофоретических трубок, инкубируют в пробирках

30 мин, а затем добавляют 3%-ный раствор перекиси водорода

1569333 растворе, содержащем гваякол и бу. фер, и последующее добавление перекиси водорода, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения специфичности способа, раствор дополнительно содержит этанол, в качестве буфера используют 0,01-0,05 М ацетатный буфер рН 5,0, компоненты берут в следующем соотношении,мас,X:

Гваякол 0,1-0,3

Этанол 15-30

0,01-0,05 М ацетатный буфер рН 5,0 Остальное перед инкубацией в раствор добавляют сульфид натрия до конечной концентрации 0,005-0,030Ж, а перекись водорода используют в 1,5-3,0Х-ной концентра20

Рисунки гелей после проявления их на пероксидазную активность в среде едлагаемого состава выявляют зоны и оферментов пероксидазы, совпадаю5 щие по локализации при анализе перок-i сидаз, а также в смеси их с белками и другими гелесодержащнми ферментами (Гемоглобин и каталаза).

Предлагаемый способ позволяет спе- 10 цйфически выявить изоферменч ный состав пероксидаз.

Формула из обретения

Способ выявления изоферментов п6роксидаз, включающий электрофоретЦческое разделение в полиакриламидном геле и определение зон локализацйи фермента путем инкубации геля в

Составитель И, Стояченко

Редактор Н. Гунько Техред Л.Сердюкова Корректор Э . Лончакова

Заказ 1425 Тираж 480 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101