Способ определения активности глутаматдегидрогеназы в биологических объектах

Способ определения активности глутаматдегидрогеназы в биологических объектах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии, в частности, к клинической биохимии, и может быть использовано для диагностики заболеваний. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого в опытный образец берут 0,5 мл 27,6-32,2 ммоль/л раствора никотина-миддинуклеотида /НАД/ и 2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буфера PH 10,0-10,5, содержащего 63 ммоль/л глутамата .В контрольную пробу вносят 0,5 мл НАД той же концентрации и 2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буфера без глутамата. После чего в опытный и контрольный образцы добавляют 0,1 мл биологической жидкости с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 10-15 мин и измерением оптической плотности при 365 нм. Активность /Д/ определяют по приросту восстановленного никотинамиддинуклеаида /НАДН/. За единицу активности принимают количество фермента, которое за 1 мин увеличивает содержание НАДН в пробе на 1 мкмоль. Результат рассчитывают на 1 л сыворотка крови и выражают в ЕД. Способ прост в исполнении, не требует больших объемов исследуемой биологической жидкости, в 2 раза точнее известного.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ав 0 <и> (q))g G 01 N 33/43

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHfiM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4248166/28-14 (22) 21.05.87 (46) 23.06.90. Бюл. к 23 (71) I-й Московский медицинский институт им. И.М.Сеченова (72) А.H,Õoõëoâ, И.В.Сидорова и Х.К.Алиева (53) 616.07(088.8) (56) Вилкинсон Д. Принципы и методы диагностической энзимологии. — М., 1981, с. 81-.83. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ГЛУТАИАТДЕПЩРОГЕНАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ

ОБЪЕКТАХ (57) Изобретение относится к биохимии, в частности к клинической биохи мии, и может быть использовано для диагностики заболеваний. Целью изобретения является повьппение точности способа. Для этого в опытный образец берут 0,5 мл 27,6-32,2 ммоль/л раствора никотинамиддинуклеотида (НАД) и

Изобретение относится к области биохимии, в частности к клинической биохимии, и может быть использовано для диагностики заболеваний.

Цель изобретения — повьппение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

В опытный образец берут 0,5 мл

27,6-32,2 ммоль/л раствора никотинамидинуклеотида (НАД) и 2,0 мп 0,40,5 моль/л бикарбонатного буфера рН

10,0-10,5, содержащего 63 ммоль/л

2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буфера р Н 10, 0-10, 5, содержащего

63 ммоль/л глутамата. В контрольную пробу вносят 0,5 мл НАД той же концентрации и 2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буфера без глутамата.

После чего в опытный и контрольный образцы добавляют О, 1 мл биологической жидкости с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение l015 мин и измерением оптической плотности при 365 нм. Активность ГДГ определяют по приросту восстановленного никотинамиддинуклеотида (НАДН), За единицу активности принимают количество фермента, которое эа I мин увеличивает содержание НАДН в пробе на

1 мкмоль. Результат рассчитывают на

1 л сыворотку крови и выражают в ЕД.

Способ прост в исполнении, не требует болыпих объемов исследуемой биологической жидкости, в два раза точнее известного. глутамата. B контрольную пробу вносят

0 5 мл НАД той же концентрации и

2,0 мл 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного 4 буфера без глутамата. После этого в опытный и KOHTpoJIbHbtA образцы добавляют О, 1 мл биологической жидкости с последующей инкубацией при комнатной 3 температуре в течение 10-15 мин и иэ- 3 мерением оптической плотности при

365 нм.

Пример t. В сыворотке крови больного определяли активность глутаматдегидрогенаэы (ГДГ). Для этого в

15 73419

Составитель Н.Валеева

Техред М.Ходанич Корректор М.Максимишинец

Редактор Н.Яцола

Заказ 1641 Тираж 511 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина,101 опытную пробу вводили 0,5 мп НАД с концентрацией 27,6 ммоль/л, 2,0 мл

0,5 моль/л, буфера рН 10,0 с глутаматом до конечной концентрации в пробе 5

0,13 ммоль. В контрольный образец вносили те же компоненты, кроме глутамата. Затем в обе пробы вводили по 0,1 мл сыворотки крови, инкубировали при комнатной температуре в те- 1О чение 10 мин и определяли оптическую плотность раствора при 365 нм. Из по"

Казаний экстинкции опыта вычитали по казания контроля и рассчитывали активНость ГДГ по приросту восстановленно- 1S го никотинамиддинуклеотида (НАДН).

За единицу активности принимали ко1 ичество Фермента, которое за 1 мин увеличивало содержание НАДН в пробе на 1 мкмоль. Результат рассчитывали 2Î на 1.л сыворотки крови и выражали в единицах (ЕД), Полученная активность

ГДГ составила 10,7 ЕД.

Пример 2. Активность ГДГ определяли в сыворотке крови больного М.2

Для этого в опытный образец вносили 0,5 мл НАД в концентрации 32,2 ммоль/л и 2,0 мл 0,4 моль/л .бикарбонатного буфера рН 10,5 с глутаматом в концентрации 63 ммоль/л. В контрольном об- 30 разце в инкубационную смесь не вносили глутамат. После чего в опытную и контрольную пробы вносили по О, 1 мл сыворотки крови и инкубировали при комнатной температуре в течение

15 мин ° Оптическую плотность измеряли при 365 нм. Активность фермента составила 11 2 ЕД.

Предлагаемый способ прост в исполнении, может быть использован для определения активности фермента в небольших объемах биологической жидкости, обладает высокой точностью (в два раза точнее известного способа), что позволяет выявить активность неизвестной ранее множественной Формы Фермента нервной системы и проводить диагностику ряда заболеваний, в том числе прогнозировать течения неврозов.

Ф о.р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ определения активности глутаматдегидрогеназы в биологических объектах путем введения в инкубационную смесь раствора буфера, субстрата, никотинамиддинуклеотида с последующей инкубацией при комнатной температуре и определением оптической плотности раствора, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в инкубационную смесь добавляют 0,4-0,5 моль/л бикарбонатного буферного раствора рН 10,0-10,5, никотинамиддинуклеотид в концентрации

27,6-32,2 ммоль/л, а инкубацию проводят в течение 10-15 мин.