Сополимер 5-изопропенилтетразола и n-винилпирролидона, обладающий свойствами иммуноадъюванта поверхностного антигена вирусного гепатита в

Сополимер 5-изопропенилтетразола и n-винилпирролидона, обладающий свойствами иммуноадъюванта поверхностного антигена вирусного гепатита в

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к химии полимеров и позволяет создать для использования в иммунологии малотоксичный (ЛД 50 1340 мкг/кг) синтетический иммуноадъювант поверхностного антигена вирусного гепатита В, что достигается новой структурой вещества общей формулы @ , где X=0,40-0,74 мол.долей, Y=0,26-0,60 мол.долей, с характеристической вязкостью в водном растворе 0,1 М КОН с 2 М KBR при 20°С, равной 0,16-2,40 дл/г. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК э

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4494807/31-05 (22) 18.07.88 (46) 15.07.90. Бюл. !! - 26 (71) Иркутский государственный университет и Институт эпидемиологии и микробиологии Восточно-Сибирского филиала. СО АМН СССР (72) В.В.Анненков, С.И.Лещук, В.А.Круглова, В.А.Ананьев, М.М.Ветрова и И.В.Аксаментов (53) 678 ° 514.13 (088.8) (56) Вирусный гепатит/Под ред.

В.А.Ананьева. М., 1980, с. 1.7-20.

Петров P,В., Хаитов Р.M. Ycnexu современной биологии.1979, т. 88, У 6, с. 307. (54) СОПОЛИМЕР 5-ИЗОПРОПЕНИЛТЕТРАЗОЛА

И N-ВИНИЛПИРРОЛИДОНА, ОБЛАДАЮЩИЙ

СВОЙСТВАМИ ИММУНОАДЪЮВАНТА ПОВЕРХH0CTfI0I 0 АНТИГЕНА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В

Изобретение относится к химии полимеров, а именно к сополимеру 5-изопропенилтетразола и N-винилпирролидона, обладающему свойствами иммуноадъюванта поверхностного антигена вирусного гепатита В, и может быть использовано в иммунологии для диагностики вирусного гепатита В.

Целью изобретения является создание синтетического малотоксичного иммуноадъюванта поверхностного антиге- на вирусного гепатита В.

Пример 1. В реакционный сосуд (ампулу или колбу,,снабженную ме„„SU„„157814 A 1 (51)5 С 08 F 226/10, А 61 К 31/785

2 (57) Изобретение относится к химии полимеров и позволяет создать для использования в иммунологии малотоксичный (ЛД 0 1340 MK1 /KI ) CHH тетический иммуноадъювант поверхностного антигена вирусного гепатита В, что достигается новой структурой вещества общей формулы

1 З сн;с — ) + сн,-сн)-, H С С=о

1 I

N N НгС Снг

Н где х = 0,40-0,74 мол. долей, у = — 0,26-0,60 мол.долей, с характерис. тической вязкостью в водном растворе

О, 1М КОН с 2М KBr при 20 С, равной О, 16-2,40 дл/г. 1 табл. шалкой и обратным холодильником) помещают 0,666 г (0,67 мол.долей)

Мюаб

5-изопропенилтетразола, 0,333 r 4ь (О, 33 мол. долей) N-винилпирролидона, ф4)

0,02 г (2X от суммы масс мономеров) динитрила азоизомасляной кислоты и

5 мл этанола. Реакционную смесь продуо вают аргоном и выдерживают при 60 С в течение 24 ч . Сополимер выделяют и осаждением в диэтиловый эфир, промывают осадителем и сушат в вакууме до постоянной массы. Выход 0,622 г (62,27). Содержание кислотных групп по данным потенциометрического титро-.

1578143

40 туре. .Характеристическая вязкость сополимера в 0,1M NaOH с добавлением

2 моль/л KBr при 20ОС составляет

0,16 дл/г; молекулярная масса, измеренная методом светорассеяния, 85000.

Пример 2. В реакционный сосуд (ампулу или колбу, снабженную мешалкой и обратным холодильником) помещают 0,490 r (0,49 мол. долей)

5-изопропенилтетразола, 0,51 r (0,51 мол. цолей) N-винилпирролидона, 0,005 г (0,5% от суммы масс мономеров) динитрила азоизомасляной кислоты и 10 мл волы. Реакционную смесь продувают аргоном и выдерживают при

60 С в течение 8 ч. Сополимер, выпавший в осадок, отделяют фильтрованием или центрифугированием, промывания 0,006I моль/г, .что соответствует 0,67 мол. долей 5-изопропенилтетразола в сополимере.

Найдено, %: N 37,56.

Вычислено, %.: N 38,26.

Наличие в сополимере звеньев мономеров подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования, ИК-спектроскопии (j1075, 1250, 1380, 1450 см . — скедетные колебания тетразольного цик-! ла; 1580 см — деформационные колебания 1"-Н-связей в звеньях 5-изопропенилтетразола, широкая полоса в области 2500-3700 см — колебания ассоциированных N — H...N-связей; ,1290 см — валентные колебания С-Nсвязи в амидной группе звеньев N íèнилпирролидона). Полоса поглощенйя С=С вЂ свя исходных мономеров . (965 см ) в ИК-спектрах сополимеров отсутствует.

Сополимер представляет собой порошок белого цвета, растворимый в диметилформамиде, диметилсульфоксиде, в воде с добавлением NaOH. Благодаря наличию звеньев 5-изопропенилтетразола сополимер обладает свойствами слабой N-H поликислоты (pK> = 5,0), в воде при низких степенях ионизации он существует в компактной конформапии, стабилизированной водородными связями и гидрофобными взаимодействиями с участием метильных групп 5-изопропенилтетразола и метиленовых групп N-винилпирролидона. При ионизации макромолекулы претерпевают конформационный переход к развернутой струквают водой и сушат в вакууме до ndcтоянной массы. Выход 0,537 г (53,7%), Содержание кислотных групп, по данным потенциометрического титрования, 0,0067 моль/г, что соответствует

0,74 мол.долей 5-изопропенилтетразола в сополимере, Найдено, %: N 41,05.

Вычислено, %: N 40,61.

Характеристическая вязкость, определенная аналогично примеру 1

2,40 дл/г.

Пример 3. Реакцию осуществляют аналогично примеру 2, рН реакционной смеси повышают до величины

5,5 добавлением 50%-ного водного раствора NaOH. Сополимер выделяют осаждением в 0,1М раствор НС1, промывают водой. Выход сополимера

0,458 г (45,8%). Содержание кислотных групп 0,0060 моль/г, что соответствует 0,66 мол.долей 5-изопропенилтетразола в сополимере.

Найдено, %: N 36,97.

Вычислено, %: N 37,55.

Характеристическая вязкость

0,32 дл/г.

Пример 4. Все операции проводят как в примере 1, используя0,30 мол.долей 5-изопропенилтетразола и 0,70 мол.долей N-винилпирролидона. Выход сополимера составляет 75,1%, содержание 5-изопропенилтетразола в сополимере 0,40 мол.долей, N-винилпирролидона 0,60 мол.долей.

Характеристическая вязкость

0,31 дл/г.

Пример ы 5-15. Для изучения адъювантной активности синтези- . рованных сополимеров готовят их водные растворы с рН 5. Исследования проводят на кроликах породы шиншила, иммунизацию осуществляют по методу

Ананьева. Инъекции проводят подкожно в несколько точек пятикратно с интервалом в семь дней. В каждую из инъекций животным вводят смесь, содержащую 80 мкг антигена вируса гепатита В (НВ А8) и 0,6.мг сополимера в 1 мл воды. В контрольных опытах раствор сополимера заменяют на раствор полного адъюванта Фрейнда фирмы

"Калбиохем" (CIIIA). По окончании цикла иммунизации определяют .титры антител с помощью реакции преципитации в геле.

Результаты опытов представлены в таблице.

5 15781

Острая токсичность сополимеров определена на белых беспородных мышах по методу Кербера. Для наиболее активного сополимера Щ,о = 1340 мг/кг, т.е. он практически нетоксичен.

Таким образом, сополимеры 5-изопропенилтетразола с И-винилпирролидоном способны проявлять иммуноадъювантную активность в отношении по10 верхностного антигена вирусного гепа- . тита В и могут быть использованы для получения иммунной сыворотки,необходимой при изготовлении диагностических препаратов для индикации антигена вируса гепатита В.

Формула изобретения

Сополимер 5-изопропенилтетраэола и N-винилпирролидона общей формулы

СН

СН С ++EH -СН у)

И N Н2С CO

I 1 м к с сн, Н

74 мол.долей;

60 мол. долей еской вязкостью в вод1М Na0H с 2М KBr npu

16-2,40 дл/г, обладаюиммуноадъюванта по" тигена вирусного гегде х = 0,40-0, у = 0,26-0, с характеристич ном растворе О, 20 С, равной О, щий свойствами верхностного ан патита В.

Титры антител (Г

Пример

Исследуемое вещество

I"Г" J

Сополимер 1 по примеру 1

Сополимер 2 по примеру 2

Сополимер по примеру 3

Сополимер по примеру 4

Сополимер 2, 0,16 мг на иммунизацию

Сополимер 2, 5 мг на иммунизацию

Сополимер 2 (раздельное введение с антигеном) 12 (контр.) Поли-5-изопропенилтетразол

13 (контр.) Поли-N-винилпирролидон

14 (сравн.) Полный адъювант Фрейнда15 (сравн.) Сополимер

N-винилпирролидона с акриловой кислотой

+ + + + +

Острая токсичность ЛД 625-800 мкг/кг

Данные отсутствуют

Знаком "+" отмечено протекание реакции антиген — антитело (наличие антител); знаком "-" — отсутствие антител; "+" — данные трудноинтерпретируемые.