Инкубационная среда для иммунорадиометрического определения пролактина в сыворотке крови

Инкубационная среда для иммунорадиометрического определения пролактина в сыворотке крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний. Цель изобретения заключается в упрощении и увеличении чувствительности определения пролактина. Сущность изобретения состоит в том, что при иммунорадиометрическом определении пролактина в сыворотке крови инкубационная среда содержит антитела к пролактину в виде антисыворотки, в качестве белка-наполнителя - сыворотку крови лошади и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.% : антисыворотка к пролактину - (1,5 - 600) .10 -3

125I-антитела к пролактину (3 - 5 мКи/мг) - (1,5 - 12) .10 -7

сыворотка крови лошади 3,2 - 10

полиэтиленгликоль 5,0 - 7,5

NA 2HPO 4 - (8,0 - 50) .10 -2

NAH 2PO 4 - (4,0 - 24) .10 -3

NACL (4,0 - 90) .10 -2

дистиллированная вода остальное.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСГ1УЬ ЛИК (I% 1И) (S))S G 01 N 33/534

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Антисыв оро тк а к нролактину

I-Антитела к пролактину (35 мКи/мг) (1, 5-600) ° 10 (1,5-12) -IQ

Сыворотка крови лошади

Полизтиленгликоль

Ыа,НРО+

NaH F0<

NaCl

3, 2-1,0

5,0-7,5 (8, 0-50) ° 1О (4;0 24) ° 10 (4,0-90) 10

Дистиллиров анная вода

Ос тальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ fHHT СССР (21) 4444065/28-14 (22) 20, 06. 88 ч (46) 15.07.90. Бюл, В 26 (71) Институт биоорганической химии

АН БССР и Институт экспериментальной зндокринологии и химии гормонов . АМН .СССР (72) О,А,Стрельченок, 10,А.Панков, А, А, Булатов, О. В . Св иридов, Л.И. Сурвило и Л,П,Будникова (53) 612. 373(088.8) (56) Lee С. -Y e t а1. Biotechnol. and

Арр.1. Biochem, 1987, v.9, р.58-65. (54) ИНКУБАЦИОННАЯ СРЕДА ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЛАКТИНА

В СЬ1ВОРОТКЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных

Изобретение относится к медицинскому микроаналиэу и может быть исполь.зовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний.

Целью изобретения является упрощение и увеличение чувствительности определения пролактина.

Цель достигается применением инкубационной среды, содержащей антисыворотку к пролактину„ меченному йодом125 антитела к пролактину, сыворотку крови лощади> полиэтиленгликоль, буферные соли и воду при следующем соотношении компонентов, мас.7:

2 заболеваний. Цель изобретения заключается в упрощении и увеличении чувствительности определения пролактина °

Сущность изобретения состоит в том, что при иммунорадиометрическом опре.— делении пролактина в сыворотке крови инкубационная среда содержит антитела к пролактину в виде сыворотки, в качестве белка-наполнителя — сывороту крови лошади и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.Ж: антисыворотка к пролактину (1,5-600)-10 — антитела к пролактину (3—

-5 мКи/мг) — (1,5-12) -10 ; сыворотка крови лошади 3,2-10; полиэтиленгликоль 5,0-7,5; Иа НРО, (8,0-50). 10

Иан РО (4,0-24) 10 ; NaC1 (4,0-90)» g+

xI0 ; дистиллироьанная вода остальное. 1 табл. С::

1578659

Антисьворотку к пролактину получа ют иммунизацией кроликов чистым npo" лактином человека. Для получения антител, меченных "2 1,кодируют мышиные моноклональные антитела, выделенные из асцитной жидкости аффинной хроматографией на иммобнлизованном пролактине. Антисыворотка и I-ан!

25 титела не дают перекрестной реакции 1О с гормонам роста, тиреотропным лютеи-. низирующнм и фолликулостимулирующим гормонами, а также с пролактином лошади.;

Пример 1, Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыво- 15 ротке крови человека при оптимальных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

В эксперименте получают инкубаци-. онную среду. путем смешивания реаген" 2р тов и проводят иммунорадиометрическое определение пролактина в различных пробах сьворотки крови человека. Чувствительность анализа оценивают как наименьшую определяемую концентрацию 25 .гормона, достоверно (P w 0,0)) отличающуюся от нулевой, Инкубационную среду с оптимальными значениями содержания ингредиентов готовят следующим образом, К 100 мл Зр сьворотки крови лошади приливают 1 мл антисыворотки. к -пролактину, перемешивают и прибавляют 5 г Na

NaH2P04,и 6 r NaCl. После растворения солей общий объем раствора доводят до 500 мл и при постоянном перемешивании приливают 500 мл 30%-ного раствора полиэтиленгликоля (мол,масса

4000-6000) . В аналитическую пробирку вносят 0,2 мл полученной смеси и 0,2мл40 раствора " I-антител к пролактину

12$ (200.нг), В результате получается инкубаци-. онная среда со следующими значениями содержания ингредиентов, мас.%: 45

Антисыворотка к пролактину 50 10 "Х-антитела к

-7 пролактину 5,0 10

Сыворотка крови лошади 5,0

Полиэтйленгликоль 6,25

Na HP0<

25 10

НаН РО 12 ° 10

NaCl 30 10

Дис тиллиров акая

55 вода Остальное

В пробирку вносят О,l.,ìë анализируемой сьворотки крови, встряхивают и проводят инкубацию в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем жидкую фазу удаляют центрифугированием и измеряют скорость счета . 2 1 в, твердой фазе. Строят калибровочный график зависимости скорости счета " I от концентрации пролактина в калибровочных пробах и по этому графику определяют содержание пролактина в неизвестных пробах сыворотки, Результаты эксперимента приведены в таблице.

Пример 2 ° Иммуиорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при нижних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с нижними граничными значениями содержания ингредиентов, мас.%:

Антисыворотка к пролактину l 5 ° 10

<25 I-Антитела к

1,5-10

12 -10 пролактину

Сыворотка крови лошади 3,2

Полиэтиленгликоль 5, 0 яа НР04 8,0 10

NaH2PO 4,0 F10

NaC1 4,0 10

Дистиллированная вода Остальное

Получение инкубационной среды и иммунорадиометрическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, за исключением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями нижних граничных концентраций.

Результаты эксперимента приведены в таблице.

Пример 3, Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при верхних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.

Для проведения анализа используют инкубационную среду с верхними граничными значениями содержания ингредиентов, мас.%:

Антисьв о ро тк а к

-э пролактину 600 10

"2 1-Антитела к пролактину

Сьв оро тк а кров и лошади l0! 5786

Полиэтиленгликоль

На2НР04

NaH Р04

NaC1

Дистиллированная вода

7,5

50 10

24 ° 10

90 10

Остальное (l, 5-1, 2) 0

5, 0-7,5 (8,0-50).10 (4,0"24) 10 (4,9-90) .10 коль

Яа, НР04

КаЙ2Р04

NaC1

Дистиллированная вqpa етрического

0с тальное ри.

Аналитические параметры нммунорадиом определения пролактина

Инкубационная Измеренные концентрации пролахтина в сыворотсреда по ри- хах», нг/мл мерам

1 . 2 3 4

0,3 3,1

0,4 2,9

0,35 3,2

5,6 . 7,9

5,3 7,9

11,3 234

11,В 220

11,4 242

5,3

В,!

Виды съворотох: 0 — не содержащая пролактина; 1,2 — здоровых мужчин; 3,4 — здоровых жеъщин; 5 - беремениънс женщин

Расчетные значения минимальной определяемой концентрации, доса.+ товерно (P (0,01), отличающейся от нулевой.

Составитель А.Скурат

Техред Л. Сердюкова Коррек тор- Т. Малец

Редактор Е.Копча

Заказ 1915 Тираж 515 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

° Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Получение инкубационной среды и .иммунорадиометрическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, эа исключением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями верх15 них граничных концентраций.

Результаты эксперимента приведены в таблице. 20

При использовании предлагаемой инкубационной среды достигается более высокая чувствительность определения (0,3-0,4 мг/мл), чем в методе с использованием инкубационной среды — 25 прототипа (! мг/мл). Кроме того, достигается существенное упрощение процесса получения инкубационной среды, который включает одну простую стадно смешения ингредиентов в необходимых 3О пропорциях, не требует специальной очистки антител и исключает их поте59 б

Формула изобретения

Инкубационная среда для иммунора- диометрического определения пролактина в сыворотке крови, включающая антитела к пролактину, меченные йодом-!

25 антитела к пролактину, белок наполнитель, водный буферный раствор, отличающаяся тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности при использовании ее для определения, она содержит антитела к пролактину в виде антисыворотки, в качестве белка наполнителя — сыворотку крови лошади, буферного растворанатрийфосфатный буфер и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:

Антисыворотка к пролактину (1,5-600):10

1 I-антитела к пролактину (35 мКи/мг)

Сыворотка крови лошади 3,2-10

Полиэтиленгли