Способ электрофореза в потоке буфера

Способ электрофореза в потоке буфера

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к технике разделения и анализа заряженных частиц и может быть использовано для препаративного разделения биологических смесей в исследованиях по молекулярной биологии и в биотехнологии. Цель изобретения - повышение разрешающей способности способа посредством устранения "серповидных" искажений одновременно для всех разделяемых частиц из смеси. Для этого стенки, ограничивающие слой буфера, покрывают материалами с различными дзета-потенциалами и направление покрытия осуществляют под углом к потоку буфера. Со стороны анода эффективный дзета-потенциал имеет отрицательные значения, а со стороны катода - положительные. Смесь разделяемых частиц вводят в слой в том месте, где эффективный дзета-потенциал стенок равен нулю. Напряженность электрического поля и время разделения выбирают такими, чтобы все частицы из смеси достигли тех мест в слое, где их дзета-потенциалы совпадают с эффективными дзета-потенциалами стенок. 1 ил.

„„Я0„„158О235 А 1

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ()) (01 N 27/42

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

l1O ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ. ГННТ СССР

2 гии. Цель изобретения — повышение разрешающей способности способа посредством устранения "серповидных" искажений одновременно для всех разделяемых частиц из смеси. Для этого стенки, ограничивающие слой буфера, покрывают материалами с различными дзета-потенциалами и направление покрытия осуществляют под углом к потоку буфера, Со стороны анода эффективный дзета-потенциал имеет отрицательные значения, а со стороны катода - положительные. Смесь разделяемых частиц вводят в слой в том месте, где.эффективный дзета-потенциал стенок равен нулю. Напряженность электрического поля и время разделения выбирают такими, чтоЬы все частицы из смеси достигли тех мест в слое, где их дзета-потенциалы совпадают с эффективными дзета-потенциалами стенок. 1 ил. (21) 4309746/31-25 (22) 25.09.87 . (46) 23.07,90. Бюл. 6 27 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микроЬиологии (72) А.В. Гаврюшкин (53) 543.257(088.8) (56) Патент ФРГ N 2508844, кл. G 01 N 27/26, 1976.

Strickler А. Annals of the New

York Academy of Sciences, 209, 1973, р. 497-514. (54) СПОСОБ ЭПЕКТРОФОРЕЗА В ПОТОКЕ

БУФЕРА (57) ИзоЬретение относится к технике разделения и анализа заряженных час.тиц и может Ьыть использовано для препаративного разделения биологических смесей в исследованиях по молекулярной биологии и в биотехнолоот а 0 для y+ = 0 до с для

1 = 1 аКС,. Иаксимальный дзета-потен54

Изобретение относится к технике разделения и анализа заряженных час- тиц в постоянном электрическом поле и может быть использовано для пре- паративного разделения биологических смесей.

Целью изобретения является повышение разрешающей способности проточного электрофореза одновременно для всех частиц из разделяемой смеси.

На чертеже показана схема нанесения покрытия на стенки, ограничивающие слой буфера.

Угол наклона для различных дзетапотенциалов непрерывно изменяется циал стенок должен соответствовать максимально возможному дзета-потенциалу разделяемых частиц, причем со стороны анода он должен иметь отрицательные значения (для разделения отрицательно заряженных частиц), а со стороны катода положительные значения (для разделения положительно заряженных частиц).

Смесь частиц вводится в центр слоя для того, чтобы частицы в смеси, имеющие нулевой дэета-потенциал, Н A ВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1580235 сразу же попали в место в слое, где дзета-потенциал стенок также равен нулю. Зона частиц с нулевым дзетапотенциалом в электрическом поле не отклоняется и все время разделения находится в области с нулевым дзетапотенциалом стенок, и, следовательно, не искажается. Зона с частицами, имеющими максимальный дзета-потенциал, движется под углом о(„,„„,х потоку буфера и все время разделения находится в области с дзета-потенциалом стенок, совпадающим с дзета-потенциалом частиц, и в результате этого не искажается. При .этом очевидно, что напряженность электрического поля в камере и время разделения выбирают таким образом, чтобы частицы, имеющие максимальный дзета-потенциал, двигались под углом а к потоку, который совпадает с углом a(««нанесения покрытия. Все остальные частицы из смеси автоматически (вследствие линейности процесса) попадают в зоны, д5 где их дзета-потенциалы совпадают с дзета-потенциалами стенок слоя и разделяются без серповидных искажений.

Пример. Стекляную пластину, являющуюся стенкой электрофоретической камеры, кипятят в 54-ной азотной кислоте 45 мин, промывают дистиллированной водой и высушивают 24 ч при

115-125 С. Высушенную стеклянную пластину помещают в сосуд, содержащий

1 л 5-104-ного раствора у - аминопропилтриэтоксисилана в бензоле или толуоле и инкубируют при 20-25 С

24 ч, затем тщательно промывают бен- 40 эолом (толуолом), затем ацетоном и высушивают °

После этого стеклянную пластину помещают в раствор 34-ного янтарного ангидрида в 50 мм Na""ôîñôàòå, рН

6,0 и инкубируют при 20-25 С. в течение 12 ч, затем промывают дистиллированной водой.

Обработанную таким образом пласти- 0 ну используют как стенку электрофоретической камеры проточного типа. После сборки камеры в нее подают с помощью. многоканального насоса c( ростью 0,05 мл/ч 0,4Ж-ный водны„ раствор 1-циклогексил-3(2-морф, линоэтил)-карбодиимида мето-п-толуолсульфоната, рН раствора 4,0.

Раствор циклически прокачивают через камеру 12 ч, затем промывают дистиллированной водой, подавая ее в камеру с той же скоростью. После промывки камеры в нее с той же скоростью подают, используя многоканальный насос, раствор предварительно Фракционированных амфолинов и циклически прокачивают через камеру в течение 16 ч со скоростью 0,05 мл/ч, затем промывают камеру дистиллированной водой раствором 0,2 H. NaC1, затем нужным буфером. Подготовленную таким образом электрофоретическую камеру NcllQ» льзуют для разделения полипептидов.

Предлагаемый способ разделения в потоке буфера позволяет по сравнению с известным повысить разрешение одновременно для всех фракций заряженных частиц, входящих в состав смеси, и тем самым расширить область применения проточного электрофореза.

Формула изобретения

Способ электрофореза в потоке буфера, включающий воздействие на слой непрерывно протекающего буфера с введенной в него полосой разделяемой смеси постоянного электрического поля перпендикулярно к направлению потока, а также подбор покрытия стенок, ограничивающих слой буфера, материалами с разными дзета-потенциалами, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешающей способности, одновременно для всех разделяемых частиц на смеси разделение осуществляют в канале с распределенным на стенках покрытием, эффективный дзета-потенциал которого линейно изменяется от отрицательных значений у катода до положительных значений у анода, причем смесь разделяемых частиц вводят в слой в том месте, где эффективный дзета-потенциал покрытия равен нулю.

1580235 (m

Составитель И. Рогаль

Техред М.Моргентал Корректор М,Шароши

Редактор Н. Бобкова

Заказ 2006 Тираж 511 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, 3-35, Раушская наб., л. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина,101