Способ определения карбоангидразы

Способ определения карбоангидразы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии и касается исследований в энзимологии. Цель - повышение точности и воспроизводимости анализа. Способ основан на реакции дегидратации бикарбоната с удалением образующейся в результате дегидратации двуокиси углерода при интенсивном барботировании реакционной среды освобожденным от CO 2 воздухом и одновременной регистрацией скорости изменения PH. Активность карбоангидразы определяют по изменению начального значения PH 8,2 - 8,7. Коэффициент вариации способа в серии из 5 определений равен 2,55%. 2 ил., 1 табл.

союз советских соОиАлистичесних

РЕСПУБЛИК (51) 5 С 12

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ по изоБ етекиям и откРытиям

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4410233/31-13 (22) 23.02.88 (46) 15.08.90, Бюл. № 30 (71) Институт физиологии и биофизики растений АН ТаджССР (72) В,В,Аракелян, В.Л.Калер и Г.Б.Ибрагимова (53) 577.15.08(088.8) (56) Gibbona В.Н., Edsall Е.Т

Kinetic Studies of Human Carbonic

Anhydràsås Bande. — J. Biol. Chem,.

1964, v. 239, ¹ 8, р,,2539-2544.

Devoe Н., Kistiakowsky G.Â.

The Enzymic Kinetics of Carbonic

Anhydrase from Bovine and Human, Erythrocytes. — J. Amer. Chem, $ос., 1961, v. 83, № 2, р. 274-280.

Изобретение относится к биохимии и касается исследований в энзимологии.

Цель изобретения — повышение точности и воспроизводимости анализа.

Способ определения активности карбоангидразы основан на реакции дегидратации бикарбоната: НСО, ОН + з

+ СО Фс удалением образующейся в ре1 акции дегидратации двуокиси углерода при интенсивном барботировании реакционной среды освобожденным от

СО воздухом и одновременной регистрации скорости изменения рН.

На фиг. 1 изображена схема установки для удаления СО иэ реакционной среды.

Воздух подается в реакционную среду, находящуюся в реакционном со-.

09) (11) . i

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОАНГИДРАЗЫ (57) Изобретение относится к биохимии и касается исследований в знэимологии. Цель — повышение точности и воспроизводимости анализа. Способ основан на реакции дегидратации бикарбоната с удалением образующейся в результате дегидратации двуокиси углероца при интенсивном барботировании реакционной среды освобожденным от СО воздухом и одновременной регистрацией скорости изменения рН, Активность карбоангидразы определяют по изменению начального значения рН 8,2 — 8,7. Коэффициент вариации ф способа в серии иэ 5 определений равен 2,557.. 2 ил, 1 табл. суде 1, через обратный фильтр 2 (диаметр пор 14,4 мкм), подключенный через резиновую трубку 3 с краником 4 к склянке 5 Дрекслера с раствором щелочи и к системе сжатого воздуха либо к микрокомпрессору. Для измерения рН реакционной среды используют электроды 6, Реакцию запускают барботированием реакционной среды, воздухом, освобожденньм от СО . Активность карбоангидразы определяют по изменению начального значения рН от 8,2 до 8,7 в реакции дегидратации COz. Электро" метрически измеряют скорость накопления гидроксильных ионов с использованием чувствительного рН-метра (рН 121) с самописцем (КСП-4) по

1 585334 сдвигу рН от 8,2 до 8,7, как функции от времени на линейном участке.

Способ иллюстрируется примером.

Пример I. .Контрольное определение.

В опытный сосудик помещают 9,5мл

0,1 М раствора NaHC0> (рН 8,2) и

0,5 мл среды, которую используют для получения исследуемого препарата фер- 10 мента (без фермента).

Опытное определение осуществляют так же, как и контрольное, но в со. судик помещают 0,5 мл опытного образца (исследуемый препарат фермента).

Перед опытом проверяют значение рН исследуемого образца, чтобы оно было равно начальному значению рН 8,2 раствора NaHCO>.

Расчет активности производят по графику зависимости концентрации гидроксильных ионов от рН, построенному на основании ионного произведения воды (фиг. 2).

В присутствии ферментного препара- 25 та накапливается 0,035 мкмоль ОН /мин, а без фермента (контроль) — 0,019мкмопь

ОН /мин. По разности опытного и контрольного вариантов (0,035 — 0,019

= 0,016) находят .количество мкмоль

0Н /мин, образовавшееся в про цессе.ферментативной реакции. В реакционную среду было внесено 1 00 мкг . белка. В пересчете на 1 мг белка активность фермента составляет 0,16 мкмоль ОН мг мин

Анализ точности и воспроизводимости результатов при определении активности карбоангидразы по реакции дегидратации НСО по величине довериЭ тельного интервала (S > t О, ц (4)

0,004) и коэффициенте вариации (Ч = 2,55X) следующий.

Пример Активность карбоангидразы по дегидратации НСО мкмоль ОН мг мин—

0,155

0,150

0,158

0,153

О, 160

Формула изобретения . Способ определения карбоангидразы, включающий смешивание раствора субстрата, в качестве которого исполь эуют бикарбонат натрия, с анализируемым образцом фермента и инструментальную регистрацию изменений рН реакционной смеси, вызываемых катализируемой ферментом реакции дегидратации бикарбоната до углекислого газа, отличающийся тем, что, с целью повышения .точности и воспроизводимости анализа, изменения рН реакционной смеси регистрируют электрохимическим способом, причем в процессе регистрациичерез реакционную смесь барботируют воздух, очищенный от углекислого газа.!

585334

u/ù тонхи

Составитель А. Семенов

Текред Л.Сердюкова Корректор М, Шарони

Редактор Н. Киштулинец

Заказ 2304 Тираж 486 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул. Гагарина, 101