Способ определения токсического повреждения лейкоцитов

Способ определения токсического повреждения лейкоцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и физиологии. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения токсических повреждений лейкоцитов. Способ позволяет выявлять сенсибилизацию организма к различным аллергенам и химическим веществам. Существенные признаки изобретения: кровь инкубируют без индуктора хемилюминесценции /ХЛ/ в присутствии исследуемого фактора

пробы крови после инкубации их с исследуемым веществом отмывают дважды центрифугированием, добавляют люминол в концентрации 10 -4 - 10 -3 М и измеряют интенсивность хемилюминесценции по сравнению с контролем.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4418072/28-!4 (22) 29 ° 04,88 (46) 23.08,90, Бюл, Р 31 (71) Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт (72) С.М.Лихолетов, Е,К.Дурихина, В.Г,Божко и А.С,Борзенко (53) 615,9 (088.8) (56 ) Барсуков А, А. и др. Изучение окислительного метаболизма фагоцитов человека при использовании микрообъемов крови. -В сб.: Современные методы иммунодепрессии, -Москва-Ташкен.т, 1984. (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО

ПОВРЕЖДЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к иммунологии и фиэиоло гии, Целью изооретения является повышение чувствительности способа.

При осуществлении способа пробы крови после инкубации с исследуемым токсическим веществом дополнительно отмывают двукратным центрифу гиров анием, добавляют люминол в концентрации 10 -10 М и, измеряя интенсивность хемилюминесценции (ХЛ ) по сравнению с контролем, судят о токсическом повреждении лейкоцитов..

Пример, В полистироловые кюветы вносили по 25 мкл крови и различные концентрации нуклеината натрия или физраствора (контроль), инкубировали в течение 1 ч при 37 С, затем половИну проб отвыли от нуклеината натрия путем центрифугирования 2 раза

„„Я0„„1587445 А 1 (gg)g G 01 М 33/49/!С 01 М 33/53

2 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и физиологии.

Целью изобретения является повышение чувствительности способ а определения токсических повреждений лейкоцитов.

Способ позволяет выявлять сенсибилизацию организма к различным аллергенам и химическим веществам„Существенные признаки. изобретения: кровь инкубируют оез индуктора хемилюминесценции в присутствии исследуемого фактора; пробы крови после инкубации их с исследуемым веществом отьывают дважды центрифугированием, цооаьляют люминол в онцентрации 10 4- 10 М и измеряют интенсивность хемилюминесценции по сравнению с контролем, 1 таол, С:: по 7 мин при 1000 oo/ì í, а другую половину проб не отмывали, В контроле

t пробы инкубировали и отмывали с физраствором. Затем добавляли 1О мкл, д а люминол а. Посл ед1 ий гото вили следую- (д щим образом, Навеску люминола фирма рр

"Serva (l0 мг) суспендировали в 1 мп физраствора (рН 7,2), перемешивали, оставляли при 37 С на 1-2 ч для осаждения нер аств ори алых частиц, надосадочную жидкос ь отфильтровывали через фильтры диаметром пор 0,2 — 0,45 мкм и испольэовали в реакции ХЛ, Концентра ция люминола в профильтрованном расть воре соответствовала примерно 10

-1О и концентрации люминола, растворенного в ДМСО по известному способу.

ХЛ измеряли на хемилюминометре IKB-! 250 Vallac OY (Финляндия) и выражали в условных световых единицах через

15 и 30 мин инкубации при 37 С. Ин1587445

Коэффициент (К) изменения ХЛ при разных дозах препарата, мг/,мл

Проба крови

10,0 1,0 0,1

Об р а б от анн ая нуклеинатом натрия и не центрифугир ованная

0,38f0, 12 1,08+0,09

Оь91фОэ 18

То же, после

2-кратного отмывания

1,51f0 12 1,Об+0, 11

0,69+0,12

Фор мул а из обр ет ения

Составитель А,Донцов

Техред M,Äèäûê

Редактор О.Юрковецкая

Корректор П. I:óñêà

Заказ 2417 Тираж 529 Подписное

ВЕПРИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 тенсивность ХЛ определяли как светосумму т.рех измерений. Результаты учитывали по степени угнетения ХЛ в кюветах с аллергенами по сравнению с таковой в кюветах без них. О наличии сенсибилизации к исследуемому аллергену судили по величине коэффициента (К} изменения светосуммы. ХЛ, За положительный результат (напичие аллергиИз таблицы видно, что ХЛ проб крови, не отмытых от нуклеината натрия, в дозе 10 мг/мп наблюдается гасящее

ХЛ действие нуклеината натрия за счет вероятной химической реакции с люминолом, После отмывки от препарата выявпено стимулирующее действие нуклеината натрия в дозе 1,0 мг/мп на лейкоциты крови, что проявилось в повышении К более 1,51. Таким образом, предлагаемый способ позволяет оценить действие различных веществ на функцио-.. .нальную активность лейкоцитов крови.

Способ предполагает использование 40 микро объемов крови, поэтому может быть использован в педиатрии или у мелких животных. Способ позволяет также выявить сенсибилизацию организма к различным аллергенам и химическим 45 веществам, поскольку исключен этап ческой альтерации лейкоцитов и, в связи с этим, снижение ХЛ в пробах с АГ) принимали К, равное 0,80 и ниже. Отрицательный результат расценивали при

К, равном 0,81-1,19, Результаты изучения действия нукле" ината натрия на клетки крови приведе" ны в таблице, .

I предварительной инкубации крови с ин дуктом ХЛ, способный изменить реактивность гранулоцитов к исследуемому веществу.

Способ определения токсического повреждения лейкоцитов, включающий инкубацию цельной крови с токсическим веществом, добавление люминола и измерение уровня хемилюминесценции пробы по сравнению с контролем, о т л ич ающий ся тем, что сцельюповышения чувствительности способа, пробы крови после инкубации с исследуемым веществом дополнительно отмывают двукратным: центрифугированием, а люминол используют в концентрации 10

10-3у