Способ разделения гликозилированной и негликозилированной форм пролактина биологического материала

Способ разделения гликозилированной и негликозилированной форм пролактина биологического материала

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и решает задачу разделения гликозилированной и негликозилированной форм пролактина при подготовке пробы биологического материала для иммунохимического определения гликозилированного пролактина. Целью изобретения является упрощение способа. Способ заключается в инкубировании биологической жидкости с раствором конканавалина А и отделении полученного комплекса гликозилированной формы с конканавалином А от негликозилированной формы путем добавления раствора полиэтиленгликоля и центрифугирования. 1 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU „„1587450 щ)5 Г О1 N 33/68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ . К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

r1Q ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (? 1) 4420941/30-14 (22) 04.05.88 (46) 23.08.90. Бюл.-Р 31 (71) Институт биоорганической химии

AH БССР и Институт экспериментальной эндокринологии и химии гормонов

AI IH СССР (72) О.А.Стрельченок, 1Я.А.Панков, А.А.Булатов, Л.И.Сурвило, О.В.Свиридов и Л.П.Будникова (53) 612. 015 (088. 8) (56) Ain. J. ОЪ stet Гуп со1., 1983.

v. 147, Yl 5, р. 482-487. .(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗИЛИРОВАННОЙ .И НЕГЛИКОЗИЛИРОВАННОЙ ФОРМ

ПРОЛАКТИНА БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам разделения гликозилированной и неглико- зилированной форм пролактина при подготовке пробы биологического материала для иммунохимического определения гликозилированного пролактина °

Целью изобретения является упрощение способа за счет сокращения стадии,, На чертеже представлен график корреляционной зависимости результатов, полученных по предлагаемому (ось Y) и известному (ось Х) спосо- бам.

Согласно способу инкубирования биологической жидкости с раствором конканавалина А и отделение полученного комплекса гликозилированной

Йормы с конканавалином А от неглико2 (57) Изобретение относится к медицине и решает задачу .разделения гликозилированной и негликозилированной форм пролактина при подготовке пробы биологического материала для иммуно— химического определения гликозили— рованного пролактина. Целью изобре— тения является упрощение способа.

Способ заключается в инкубировании биологической жидкости с раствором конканавалина А и отделении полученного комплекса гликозилированной формы с конканавалином А от негликозилированной фопмы путем добавления раствора полиэтиленгликоля и центрифугирования. 1 ил.

Ф %

I зилированной формы пролактина проводят путем добавления раствора полиэтиленгликоля и центрифугирования.

Пример 1. Разделение гликозилированной и негликозилированной форм пролактина в пробе сыворотки кро ви человека.

В аналитические пробирки вносят по 0,1 мп сыворотки крови, добавляют по 0,15 мл раствора конканавалина А (2,.5 мг/мп) в 0,5 М трис — НС1 буфере (рН 7,0), содержащем 0,2 М NaC1 и

Са, .I8 ; Мп (по 0,001 М) и инку.бируют 90 мин при комнатной температуре. Во все пробирки прибавляют по

0,25 мл 257.-ного полиэтиленгликоля (мол. масса 4000-6000) в воде. Hpo— бирки встряхивают, выдерживают 10 мин при комнатной. температуре, центрифугируют 10 мин при .2000 8 и супернатант отбрасывают.

1587450!

1 р и м е р 2. Разделение гликози-. лированной и негликозилированной форм пролактина в экстрактах гипофи- эов человека.

Ацетонированньп» порошок (2 r) ги. 5 поАиэов человека экстрагируют 100 мл

1 н. ИаОН -при 35 С в течение 20 мин.

После нейтрализации экстракта аликвоту (0,1 мл) используют для разделения 10 форм пролактина, как описано в примере 1.

Пример 3. Сравнение полноты. разделения глцкозилированной и негликозилированной форм пролактина предлагаемым способом и известным.

В обоих случаях концентрацию гликозилированного пролактина определяют радиоиммуноанализом с помощью стандартного набора НРЮ.К-PR (CIS — In20

ternationa1) . Перед радиоиммуноана.— лизом осадок, содержащий гликозилированный пролактин растворяют прибавлением в пробирку 0,1 мл 0,05 М трис-НС1-буАера (pH 7,0), содержащего 0,2 М NaC1 и, 0,05 твин-20.

Радиоиммунологическое определение концентрацией гликозилированного пролактина в нескольких (n = 5) гипофизарньгх экстрактах, обработанных по предлагаемому и известному способам, не выявило достоверных различий (Р ). 0,05), обусловленных способом обработки.

Результаты сравнения двух способов фракционирования пролактина в применении к сыворотке крови человека отражены на корреляционном графике (в нг/мл). Выполненные расчеты показывают, что имеет место высокая степень корреляции (r = 0,97) ре40 зультатов радиоиммуноанализа Аракции гликозилированного пролактина, выделенной предлагаемым и известным способами из одних и тех же проб сыво45 ротки крови.

Анализ экспериментальных данных показывает, что предлагаемый способ и известньп» одинаково эААективны в отношении разделения гликозилированной и негликозилированной Аорм пролакти-! на, предлагаемый способ более прост, так как не требует хроматографии каждой анализируемой пробы, более производителен, так как позволяет одному квалиАицированному лаборанту в стандартных лабораторных условиях в течение первого для обработать большее число проб сыворотки. Кроме того, в отличие от известного предлагаемый способ согласуется с процессом иммунохимического микроанализа ,(РИА, ИРМА, И@А и др.), так как состоит только из общих с микроаналиэом стадий пипетирования реагентов и разделения Ааз, Вследствие этого предварительная обработка проб по предлагаемому способу и микроанализ могут проводиться в одну аналитическую линию или выполняться в едином автоматизированном режиме.

Формула и з о б р е т ения

Способ разделения гликозилированной и негликозилированной Аорм пролактина биологического материала путем контактирования пробы биологического материала с конканавалином А и отделения полученного комплекса гликозилированной Аормы пролактина с конканавалином А от негликозилированной

Аормы, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения стадий, контактирование проводят путем инкубации пробы в течение 90 мин с раствором конканавалина А в трис-НС1 буАере, содержащем ионы натрия, магния, кальция и марганца, затем пробу обрабатывают раствором полиэтиленгликоля с мол. мас. 4000-6000, а отделение образовавшегося комплекса проводят центрифугированием.

7О0

rQO

Х

ЛЮ 5й7 7М ЖЮ

Составитель А, Агуреев

Редактор H.Áîáêîâà Техред Л.Сердюкова Корректор Т.Палий

Заказ ?418

Тираж 514

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета йо изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101