Способ определения уровня гибридности семян кукурузы

Способ определения уровня гибридности семян кукурузы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается определения степени гибридности F 1 кукурузы. Настоящий способ может успешно применяться в семеноводстве кукурузы. Целью изобретения является повышение точности определения уровня гибридности. Способ состоит в том, что зеин экстрагируют 60-70%-ным изопропанолом в течение 50-80 мин при температуре 55-65°С, затем осуществляют их электрофоретическое разделение, после чего компоненты группируют относительно реперных В 40 и С 47. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1595407 А1 (51) 5 А О1 Н 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А STOPCH0MY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

flPH ГКНТ СССР (21) 4493509/30-13 (22) 12.10.88 (46) 30.09.90. Бюп. Р 36 (71) Казахский научно-исследовательский институт земледелия им. В.P.Âèëüÿìñà (72) И.N.Ñàâè÷ (53) 631.522358.083.5 (088.8) (56) Попереля Ф.А., Асыка lO.А. Методические указания по электрофорезу зеина кукурузы для определения процента гибридности семян F, . Методические указания. М., 1988.

Изобретение относится к .биотехнологии, а именно к селекции и семеноводству, и может быть использовано научными и научно-производственными учреждениями при создании гибридов кукурузы и в процессе контроля их семеноводства.

Целью изобретения является повышение точности определения °

Способ состоит s том, что экстракцию белка из эндосперма кукурузы осуществляют с помощью 69-707-ного изо.пропанола в течение 50-80 мин при

55-65 С, что позволяет разделить белки на 5 групп: А, В, С, D, Е, с последующим определением относительной электрофоретической подвижности каждого белкового компбнента, учитывая расстояние от старта, пройденное ре2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ ГИБРИДНОСТИ СЕМЯН КУКУРУЗЫ (57) Изобретение относится к области биотехнологии и касается определения степени гибридности F, кукурузы. Способ может успешно применяться в семеноводстве кукурузы. Целью изобретения является повышение точности определения уровня гибридности. Способ состоит в том, что зеин экстрагируют

60-707.-ным изопронанолом в течение

50-80 мин при температуре 55-65 С, затем осуществляют их электрофоретическое разделение, после чего компоненты группируют относительно реперных,В4а и С 2 табл.

Ж перными характерными компонентами

В и С

Пример . Используют гибридные композиции: CO

1) $ ВИР 157ТС х о ВИР 1583T — в гибрид Прогресс ТВ. пДЬ

2) 9 ВИР 40ТС . о С 103-ЗТ вЂ” гибрид Краснодарский ПГ-201 ТВ.

3) V 05092 TC о А 44-ЗТ вЂ” гибрид

Луна ТС.

4) WI -23 ТВ i о Н155 — гибрид

Краснодарский 3ТВ.

5) g ВИР 38 ТС к 4 ВИР 116 ЗТ

1гибрид Звезда ТС.

От эерновки, противоположной зародьппу, отделяют участок эндосперма массой 50-70 мг, измельчают на микроизмельчителе, заливают 150 мкл

657-ного изопропанола, перемешивают

1595407

55 и ставят на водяную баню на 60 мин о при 60 С. Цеитрифугируют при 5000я в течение 10 мии. Из надосадочной жидкости берут аликвоту в 50-60 мкл и упаривают досуха под феном. Белок

:растворяют в 25-30 мкл раствора, содержащего 8 М мочевины, 0,6R уксусной кислоты, 57. 2-меркаптоэтанола и

20Х сахарозы и после прогрева на кипящей водяной бане в течение 5 мин наносят на дорожку геля.

Электрофорез проводят в 1QX-ном полиакриламидном геле в уксуснокислой ! системе, содержащей 8 М мочевины, в геле толщиной 1 мм с карманами 1 см.

После окончания электрофореза гель фиксируют в течение 30 мин в 10Х-ном растворе трихлоруксусиой кислоты, с окрашивают 0,001".-ныл раствором кумасси R — 250 в течение 1,5-2 ч и замеряют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) белковых компо1 нентов, определив расстояние от старта двух реперных В,. и С„ . Последние легко идентифицируются на электрофореграммах, являясь нижними компонентами двух самых мощных сдвоенных комнонентов. Определив ОЭП всех компонентов, объединяют их в группы в соответствии с их ОЭП: А-группа включает компоненты с ОЭП от 0 до 35, В-группа — с ОЭН от 36.до 42, С-группа.- от 43 до 48; В-группа -- от 49 до 56 и Е-группа — от 57 до 100. На основании подобного анализа электроферограмм составляют белковые формулы для гибридов и их родительских линий. После электрофоретического анализа 100 зерновок гибрида и сравнения их формул с формулами родителей подсчитывают уровень гибридности (количество гибридных зерен) для каждого гибрида. При этом следует помнить, что гибридным считается такое зерно, зеиновый спектр которого включает все позиции белковых компонентов от-, цовской и материнской линии.

В табл. 1 приведены в качестве примера зеиновые (белковые) формулы. гибрида Краснодарский МГ-201 ТВ и его .родительских линий. Уровень его гибридности составил 74Ж, т.е. из

100 проанализированных зерен только

74 имели в своем наборе все компоненты материнской и отцовской линий, остальные 26 зерен имели только материнскую формулу и, следовательно, получены были в результате самоопыления.

В табл. 2 представлены эксперимен-! тальные данные по различному соотношению трех важнейших факторов при из10 влечении зеиновых белков: концентрация изопропанола, время экстракции и температура. Видно, что оптимальными данные параметры были при 60-70Х изопропанола, времени 50-80 мин и

15 температуре 55-65 С. При этом количество компонентов в .составе зеина, извлеченных из эндосперма, было максимальным.

Использование предложенного спо20

- соба определения уровня гибридности семян кукурузы по сравнению с существующим имеет следующие преимущества: позволяет проводить оценку гибридности даже в случае, если родительские линии очень близки по,происхождению; благодаря разработанной номенклатуре записи данных о генотипе в виде зеиновых (белковых) формул возможно вводить и хранить сведения о гибридных комбинациях в памяти 3ВМ (создать банк данных по всем гибридным комбинациям); это позволит выявлять также происхождение примесей (инородного генетического материала) в каждой конкретной зоне семеноводческих хозяйств;.изобретение позволяет сохранить селекционный материал для получения потомства.

Формула изобретения

Способ определения уровня гибридности семян кукурузы, включающий экстракцию зеина и его электрофоретическое разделение с последующим анализом полученных электрофореграмм, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности определения, экстракцию зеина проводят 60-70Х-ным изопропанолом в течение 50-80 мин при

55-65 С и при анализе фореграмм белL ковые компоненты группируют в соответствии с их относительной электрофоретической подвижностью, приняв за внутренний стандарт наиболее характерные компоненты В и С 1.

1595407

Таблица 1

Образцы

С D Е

49, 53, 56 60, 67, 70, 74, 76, 92 ф ВИР 40 ТС

16, 18, 20, 27, 32,38; 40 44, 47

Гибрид Красно-. дарский

ПГ-201ТВ

49, 53, 56 60, 63, 67, 70, 74, 76, 92

49, 53, 56 60, 63, 67, 76

16, 18, 20, 27, 29, 38, 4Î 44, 47

32 С 103-ЗТ

18, 24, 29, 32 38, 40 44, 47

Таблица 2 б

Условил экстраклии

16 ) 18

+ +

+ +

+ ° б

+ + б б + б + б

+ + б +

+ + б +

+ +

+ б

+ б

+ б б +

+ б

+ б

+ +

+ +

+ +

+ + +

+ +

+ + б +

Редактор М.Циткина

Заказ 2864 Тирах 436 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб. ° д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ухгород, ул. Гагарина, 101

55I нзопроланолв прн

50 C 45 ннн

55I изопропанола при

60 С, 45 нин

55Х нзопропанола при

65 С, 45нин

55Х нэопропанолв прн

65бС, 50 мин

60I изопропанола при

65 С, 50 r

70Х изопропвнола при

55бС 50 нин

70Х изопропвнола прн

65 С, ВОнин

70I изопропвнола при

55 С, 80 инн

60Х иэопропаIIQlI1 при

55 С, 50 инн

75I нзопропвнола при

55 С, 50инн

757. изопропанола лри

70 С, 50 инн

75Х иэопропвнола прн

70 С, ВО иии

Группы компонентов, ОЭП.

1 в ) J (ОЭО коипонентон

) Z0 ) г7 )II}56(40)44) 47 ) 45) 551 56) 60 1 67 t 70 74

Составитель ВвДемкин

Техред М.Дидык Корректор М.Шароши