Способ получения окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности

Способ получения окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к способам получения окрашенных соединений и может быть использовано в энзимологии, микробиологии и микробиологической промышленности в качестве субстрата для определения целлюлазной активности в ферментных препаратах и в биологических средах. Целью изобретения является упрощение способа, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта. Способ заключается в том, что при получении окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание активного красителя, содержащего дихлортриазиновые или монохлортриазиновые группы с водонерастворимой оксиэтилцеллюлозой при 25-90°С. Краситель берут в количестве 2-50% от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой дистиллированной водой. 1 з.п.ф., 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4270009/30-13 (22) 12.05.87 (46) 23.10.90. Бюл. № 39 (71) Ташкентский государственный университет им. В.И.Ленина (72) К.Султанов, Б.Т.Юлдашев, Ш.P.Ìàäüÿðîâ, Г.В.Никонович и М.N.Ðàõèìoâ (53) 577.15.08 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹- l056055, кл. G 01 N 33/52, 1983.

Рабинович M.Ë, Савицкене P.Þ., Герасимас В.Б., Мельник N.С., Новикова Т.В., Степанавичюс f0.Þ,, Денис Г.Й., Клесов А.А. Окрашенный субстрат целлюлаз. Области применения. — Биоорган. химия, 1985, т. 11, с. 1330-1342. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКРАШЕННОГО

СУБСТРАТА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛАЗНОИ АКТИВНОСТИ (57) Изобретение относится к спосоИзобретение относится к способам получения окрашенных соединений и может быть. использовано в энзимологии, микробиологии и микробиологической промышленности в качестве субЪ

/ страта для определения целлюлазной ак тив но сти в ферме нтных препаратах и биологических средах.

Цель изобретения — упрощение спо-, соба, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта.

Способ заключается в том, что при получении окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание ак

„,80„1601122 А 1 (1)5 С 12 Q 1/34

2 бам получения окрашенных соединений и может быть использовано s энзимологии, микробиологии и микробиологической промьппленности в качестве, субстрата для определения целлюлаз- ной активности в ферментных препаратах и в биологических средах. Целью изобретения является упрощение способа, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта. Способ заключается в том, что при получении ,окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание активного красителя, содержащего дихлортриазиновые или мо- нохлортриазиновые группы с водонерастворимой.оксиэтилцеллюлозой при

25-90 С. Краситель берут в количестве 2-50Х от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой дистиллированной водой.

1 з.п. ф-лы, 1 табл. тивного красителя, содержащего дихлортриазиновые или монохлортриаэиновые группы, с водонерастворимой ока сиэтилцеллюлозой при 25-90 С, причем краситель берут в количестве 2507 от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой водой.

Пример 1. 10 г оксиэтилцеллюлозы суспензируют в 100 мл 0,2Хного раствора красителя активного золотисто-желтого 2КХ, перемешивают

10 мин, вносят 20 г Na

1601122 (11 Г04 12Н О и перемешивают еще

1 мин. Все операции проводят при

3 С. Окрашенный продукт отделяют ф льтрованием, промывают теплой водой

5 д исчезновения окраски в ромывных в дах и высушивают íà воздухe. Выход 9,6 г.

Пример 2. 10 г оксиэтилцелл оэы суспендируют в 100 мл 2Х-ного аствора красителя активного золоисто-желтого 2КХ, далее процесс проодят как в примере 1, с тем изменеием, что после добавления фосфата атрия перемешивание осуществляют

О мин. Выход 10,5 r.

Пример 3. 10 г оксиэтилцелозы суспендируют в 100 мл 0,5Хого раствора красителя активного рко-желтого 53, перемешивают 10 мин, носят 30 r Na SOq и продолжают переешивать 30 мин. Затем приливают

0 мл 15Х-ного раствора Na POg 12H O перемешивают еще 40 мин, Все операо ии проводят при 80 С. Остальные перации как в примере 1. Выход 9,8 г.

Пример 4. 10 r оксиэтилцелюлозы суспендируют в 100 мл 5Х-ного аствора красителя активного яркоелтого 53, перемешивают 10 мин, вносят 30 г Na SO+ и продолжают перемешивать 30 мин. Затем приливают

30 мл 15Х-ного раствора Na>PO< 12Н О и перемешивают еще 60 мин, Все операо ции проводят при 80 С. Остальные

35, операции как в примере 1. Выход 12,,4 г.

Пример 5. Определение цел люлазной активности. В двух пробирках суспендируют по 50 мл субстрата (полученного согласно примеру 2) в 4 мл 0,1 N ацетатного буфера, 40 рН 4,5, при 40 С и перемешивают

5 мин. Затем в одну пробирку прилиЗначения показателей по примеру

Показатели

Известный 2

Ярко-желтый

Золотисто» желтый 2КХ

Краситель

Ярко-оранжевый

ЖТ

Дихлортриазиновая

370

Монохлоразиновая

410

Винилсульфоновая

490

12,6

6,9

0,9

Характеристика красителя

Активная группа

Максимум поглощения,нм

Характеристика 0,1Х-ного раствора субстрата в 85Хной Н1РО

Максимум поглощения, нм

Оптическая плотность вают 0,1 мл раствора целловиридина

ГЗх с концентрацией 60 мг/мл и продолжают перемешивание. В другую пробирку также приливают О, 1 мл указанного раствора фермента и содержимое быстро пропускают через фильтр (контроль). Через 20 мин реакционную смесь в первой пробирке пропускают через фильтр и определяют оптическую плотность фильтра при длине волны

375 нм против контрольной пробы. Оптическая плотность 0,74.

Сравнительная. оценка субстратов, изготовленных согласно примерам 2 и 4 по известному способу, дана в таблице.

Формула изобретения

1. Способ получения окрашенного субстрата для определения- целлюлаэной активности путем окрашивания целлюлозной подложки активным красителем, содержащим винилсульфоновую группу с последующим отделением несвязанного красителя промыванием, отличающийся тем, что, .с целью упрощения процесса, увеличения выхода и повьппения качества целевого продукта, в качестве целлюлозной подложки используют водонерастворимую оксиэтилцеллюлозу, а отделение несвязанного красителя осуществляют промыванием водой.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю—

Ф шийся тем, что окрашивание проводят при 25-90 С активным краситео лем, содержащим дихлортриазиновые или монохлортриазиновые группы с содержанием активного красителя в реакционной смеси 2-50Х от массы оксиэтилцеллюлозы.

Продолжение таблицы

1601122

Показатели

Значения показателей по примеру

Известный

Характеристика 0 17Х-ного гидролизата субстрата в ферментном растворе

Максимум поглощения, нм

Оптическая плотность

Выход субстрата, Х

Интервал линейной зависимости оптической плотности от глубины превращения субстрата

5,5

105

6,4

124

75-80.

0-24 „5

0-4,6

1-О, 1

Золотисто-желтая .окраска изменяется в красную.

+Ф

Интервал, достигаемый при 120 мин инкубацни.

Составитель А.Семенов

Техред М. Ходанич . Корректор C. Некмар

Редактор Н.Яцола

Заказ 3246 . Тир аж 488 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, эсква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101