Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего глобулина в сыворотке крови человека

Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего глобулина в сыворотке крови человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области медицинского микроанализа и может быть использовано в биохимии, медицине и физиологии человека для оценки эндокринного статуса организма. Цель изобретения заключается в ускорении и упрощении способа. Сущность изобретения состоит в том, что при радиоиммунологическом способе определения сексстероидсвязывающего глобулина (ССГ) в сыворотке крови человека разделение свободного и связанного с антителами ССГ осуществляют с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля, которые вносят в инкубационную среду вместе с антителами к ССГ перед началом инкубации анализируемой пробы. При этом инкубационная среда содержит следующие компоненты, мас.%: <SP POS="POST">125</SP>I-ССГ (10-20 мКи/ммоль) (1-2)<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-7</SP>

антитела к ССГ (2-3)<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-5</SP>

вторые антитела 0,09-0,18

ТриС 0,9-1,2

HCL 0,07-0,08

полиэтиленгликоль 4,5-5

дистиллированная вода остальное.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)э 6 01 и 33/534

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4403055/28-14 (22) 23.12.87 (46) 30.10.90. Бюл. М 40 (71) Институт биоорганической химии АН

БССР (72)Т.В. Карпова, А.Г. Прядко и О.А. Стрельченок (53) 612.015(088;8) (56) Lapidus L. et al. Clln. Chem. 986, ч. 32, р. 146-152. (54) СПОСОБ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕКССТЕРОИДСВЯЗЫВАЮЩЕГО ГЛОБУЛИНА В Cb180РОТЫЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к области медицинского микроанализа и может быть использовано в биохимии, медицине и

Изобретение относится к медицинскому микроанализу, а именно к способам радиоиммунологическога определения ССГ в сыворотке крови человека, и может быть использовано в.биохимии, медицине и физиологии человека для оценки эндокринно го статуса организма.

Цель изобретения — ускорение и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемые образцы сыворотки коови и калибровочные пробы инкубируют с

I-ССГ, антисывороткой к ССГ и вторыми антителами в буферном растворе полиэтиленгликоля при комнатной температуре в течение 1 ч, центрифугируют и проводят радиометрию осадков.

„„Я3 „„1603307 А1 физиологии человека для оценки эндокринного статуса организма, Цель изобретения заключается в ускорении и упрощении способа, Сущность изобретения состоит в том, что при радиоиммунологическом способе определения сексстероидсвяэывающего глобулина (ССГ) в сыворотке крови . человека разделение свободного и связанного с антителами ССГ осуществляют с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля, которые вносят в инкубационную среду вместе с антителами к ССГ перед началом инкубации анализируемой пробы. При этом инкубационная среда содержит следующие компоненты, мас, ; "1 — ССГ (10 — 20 мКи/ммоль) (1 — 2) 10; антитела к ССГ (2 — 3

3) 10; вторые антитела 0,09 — 0,18; Трис 0,9—

1,2; HCI 0,07 — 0,08; полиэтиленгликоль 4,5 — 5; дистиллированная вода остальное.

Инкубационная среда для радиоиммунологического определения ССГ содержит

I-ССГ, антитела к ССГ, вторые антитела и полиэтиленгликоль в буферном растворе при следующем соотношении компонентов, мас. ф:

I-ССГ (10 — 20 мКи/ммоль) (1 — 2).10

Антитела к ССГ (2 — 3) 10

Вторые антитела 0,09-0,18

Трис 0,9-1,2

HCI 0,07-0,08

Полиэтиленгликоль 4,5-5

Дистиллированная вода Остальное

Расчет концентрации антител в системе проводят по известному методу (R.Muller et.

aI. J. 1пипипо1. Meth., 1980, v. 34, р.. 345-352), 1603307

Расчеты. Находят среднее арифметическое значение скоростей счета для каждой пары пробирок. Рассчитывают величину

В/В0 для каждой пары пробирок калибровочного графика и неизвестных проб, где

Bo — средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочную пробу "О нмоль/л";  — средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочные или неизвестные пробы.

В полулогарифмических или loglt-log координатах строят для калибровочных проб график зависимости B/Âî от концентрации ССГ в этих пробах. Для неизвестных проб сыворотки крови на основании соответствующих значений В/В0 по калибровочному графику определяют концентрацию ССГ. Для образца анализируемой сыворотки крови значение В/В составляет

40, что соответствует концентрации ССГ

117 нмоль/л.

Пример 2. При.использованииданно.го способа и инкубационной среды следующего состава, мас. :

125! ССГ

Антитела к ССГ

Вторые антитела

1 10

2.10

0,09

Пример1.

1 ° 1..Готовят 100 мл раствора, содержащего 4,5 г полиэтиленгликоля, 1,2 r Трис, 0,2 мл НО (dg4-,116) ° 100 мкл антител к иммуноглобулинам кролика и антитела к /

ССГ в конечной концентрации 1:5000, рН 8,6.

1.2, Обозначают по две пробирки для подсчета общей активности l-ССГ Щ, для калибровочных проб ССГ и для анализируемых образцов сыворотки крови.

1.3. В аналитические пробирки вносят по 0,05 мл калибровочных проб, содержащих 0; 10; 20; 40; 80; 160; 320; 640 нмоль/л

CCI, и анализируемых образцов сыворотки крови согласно маркировке.

1.4. Во все пробирки вносят по 100 мкл раствора." l-ССГ (40000 расп,/мин). l.5. Во все пробирки, кроме Т, вносят по

l мл раствора полиэтиленгликоля, приготовленного по и. 1.1. Содержимое пробирок тщательно перемешивают, 1.6, Инкубируют все пробирки при комнатной температуре в течение 1 ч.

1.7. Все пробирки, кроме Т, центрифугируют при ускорении 1500-2000 g в течение

20 мин.

1.8. Супернатант удаляют, измеряю скорость счета в каждой пробирке.

Трис 0,9

HCI 0,07

Полиэтиленгликоль 4,5

Дистиллированная вода остальное .

5 концентрация ССГ в анализируемом образце сыворотки крови составляет

130 нмоль/л.

Пример 3. При использовании данно10 ro способа и инкубационной среды следующего состава, мас. :

" 5 -ССГ 2, 10-7

Антитела к ССГ 3 10

Вторые антитела 0,18

15 Трис 1,2

HCI 0,08

Полиэтиленгликоль 5

Дистиллированная вода остальное, концентрация ССГ в анализируемом образ20 це сыворотки крови составляет 120 нмоль/л.

Таким образом, предлагаемый способ и инкубационная среда позволяют проводить радиоиммунохимический анализ ССГ в сыворотке крови человека в течение 1,525 2 ч по сравнению с 27 ч в прототипе. Диапазон определяемых концентраций способа (10-640 нмоль/л) охватывает все уровни

ССГ в сыворотке крови человека при различных физиологических состояниях орга30 низма, что упрощает способ определения.

Формула изобретения

Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего гло35 булина в сыворотке крови человека, включающий инкубацию пробы с меченным I-сексстероидсвязывающим глобулином и специфическими антителами в буферном водном растворе, разделение свободного и

40 связанного с антителами антигена с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля и радиометрию осадка, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, перед инкубацией вносят вторые

45 антитела и полиэтиленгликоль вместе со специфическими антителами, при этом в качестве буферного раствора используют трис-HCI буфер при следующем соотношении компонентов. мас. :

50 l-Сексстероидсвязывающий глобулин (ССГ), 10 — 20 мКи/ммоль (1 — 2) 10

Антитела к ССГ (2 — 3) 10

55 Вторые антитела 0,09 — 0,18

Трис 0,9 — 1,2

HCI 0,07-0,08

Полиэтилен гли коль. 4,5-5

Дистиллированная вода Остальное