Способ получения растений-регенерантов картофеля из протопластов

Способ получения растений-регенерантов картофеля из протопластов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии растений, и касается получения регенерантов картофеля из протопластов. Целью изобретения является ускорение процесса получения регенерантов и увеличение их выхода. Способ состоит в том, что выделенные протопласты сначала помещают на твердую питательную среду, затем образующиеся колонии переносят в жидкую среду и в жидкой же среде получают регенеранты. 3 з.п. ф-лы. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

И (21) 4629087/31-13 (22) 30;12.88 (46) 07.11.90. Бюл. ¹ 41 (71) Отделение клеточной биологии и инженерии Института ботаники АН УССР (72) В.А.Сидоров, В.M.Ñàìoéëîâ и Ю.Ю.Глеба (53) 578.085.23 (088,8) (56) Сидоров B.À, и др. Соматическая гибридизация Пасленовых. — Киев: Наукова думка, 1985, с. 52 — 56, 106.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, клеток, а также протопластов, и может быть использовано для нужд генетики и селекции в сельском хозяйстве.

Целью изобретения является ускорение процесса получения растений-регенерантов и увеличение их выхода. Ф

Способ состоит в том, что выделенные из растений протопласты помещают в твердую питательную среду. В качестве питательной среды используют, например, среду SW. Через 7 — 10 дней твердую питательную среду с образовавшимися колониями переносят в жидкую среду СТ 1, Культивируют колонии на свету при постоянном перемешивании. Через 7 — 10 дней питательную среду СТ 1 меняют на жидкую регенерационную среду СТ 2, Обновление среды СТ 2 производят каждые 7 — 8 дней.

Из индивидуальных колоний, возникших в результате деления протопластов, при та. Ы 1604275 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГEHEPAHTOB КАРТОФЕЛЯ ИЗ ПРОТОПЛАСТОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии растений, и касается получения регенерантов картофеля из протопластов. Целью изобретения является ускорение процесса получения регенерантов и увеличение их выхода, Способ состоит в том, что выделенные протопласты сначала помещают на твердую питательнуla среду, затем образующиеся колонии переносят в жидкую среду и в жидкой же среде получают регенеранты. 3 з.п. ф-лы, 2 табл. ких условиях культивирования на указанной питательной среде через 15 — 20 дней формируются побеги.

Использование твердой питательнОй . среды в начальный период процесса существенно повышает эффективность деления клеток, Первые деления их наблюдают уже на 2 — 3-й день культивирования. Последующее использование жидкой питательной среды при постоянном перемешивании позволяет ресуспендировать твердую среду и высвободить образовавшиеся клеточные колонии. Дальнейшее использование жидких питательных сред позволяет существенна сократить процесс регенерации растений (до 15 — 20 дней) и устранить значительные трудности, которые имеют место при использовании твердых питательных сред в связи с пересадкой колоний.

Пример 1. Берут жидкую питательную среду для протопластов, например, $ЧЧ(стерилизуют фильтрованием) и добавляют в колбу с простерилизованной агарозой. Ка1604275 нечная концентрация агарозы в среде 0,6%.

Среду подогревают до полного растворения агарозы. Свежевыделенные протопласты картофеля сорта "Зарево" помещают в капле питательной среды в чашку Петри, Постоянно перемешивая, добавляют 10 — 15 мл теплой (36 — 40 С) питательной среды, содержащей агарозу. Конечная концентрация протопластов 10 — 10 шт. в 1 мл среды.

Чашку Петри закрывают парафилмом, Культивируют на рассеянном свету (100—

400 лк) при 24 —. 25 С. Через 7 — 10 дней твердую питательную среду, содержащую . клеточные колонйи из 3 — 5 клеток, разрезают на блоки и помещают в жидкую среду СТ

2 в колбах. Культивируют колонии на свегу (2000 лк) при постоянном перемешивании, Через 7 — 8 дней среду СТ 1 меняют на жидкую среду СТ2, которую обновляют каждые 7 — 8 дней, причем. после 10 — 14 дней культивирования колоний на этой среде наблюдают процесс регенерации растений, Колонии с образовавшимися побегами или отдельные побеги переносят для укоренения на среду МС без фитогормонов (табл,1), Пример 2. Все приемы и последовательность действий аналогичны примеру 1, но используют среду.с конечным содержанием агарозы 0,8% . Таким образом осуществляют регенерацию растений картофеля из протопластов.

Предлагаемый способ позволяет сократить время регенерации растений картофеля из протопластов примерно в 2 раза и

Таблица1

Со е жание компонентов, мг/л, в с е е

Компоненты. СТ-1

СТ 2

133,75

Вь

267,5

МС

267,5

МС

100

100

0,5

0,05

100

0,5

0,5

0,5

0,05

100

0,5

0,5

Макроэлементы и Н4С!

КМОз

СаС!г 2НгО

MgSO4 7Нг0

КНгР04, Микроэлементы

Витамины, гормоны и другие

Мезоинозит

Глютамин

Ксилоза

Никотиновая кислота

Фолиевая кислота

Глицин

Биотин

Аденин сульфат

Гидролизат каэеина

Â1

В6 увеличить выход растений-регенерантов, Сокращаются также затраты труда и средств в связи с исключением операции пересадки клеточных колоний на твердые

5 среды (табл.2).

Формула изобретения

1. Способ получения растений-регене10 рантов картофеля из протопластов, включающий выделение протопластов, их культивирование на питательной среде и последующую регенерацию; о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ускорения про 15 цесса получения растений-регенерантов и увеличения их выхода, культивирование йротопластов осуществляют путем помещения их в твердую.агариаованную питательную среду с .последующим переносом

20 образовавшихся из них клеточных колоний в жидкую питательную среду, а регенерацию осуществляют в жидкой питательной среде.

2, Способ по п.1; отличающийся

25 тем, что в качестве твердой агаризованной среды используют среду SW, в качестве жидкой — СТ 1, а регенерацию осуществляют на среде.СТ 2.

3. Способ по л.1,,отличающийся

30 тем, что.культивирование клеточных колоний в жидкой питательной среде осуществляют при постоянном перемешивании.

4. Способпоп.1,отличающийся тем, что в твердую питательную среду до3 бд, о..ют агарозу в концентрации 0,6 — 0,8%.

1604275

Продолжение табл.1

Таблица2

Составитель B.Äåìêèí

Техред М.Моргентал Корректор А.Обручар

Редактор А,Мотыль

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 3406 Тираж 417 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, М(-35, Раушская наб., 4/5