Способ получения растений-регенерантов картофеля из протопластов
Иллюстрации
Показать всеРеферат
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии растений, и касается получения регенерантов картофеля из протопластов. Целью изобретения является ускорение процесса получения регенерантов и увеличение их выхода. Способ состоит в том, что выделенные протопласты сначала помещают на твердую питательную среду, затем образующиеся колонии переносят в жидкую среду и в жидкой же среде получают регенеранты. 3 з.п. ф-лы. 2 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 Н 4/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
И (21) 4629087/31-13 (22) 30;12.88 (46) 07.11.90. Бюл. ¹ 41 (71) Отделение клеточной биологии и инженерии Института ботаники АН УССР (72) В.А.Сидоров, В.M.Ñàìoéëîâ и Ю.Ю.Глеба (53) 578.085.23 (088,8) (56) Сидоров B.À, и др. Соматическая гибридизация Пасленовых. — Киев: Наукова думка, 1985, с. 52 — 56, 106.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, клеток, а также протопластов, и может быть использовано для нужд генетики и селекции в сельском хозяйстве.
Целью изобретения является ускорение процесса получения растений-регенерантов и увеличение их выхода. Ф
Способ состоит в том, что выделенные из растений протопласты помещают в твердую питательную среду. В качестве питательной среды используют, например, среду SW. Через 7 — 10 дней твердую питательную среду с образовавшимися колониями переносят в жидкую среду СТ 1, Культивируют колонии на свету при постоянном перемешивании. Через 7 — 10 дней питательную среду СТ 1 меняют на жидкую регенерационную среду СТ 2, Обновление среды СТ 2 производят каждые 7 — 8 дней.
Из индивидуальных колоний, возникших в результате деления протопластов, при та. Ы 1604275 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГEHEPAHTOB КАРТОФЕЛЯ ИЗ ПРОТОПЛАСТОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии растений, и касается получения регенерантов картофеля из протопластов. Целью изобретения является ускорение процесса получения регенерантов и увеличение их выхода, Способ состоит в том, что выделенные протопласты сначала помещают на твердую питательнуla среду, затем образующиеся колонии переносят в жидкую среду и в жидкой же среде получают регенеранты. 3 з.п. ф-лы, 2 табл. ких условиях культивирования на указанной питательной среде через 15 — 20 дней формируются побеги.
Использование твердой питательнОй . среды в начальный период процесса существенно повышает эффективность деления клеток, Первые деления их наблюдают уже на 2 — 3-й день культивирования. Последующее использование жидкой питательной среды при постоянном перемешивании позволяет ресуспендировать твердую среду и высвободить образовавшиеся клеточные колонии. Дальнейшее использование жидких питательных сред позволяет существенна сократить процесс регенерации растений (до 15 — 20 дней) и устранить значительные трудности, которые имеют место при использовании твердых питательных сред в связи с пересадкой колоний.
Пример 1. Берут жидкую питательную среду для протопластов, например, $ЧЧ(стерилизуют фильтрованием) и добавляют в колбу с простерилизованной агарозой. Ка1604275 нечная концентрация агарозы в среде 0,6%.
Среду подогревают до полного растворения агарозы. Свежевыделенные протопласты картофеля сорта "Зарево" помещают в капле питательной среды в чашку Петри, Постоянно перемешивая, добавляют 10 — 15 мл теплой (36 — 40 С) питательной среды, содержащей агарозу. Конечная концентрация протопластов 10 — 10 шт. в 1 мл среды.
Чашку Петри закрывают парафилмом, Культивируют на рассеянном свету (100—
400 лк) при 24 —. 25 С. Через 7 — 10 дней твердую питательную среду, содержащую . клеточные колонйи из 3 — 5 клеток, разрезают на блоки и помещают в жидкую среду СТ
2 в колбах. Культивируют колонии на свегу (2000 лк) при постоянном перемешивании, Через 7 — 8 дней среду СТ 1 меняют на жидкую среду СТ2, которую обновляют каждые 7 — 8 дней, причем. после 10 — 14 дней культивирования колоний на этой среде наблюдают процесс регенерации растений, Колонии с образовавшимися побегами или отдельные побеги переносят для укоренения на среду МС без фитогормонов (табл,1), Пример 2. Все приемы и последовательность действий аналогичны примеру 1, но используют среду.с конечным содержанием агарозы 0,8% . Таким образом осуществляют регенерацию растений картофеля из протопластов.
Предлагаемый способ позволяет сократить время регенерации растений картофеля из протопластов примерно в 2 раза и
Таблица1
Со е жание компонентов, мг/л, в с е е
Компоненты. СТ-1
СТ 2
133,75
Вь
267,5
МС
267,5
МС
100
100
0,5
0,05
100
0,5
0,5
0,5
0,05
100
0,5
0,5
Макроэлементы и Н4С!
КМОз
СаС!г 2НгО
MgSO4 7Нг0
КНгР04, Микроэлементы
Витамины, гормоны и другие
Мезоинозит
Глютамин
Ксилоза
Никотиновая кислота
Фолиевая кислота
Глицин
Биотин
Аденин сульфат
Гидролизат каэеина
Â1
В6 увеличить выход растений-регенерантов, Сокращаются также затраты труда и средств в связи с исключением операции пересадки клеточных колоний на твердые
5 среды (табл.2).
Формула изобретения
1. Способ получения растений-регене10 рантов картофеля из протопластов, включающий выделение протопластов, их культивирование на питательной среде и последующую регенерацию; о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ускорения про 15 цесса получения растений-регенерантов и увеличения их выхода, культивирование йротопластов осуществляют путем помещения их в твердую.агариаованную питательную среду с .последующим переносом
20 образовавшихся из них клеточных колоний в жидкую питательную среду, а регенерацию осуществляют в жидкой питательной среде.
2, Способ по п.1; отличающийся
25 тем, что в качестве твердой агаризованной среды используют среду SW, в качестве жидкой — СТ 1, а регенерацию осуществляют на среде.СТ 2.
3. Способ по л.1,,отличающийся
30 тем, что.культивирование клеточных колоний в жидкой питательной среде осуществляют при постоянном перемешивании.
4. Способпоп.1,отличающийся тем, что в твердую питательную среду до3 бд, о..ют агарозу в концентрации 0,6 — 0,8%.
1604275
Продолжение табл.1
Таблица2
Составитель B.Äåìêèí
Техред М.Моргентал Корректор А.Обручар
Редактор А,Мотыль
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101
Заказ 3406 Тираж 417 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, М(-35, Раушская наб., 4/5