Способ определения состояния микрофлоры кишечника

Способ определения состояния микрофлоры кишечника

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано для характеристики патогенности микроорганизмов, уточнения патогеноза заболевания. Целью изобретения является сокращение сроков, повышение точности и упрощение способа. Для определения количества адгезивно-активных бактерий на первичные колонии микрофлоры фекалий наносят взвесь эритроцитов морской свинки. Проводят агглютинацию эритроцитов. Для установления типа адгезинов проводят репликацию первичных посевов и полученные колонии обрабатывают эритроцитами разных видов животных с последующим учетом результатов. Способ может найти применение для оценки патогенности микроорганизмов и ее роли в возникновении заболеваний.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)з С 12 0 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ы (21) 4640117/30-13 (22) 19.01.89 (46) 07,12,90, Бюл, N 45 (71) Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского (72) С.С. Гизатулина, M,О, Биргер, Л.И. Кулинич, Н.Г. Фиш и О.П, Мазитова (53) 579.24.08(088.8) (56) Ewans D, J., Ewans О. G., Du Pont Н, L.

Hemagglutination patterns of entегоtoxigenic

and entегоpathogenic Escherichia coIi

determined with human, bovine, chiken, and

guinea pig erythrocytes in the Presence and аЬвсепсе of mannose. — Infection and

Immuniti, 1979, 23, ¹ 2, р. 336 — 346, Брилис В.И., Брилене T.À., Лецнер А.А.

Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов. — Лабораторное дело, 1986, №4, с. 210 — 212, Изобретение относится к медицине, в частности в медицинской микробиологии, и может быть использовано для характеристики патогенности микроорганизмов и уточнения патогенеза заболевания.

Целью изобретения является сокращение сроков, повышение точности и упрощение способа.

Выделения человека сеют на плотную питательную среду, обеспечивающую рост ожидаемых микроорганизмов в концентрации, обеспечивающей рост изолированных колоний, инкубируют при 37 С 18 — 20 ч, на поверхность агаризованной среды с выросшими колониями наносят 3%-ную взвесь эритроцитов, отмытых фосфатным буфером рН 7,2. Через 2 — 5 мин чашки просматрива„,. Ы,, 1611932 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ

МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА (57) Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано для характеристики патогенности микроорганизмов, уточнения патогеноза заболевания, Целью изобретения является сокращение сроков, повышение точности и упрощение способа.

Для определения количества адгезин-активных бактерий на первичные колонии микрофлоры фекалий наносят взвесь эритроцитов морской свинки. Проводят агглютинацию аритроцитов. Для установления типа адгезинов проводят репликацию первичных посевов и полученные колонии обрабатывают эритроцитами разных видов животных с последующим" учетом результатов; Способ может найти применение для оценки патогенности микроорганизмов и ее роли в возникновении заболеваний, ют под бинокулярной лупой и учитывают наличие и степень агглютинации и эритроцитов на колониях. Реакцию оценивают как положительную в том случае, если вокруг колонии образуется плотный ореол прикрепленных к ее краю эритроцитов. Резко положительной считают реакцию, в которой наблюдают быстрое прикрепление к колонии большого числа эритроцитов, покрывающих всю ее поверхность с образованием на поверхности скоплений агглютината и яркого ореола вокруг нее, Отсутствие ореола из прикрепленных к колонии эритроцитов говорит об отрицательной реакции. При необходимости определения типа адгезинов с первичного посева с помощью репликатора делают отпечатки на чашки с той же

1611932 питательной средой. Количество чашек должно соответствовать количеству видов эритроцитов, взятых в опыт, Полученные реплики инкубируют 18 — 20 ч при 37 С, эа- . тем в каждую чашку вносяти 3%-ную взвесь отмытых фосфатным буфером рН 7,2 эрит роцитов определенной видовой принадлежности, Через 2-5 мин учитывают результаты, 10

По классификации Evans определяют тип адгезина, экспрессируемый микробами, образовавшими данную колонию, Таким образом на основе полученных результатов определяют количество адгезин-активных бактерий и тип адгезинов, Пример 1, Определение адгезивности бактерий микрофлоры кишечника детей, больных диареей.

1 r фекалий суспензируют в 9,0 мл стерильного иэотонического раствора хлористого натрия, из этой суспензии делаю серийные десятикратные разведения, из разведения 10 проводят высев 0,1 мл на

5 . чашку Петри с 2%-ным мясопептонным ага| ром, рассев осуществляют стериальными 25 бусами для получения изолированных коло, ний, чашки инкубируют при 37 С в течение

18 — 20 ч. На выросшие колонии наносят, 3%-ную суспензию эритроцитов морской свинки, так как известно, что с помощью 30 этих эритроцитов можно обнаружить фимб рии типа, чаще всего встречающиеся у

„, энтеробактерий. Через 2 — 5 мин просматривают под бинокулярной лупой, подсчитывают общее число колоний с положительной 35 реакцией.

В посеве фекалий 159 детей, больных диареей, в 138 случаях (86,8%) отмечено на личие — адгеэин активных колоний энтеробактерий, Причем среди этих t38 детей у 40 130 в первичном посеве фекалий все 100% выросших колоний были адгезивно активны, что составляет 81,8% от всего количества детей, взятых в опыт. Необходимо отметить высокую степень интенсивности 45 реакции между микробами колоний и эритроцитами в этих посевах.

У 8 (5%) детей адгезивность колоний в первичном посеве не превышала 50% уровня, т.в, не более половины выросших коло- 50 ний были адгезивны.

Таким образом у детей больных диареей в высоком проценте случаев (81,8%) все колонии первичного посева обладали адгезив ными свойствами, и ричем я рко вы- 55 раженными, Пример 2. По той же методике обследовано 60 клинически здоровых детей. В 48 случаях (80%) в первичном посеве фекалий не обнаружено адгезин-активных колоний. У 9 детей (15%) количество адгеэин-активных колоний было на уровне 40—

50% и лишь в 5% случаев (3 ребенка) все колонии первичного посева фекалий были адгезивно активны. Таким образом у практически здоровых детей адгезивные колонии в первичном посеве встречали редко (не выше 5%) и интенсивность адгезии была невысока.

Пример 3, Однокоментное определение адгезивности бактерий микрофлоры кишечника и типа адгезинов.

С чашки с первичным посевом после инкубации при 37 С в течение 18 ч реплицируют выросший материал на 5 чашек с той же средой и инкубируют 18 ч при 37 С. На чашки наносят 3%-ную суспензию эритроцитов. На каждую чашку наносят эритроциты одного вида (человека, морской свинки, барабана, быка, цыпленка). Через 2-5 мин просматривают под бинокулярной лупой и учитывают результаты. Система оценки та же.

Всего исследовано 900 колоний (в среднем по 30 колоний в каждом посеве). Из них

290 колоний реагировали с теми или иными эритроцитами. Выделенные адгезин-активные бактерии различались по типам адгезинов. В соответствии с классификацией

Evans их можно было отнести к адгезинам I типа СФА/1, P-фимбриям и фимбриям, описанным у штамма Е 8775, реагирующим только с эритроцитами человека, При этом от одного больного можно было выделить микробные клетки с разными типами адгезинов, Из 40 колоний, выделенных от больного Н, 30 реагировали только с эритроцитами человека, 7 обладали фимбриями, реагирующими с эритроцитами человека, эритроцитами морской свинки, эритроцитами барана и эритроцитами цыпленка, т.е. имели 1 тип адгезинов, 3 колонии с эритроцитами человека, эритроцитами барана (P-фимбрии), Из 20 культур, выделенных от больного К, 15 реагировали только.с эритроцитами человека, 5 колоний — с эритроцитами человека, быка, цыпленка(СФА/! тип), Использование способа позволило уже на вторые сутки получить характеристику высеваемой популяции как по наличию адгезинактивных бактерий (в процентах), так и по типам их адгезинов, Эти данные дают возможность подтверждения или установления этиологического диагноза заболевания, особенно вызванного условно-патогенными микробами, Таким образом предлагаемый способ позволяет анализировать по признаку адгезии все колонии, выросшие на ча1ике, исключает ошибку случайной выборки

1611932

Формула изобретения

Способ определения состояния микрофлоры кишечника, включающий посев исследуемого образца фекалий на плотную питательную среду, получение колоний, постановку реакции гемагглютинации с тестСоставитель А.Федоров

Техред М,Моргентал Корректор А.Обручар, Редактор Н.Бобкова

Заказ 3813 Тираж 487 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 колоний, позволяетотобрать на чашке колони заведомо обладающие и не обладающие адгеэинами, сокращает срок анализа и по. зволяет установить тип адгезинов уже на вторые сутки, Кроме того, способ прост в исполнении и не требует специального оборудования. эритроцитами с последующей оценкой количества адгезин-активных бактерий по степени взаимодействия с эритроцитами, отличающийся тем, что, с. целью

5 сокращения сроков, повышения точности и упрощения способа, реакцию гемагглютинации и оценку количества адгезин-активных бактерий проводят непосредственно на поверхности колоний, при этом в качестве

10 тест-зритроцитов используют эритроциты морской свинки, затем дополнительно реплицируют колонии и наносят на реплики эритроциты животных разных видов с последующим определением типа адгезинов

15 по взаимодействию их с эритроцитами.