Адъювант

Адъювант

Реферат

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к масляным адьювантам. Целью изобретения является снижение вязкости и реактогенности препарата, а также повышение его адъювантных свойств. Для этого адъювант содержит полиальфаолефиновое масло (ПАОМ) и эмульгатор, при следующем соотношении компонентов, мас. полиальфа-олефиновое масло 85-95; эмульгатор 5-15. При этом в качестве эмульгатора можно использовать сорбитаноолеат, пента эритритоолеат, безводный ланолин и др. 7 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к масляным адъювантам, и может быть использовано в научно-исследовательской работе и биологической промышленности при разработке и производстве преимущественно средств специфической профилактики ящура для всех видов сельскохозяйственных животных. Целью изобретения является снижение вязкости и реактогенности препарата, а также повышение его адъювантных свойств. П р и м е р 1. Готовят пять смесей ингредиентов. Сведения об этом приведены в табл.1. При исследовании образцов противоящурных эмульсионных вакцин установлено, что при соотношении компонентов адъюванта 80:20 препараты обладают повышенной вязкостью (более 2000 мм²/с), а также повышенной реактогенностью. Эмульсионные препараты на основе адъюванта, приготовленного из компонентов, взятых в соотношении 97:3, являются нестабильными. Аналогичные результаты получают при использовании других эмульгаторов: пентаэритритоолеата, арлацела, безводного ланолина и других, стабилизирующих обратные эмульсии. Адъювант готовят следующие образом. Эмульгатор СПАН-80 растворяют в ПАОМ в оптимальных соотношениях и стерилизуют общепринятыми методами: либо методом стерилизующей фильтрации с помощью пластин марок СФ, ЕК, УАМ-150 и т.п. при комнатной температуре, либо нагреванием в сушильном шкафу до 120-130^оС в течение 1-1,5 ч. Готовый адъювант представляет собой маслянистую жидкость цвета от светло-желтого до коричневого в зависимости от качества эмульгатора СПАН-80. Допускается слабая опалесценция. Вязкость такого адъюванта при 20^оС колеблется в пределах 12-15 мм²/с в зависимости от вязкости масляной основы. Готовый адъювант проверяют на реактогенность на белых мышах и хранят при комнатной температуре до момента использования. Реактогенность предлагаемого адъюванта и его компонентов в сравнении с прототипом и его ингредиентом контролируют на белых мышах. Для этого группе мышей в количестве 10 голов массой 201 г каждая в одну из задних лопаток подкожно в область стопы вводят образцы по 0,05 мл. Через 10 дней после введения задние лапки обрезают по скакательный сустав и взвешивают. Реактогенность (Р) определяют как процент образовавшейся массы опухоли лапок от введения образца по сравнению с контрольными лапками и выражают формулой: P 1100% где М_о сумма масс лапок, в которые были введены образцы; М_к сумма масс контрольных лапок. Результаты сравнительной оценки реактогенности различных масел и адъювантов представлены в табл.2. Из представленных в табл.2 данных следует, что предлагаемый адъювант и ПАОМ обладают наименьшей реактогенностью для мышей в сравнении как с отечественным минеральным маслом, так и зарубежным Маркол-52 и неполным адъювантом Фрейнда, используемыми для производства противоящурных биопрепаратов. Кроме количественной характеристики реактогенность предлагаемого адъюванта и ПАОМ изучают при подкожном введении в качественной пробе на крупном рогатом скоте, овцах, кроликах и при внутримышечном на свиньях и морских свинцах. Результаты исследования приведены в табл.3. Изготовление эмульсионной формы вакцины с новым адъювантом сводится к приготовлению эмульсии типа воды в масле. Эмульсионную вакцину получают путем эмульгирования равных частей полученного антигена и предлагаемого адъюванта с помощью коллоидных мельниц или других гомогенизаторов до образования эмульсии белого цвета. В результате получают противоящурную эмульгированную вакцину, не растворимую в воде, жидкой консистенции (до 700 мм²/с), которая легко рассасывается с места введения, не вызывает образования абсцессов, обладает выраженной иммуногенностью для КРС в дозе 2 мл и для свиней в дозе 1 мл через 21 день после вакцинации. Вакцину вводят свиньям внутримышечно, а КРС и белым мышам подкожно. Сорбированно-масляную форму вакцины готовят путем механического смешивания сорбированного антигена и предлагаемого адъюванта. Из представленных в табл.3 данных следует, что при подкожном и внутримышечном введении образцов предлагаемого масла и адъюванта местные реакции у животных отсутствуют или отмечаются небольшие соединительно-тканевые гранулемы, в то время как компоненты известного адъюванта обладают повышенной реактогенностью с образованием абсцессов. П р и м е р 2. Эффективность предлагаемого адъюванта проварена в экспериментах на лабораторных и сельскохозяйст- венных животных и двух формах противоящурной вакцины: эмульсионной и сорбированно-масляной из лапинизированного вируса А₂₂. Сорбированно-масляную вакцину вводят белым мышам подкожно. В лабораторных опытах контроль авирулентности инактивированных антигенов контролируют на новорожденных мышатах. При введении 20 мышатам-сосунам в дозе по 0,1 мл подкожно все антигены были авирулентны. Проводят испытания на стабильность эмульсии образцов противоящурной вакцины на основе предлагаемого адъюванта. Результаты представлены в табл.4. При диспергировании водного антигена с соответствующим количеством адъюванта получают во всех случаях стабильные эмульсии типа воды в масле, за исключением 5 образца, в котором 1,5 мас. эмульгатора было недостаточно для получения стабильной эмульсии, а ведение в состав эмульсии 10 мас. эмульгатора приводит к образованию высоковязких препаратов. Стабильность эмульсии контролируют путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 30 мин и хранения в термостате при 37^оС в течение 1 месяца. При такой проверке не отмечают отделения водной фазы и эмульсия сохраняет свои физические свойства. Эмульсии на основе предлагаемого адъюванта относятся к типу воды в масле и отличаются выраженной стабильностью и относительно невысокой вязкостью в широком интервале температур от 4 до 25^оС, что выгодно отличает ее от вакцины на основе известного адъюванта. Таким образом, предлагаемый адъювант позволяет получать эмульсионные формы вакцин типа воды в масле с невысокой вязкостью, умеренной реактогенностью и незастывающими при хранении при температуре 2-6^оС. П р и м е р 3. Для испытания на лабораторных животных изготавливают две серии эмульсионной и две серии сорбированно-масляной противоящурной вакцины из лапинизированного вируса А₂₂ соответственно на основе предлагаемого и известного адъювантов. Кроме того, из этого антигена изготовлена противоящурная сорбированная вакцина. Количество 146S компонента во всех образцах вакцин было равноценным. Результаты иммуногенности на взрослых белых мышах представлены в табл.5. Из табл.5 видно, что наиболее выраженной иммуногенностью обладают вакцины, изготовленные на основе полиальфа-олефинового масла. При этом установлено, что эмульсионная вакцина с предлагаемым адъювантом почти в три раза активнее препарата на основе известного адъюванта (ИМД₅₀ 0,087 мл против 0,250 мл). Сорбированно-масляная вакцина на основе предлагаемого адъюванта активнее вакцины этой же формы с известным адъювантом и в 6 раз активнее сорбированной (ИМД₅₀ 0,054 мл против 0,066 и 0,320 мл соответственно). Одновременно отмечено, что у мышей на месте введения эмульсионной вакцины, приготовленной на основе предлагаемого адъюванта, местных реакций не установлено, а у остальных животных в особенности при введении сорбированно-масляной вакцины с известным адъювантом, отмечены абсцессы. П р и м е р 4. Для испытания на свиньях используют по одной серии эмульсионной противоящурной вакцины из лапинизированного вируса А₂₂, приготовленных на предлагаемом (серия 173) и предлагаемом (серия 168) адъювантах. Испытание иммунитета проводят на подсвинках массой 30-35 кг, привитых эмульсионной вакциной внутримышечно в объеме по 1 мл и зараженных путем введения в слизистую оболочку языка гомологического афтозного вируса в дозе 10000 ЛД₅₀/0,2 мл. При этом испытание проводят на 21-й день после введения вакцины. Результаты контроля иммуногенности образцов эмульсионной противоящурной вакцины из вируса типа А₂₂ приведены в табл.6. Из представленных в табл. 6 результатов следует, что противоящурная эмульсионная вакцина, изготовленная на основе предлагаемого адъюванта, обладает более выраженной иммуногенной активностью по сравнению с вакциной на основе предлагаемого адъюванта, где один подсвинок заболел ящуром с генерализацией процесса. Противоящурные вакцины с предлагаемым адъювантом обладают умеренной реактогенностью, т. к. при патолого-анатомическом исследовании на 30-й день после прививки у одного подсвинка изменений на месте введения не обнаружено, а у трех отмечены вакцинальные гранулемы со средним размером 3х2х1 см с хорошей организацией соединительной ткани, в то же время у всех подсвинков, привитых вакциной с известным адъювантом, обнаружены абсцессы. П р и м е р 5. В опытах на крупном рогатом скоте используют по одной серии противоящурной эмульсионной вакцины из лапинированного вируса ящура А₂₂, изготовленных на основе предлагаемого (серия 173) и известного (серия 168) адъювантов. Результаты контроля их иммуногенной активности представлены в табл.7. Из приведенных в табл.7 данных следует, что противоящурная эмульсионная вакцина из лапинизированного вируса ящура А₂₂, изготовленная на предлагаемом адъюванте, обладает выраженной иммуногенной активностью, так как при контрольном заражении через 21 день после вакцинации оба животных противостояли заболеванию, по сравнению с вакциной с известным адъювантом, где одно животное заболело ящуром с генерализацией процесса. При забое через 30 дней после прививки у животных, привитых вакциной на основе предлагаемого адъюванта, на месте подкожного введения препарата отмечают соединительно-тканевые гранулемы со средним размером 10х7,5х3 см, хорошо организованные, в то время как у животных, привитых с известным адъювантом, обнаружены абсцессы.

Формула изобретения

АДЪЮВАНТ, содержащий масляную основу и эмульгатор, отличающийся тем, что, с целью снижения вязкости реактогенности препарата, а также повышения его адъювантных свойств, в качестве масляной основы, используют полиальфа-олефиновое масло при следующем соотношении компонентов, мас. Полиальфа-олефиновое масло 85 95 Эмульгатор 5 15

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 10-2002

Извещение опубликовано: 10.04.2002