Способ определения активности эндопероксидпростагландинсинтетазы в биологическом материале

Способ определения активности эндопероксидпростагландинсинтетазы в биологическом материале

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для определения активности эндопероксидпростагландинсинтетазы. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Способ заключается в обработке биологического материала при определении активности эндопероксидпростагландинсинтетазы бенз(а)пиреном при массовом соотношении с ферментным белком (2,5-25,2):100. При этом активность фермента возрастает на величину до 71%, что дает возможность повысить чувствительность способа и сократить количество используемого биологического материала. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧаж ИХ

РЕСПУБЛИН

{)9) (31) 1617384. А1

151)5 С 01 К 33/88

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

tj с

) К A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ ляется 2 моль кислорода и что начальная концентрация кислорода в реак- Ж ционной смеси равна 2,4 х 10 «М.. Интегральную кинетику поглощения кислорода исследовали также полярографи- фф ческим методом с учетом неспецифического фонового поглощения кислорода.

Концентрацию Темина определяли спектрофотометрически при 420 нм Ilo поглощению восстановленного комнлекI са гемина с пиридином. Прединкуба. цию фермента с компонентами ðåàê- ф)в ционной смеси проводили непосредст- «д, венно в полярографической ячейке.

П р и и е р. В пробирку вносят

0,1 мл полициклического углеводороде бенз(а)пирена, растворенного в зтиловом спирте, конечная концентраЩСУДАРстзенныЙ к(щит т пО изОБРетениям и 0)нРытиям

flPH ГКНТ СССР (21) 4360300/30-14, (22) 08.01,88 (46) 30,12.90. Бюл. М 48 (71) Тбилисский государственный университет (72) Г.Ы. Давитая, К,Г. Чавчанидзе, И.Г. Артмеладзе и Б,А, Ломсадзе (53) 612.015(088.8) (56) Варфоломеев С.Д., Мевх A,Т, Простагландины — молекулярные биорегуляторы. М.: МГУ, с. 118-119, 141.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано при определении активности фермента эндопероксидпростагландинсинтетазы, Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Биологический материал добавляют в реакционную смесь объемом 1 мл, содержащую 0,05 М трис-НС1 буфер,, рН 8,0,. арахидоновую кислоту и гемин. Активность фермента вычисляли, как начальную скорость по кривой поглощения кислорода и выражали в молях арахидоновой кислоты íà f мг белка в минуту, считая, что при превращении 1 моль кислоты потреб-2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ЭНДОПЕРОКСИДПРОСТАГЛАНДИНСИНТЕТАЗЫ

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (57) Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для определения активности эндопероксидпростагландинсинтетазы. Цель изобретения — повышение чувствительности спосо6а. Способ заключается в обработке биологического материала при определении активности эндопероксидпроста- . гландинсинтетазы бенз(а)пиреном при массовом соотношении с ферментнык белком (2,5-25,2): 100 ° При этом активность фермента возрастает на величину до 71%, что дает возможность g повысить чувствительность способа и сократить количество используемого биологического материала. 3 табл.

1617384

Таблица 1

Простагландин -У пмоль/мг белка

Простагландин К, нмоль/мг белка

Пробы

415, 7 (100%)

303, 9 (73, 1+2, 6%)

552,7 (132 9+3,3%), .704,8 (1б1+13,9%) 436,7 (100%) . Зt0 7 (71,1+2,8%)

637,3 (145+4,6%)

714,8 (163+3,5%) Контроль

БП (10 М)

БП (10 +М) БП (10 М) ция в исследуемых пробах объемом 1 мл составляла: 10", 10 и 10, М или

252,.25 ° 2 2,52 мкг íà 100 мкг фермента эндопероксидпростагландинсинтетазы (микросомная фракция из везиS кулярных желез барана), Конечная кон центрация этилового спирта в образ .цах не превышала 20%. Обработка фер-! мента эндопероксидпростагландинсинтетазы бенз(а)ниреном в соотношении

252 мкг на 100 мкг белка вызывает ингибирование его активности, а обработка фермента бенз(а)пиреном в соотношении 25 2; 5 4 и 2 52 мкг на 100 мкг — стимулирование активности фермента на 1,5-23%, Предварительная обработка чистого фермента бенз(а)пиреном в соотношении (2,5-25,2):100 вызывает повышение ее активности на 25%. Предварительная же обработка бенз(а)пиреном органов, и тканей животных в соотношении 2,5:100 — 25,2!100 (или

10 — 10 М) -вызывает значительное 25 увеличение содержания простагландинов Е и Р в микросомах клеток печени крыс, которое составляет 4563% и 32-63% соответственно (табл.1).

Это увеличение связано с активизацией фермента эндопероксидпростагландинсинтетазы после обработки бенз(а)пиреном, Было изучено также изменение содержания простагландинов после предварительной обработки .бенэ(а)пире35 ном в концентрации. 2,52 мкг (10 М) различных тканей животных — сердца, печени, почки, селезенки и легких (табл, 2 и. 3), Как видно из табл. 2 40 и 3, самые значительные изменения наблюдаются в печени, которые составляют .71 и б2,6% и соответствуют yseличению содержания простагландинов

E и Еg, а в других тканях увеличение активности простагландинов Е и Fy+ варьирует в пределах 34-57%.

Такое изменение содержания простагландинов К и Р после обработки бенз(а)пиреном является также следствием активирования фермента эндопероксидпростагландинсинтетазы. Исключение составляют легкие, в которых изменение содержания простагландинов сравнительно ниже. Это следует отнести либо к быстрой инактивации фермента,.или к быстрому выведению простагландинов из ткани.

Как видно из таблиц, после ооработки бенз(a)пиреном наблюдается увеличение содержания простагландинов на 32-71% как в микросомах печени крыс, так и в различных тканях крыс.

Таким образом, бенз(а)пирен вызывает существенно увеличение активности фермента эндопероксидпростагландинсинтетазы, которое . составляет 32-"

7.1%. Это позволяет повысить чувствительность определения фермента и существенно экономить биологический материал (40-50%).

Формула изобретения

Способ определения активности эндопероксидпростагландинсинтетазы в биологическом материале путем выделения из исследуемой пробы фракции микросом, инкубации фермента с арахидоновой кислотой в присутствии гемина и полярографической регистрации потребления кислорода, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью новы- . шения чувствительности способа, био- логический материал предварительно обрабатывают бенз(а)пиреном, взятым

I в массовом соотношении к ферменту

2,5-25,2:100, 161 7384

Таблица 2

Контрольные пробы

Таблица 3

Контрольные пробы

Составитель Н. Гуляева

Техред Л.Сердюкова!

Редактор М, Циткина

Корректор М. Макснмишинец

Заказ 4117 Тираж 510 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Сердце

Печень

Почка

Селезенка

Легкие

Сердце

Печень

Почка

Сел ез енка

Легкие

Содержание простагландина- К, нмоль/мг белка, до обработки

520,4

741, 2

620, 1

540,5

74,3

Содержание простагландина F < пмоль/мг белка, до обработки

520,4

741, 2

6 20, 1

540, 5

74,3

Содержание простагландина Е, пмоль/мг белка, после обработки бенз(а)пиреном

700,0 (134,5+4,07) 1270,4 (171,4+5,6X) 873,6 (140,8+4,1X) 795,7 (147,2+4,4X) 82,2 (111,0+3,2X) Содержание простагландина F <, пмоль/мг белка, после обработки бенз(а)пиреном

712,2 (136,8+4,0X) 1205,6 (162,6+5,2X) 835>1 (13416+Зю87) 852,3 (157,6+4,4Ж) 92,2 (124,Ь+3,7X)