Штамм патогенных лептоспир rаттus norvegicus, используемый для получения поливалентной противолептоспирозной вакцины

Штамм патогенных лептоспир rаттus norvegicus, используемый для получения поливалентной противолептоспирозной вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины. Цель изобретения - получение штамма лептоспир серовара Copenhagen из серологической группы Icterohaemorrhagiae, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью с известной серовариантной и серогрупповой принадлежностью. Штамм выделен из почки серой крысы и депонирован в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под Ms 356/461. Антигенность Штамма 382-В определяют,в опытах на кроликах. Установлено, что антигенность штамма 382-В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17 не менее чем в 10 раз. Иммуногенность штамма исследуют методом пассивной защиты на золотистых хомячках массой 25-30 г. В результате сравнительного анализа лротективной активности имунных сывороток выявлено, что иммуногенность лептоспир штамма 382-В в 10 раз выше, чем вакцинного штамма Крыса 17. w &

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3921978/13 (22) 28.06.85 (46) 23.01.91. Бюл; N. 3 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.

Н.Ф.Гамалеи, Казанский государственный медицинский институт им. С.В.Курашова и

Ставропольский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) |О.Г.Чернуха, Н.И.Борознов, |О.В.Ананьина, И.Л.Коковин, О.А.Евдокимова, Т.П.Романцова, В.В.Ермолов и В.M.Роменский (53) 576.858 (088.8) (56) Регламент производства противолептоспирозной вакцины 230-81, ТУ 42.14. ,212-81.

{54) ШТАММ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР

RATTUS NORVEGICUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ

ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ

ПРОТИВОЛЕПТОСПИРОЗНОЙ ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины.

Цель изобретения — получение штамма лептоспир серовара copenhagenl иэ серологической группы Ictегоhaemorrhaglae, обладающего высокой антигенной и имунной активностью с известной серовариантной и серогрупповой принадлежностью.

Штамм лептоспир Rattus norveglcus

382-В изолирован в 1975 r. в Краснодарском крае из почки серой крысы и принадлежит к серовару copenhageni серогруппы

Ictегоhaemorrhaglae.

„„ Ы„„1621940 А1 (si)s А 61 К 39/002,С 12 N 1/10 (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины. Цель изобретения — получение штамма лептоспир серовара copenhageni иэ серологической группы Ictегоhaemorrhagiae, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью с известной серовариантной и серогрупповой принадлежностью. Штамм выделен иэ почки серой крысы и депонирован в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под М 356/461. Антигенность штамма 382 — В определяют,в опытах на кроликах. Установлено, что антигенность штамма 382 — В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17 не менее чем в 10 раэ.

Иммуногенность штамма исследуют методом пассивной защиты на золотистых хомячках массой 25 — 30 г. В результате сравнительного анализа протективной активности имунных сывороток выявлено, что иммуногенность лептоспир штамма 382 — В в 10 раз выше, чем вакцинного штамма Крыса 17.

М

Штамм лептоспир Rattus norvegicus

382-В депонирован в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под

М 356/461 и характеризуется следующими признаками.

С)

Морфологические признаки.

При микроскопии в темном поле, при увеличении Х400 представляют собой се-. ребристо-белые плотные спирали, заканчивающиеся крючками на концах, длина лептоспир 5 — 10 мкм, диаметр 0,1-0,15 мкм.

Физиологические свойства.

Растут в жидких сывороточных питательных средах Фервоорт-Вольфа, Терских, подвижны, характерное вращение вокрчг

1621940 своей оси и перемещение без полярной дифференциации. Максимального накопления 7.10 — 8,10 лептоспир в 1 мл питательной среды с рН 7,2 — 7,4 достигает на 6 — 8 день при (+28) — (+30) С. Максимальное количество жизнеспособных клеток наблюдается на 4 — 5 день роста культуры, Интигенные свойства.

Штамм лептоспир R. norvegicus 382 — В идентифицирован методом монафакторнаго антигенного анализа и принадлежиг к серовару copenhageni сурологической группы ictегоhaemovehagiae. Интигеннасть штамма лептаспир R. norvegicus 382-9:иределяли и сравнивали с вакцинным шгаммом Крыса 17 в опыте на кроликах.

Пятидневную культуру каждого штамма лептоспир с максимальным наполнением жизнеспособных клеток вводят трем кроликам весом 2,5 — 3 кг трехкоатно, внутривенно в дозах 5 10, 10, 10 лептоспир с интерва.. 7 В. В лом два дня. На 10-й день после последней иммунизации у всех кроликов забирают кровь и в сыворотках определяют реакцией микраагглютинации и лизиса концентрацию IgM u Igl — антител к гомологичному и

13 диагностическим штаммам лептоспир.

При этом устанавливают, что антигенность штамма лептаспир R. norvegtcus 382—

В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17

I-;e менее чем в 10 раз.

Иммуногенные свойства.

Иммуногенность штаммов лептоспир исследуют методом пассивной защиты на золотистых хомячках весом 25 — 30 r.

Гомолагичну о от трех кроликов пулированную иммунную сыворотку с исходной концентрацией антител 1:30000 в обьемах

0,05; 0,1; 0,5; 1,0 мл внутрибрюшинно вводят золотистым хамячкам, На каждую дозу используют по шесть животных, Через 2 ч после иньекции имунных сывороток хомячков инфициру ат культурной лептоспир штамма R. norvegicus 382 — В в дозе

250 LD +во.

Вирулентнасть контролируют и определяют LDso внутрибрюшинным заражением.

Животным второй группы за 2 ч да инфицирования внутрибрюшинно вводят 1,0 мл сыворотки нормального кролика, В результате сравнит ...нага анализа протективной активности иммунных сывороток выявляют, что в дозе 0,05 мл иммунная сыворотка к штамму R. norveglcus

382 — В защищала практически всех инфицированных гамологичными лептоспирами животных от гибели, в отличие от сыворотки к вакциннаму штамму Крыса 17, который только в дозе 0,5 мл проявляет свои защитные свойства, 5

Пример. Для получения поливалентной лептоспироэной вакцины используют штаммы лептоспир 4-х серологических груйп — Pomona-Бронница вода и Крыса—

223; grlppotyphosa — Суханов и Корнилов;

ictегоhaemorrhagiae — 853-Одесса-В и. R.

norvegicus 382 — В; Hebdomadls-Hebdomad! э и 3705, Каждый штамм выращивают на среде герских отдельно до операции инактива.ции. Первоначально рост штаммов лептоспир проводят в пробирках на среде с

5;4-н ым содержан ем ина ктивирован ной сыворотки кролика, По истечении 4-5 сут проводят рассев лептоспир из пробирок по

40 мл в матрицы со средой в количестве 0,6 л, содержащей 2 инактивированной кроличьей сыворотки. По истечении 4 — 5 сут проверя от количественный и качественный рост штаммов лептаспир, делают посев на стерильность. Лептоспиры иэ стерильных матрацов вновь засевают в бутыли со средой в количестве 1,5 л, содержащей 2 кро-, личьей сыворотки. На 4 — 5 сут проверяют количественный и качественный рост лептоспир и проводят посев на стерильность и внось засевают в бутыли со средой в количестве 1,5 л.

На 4 — 5 сут проверяют качественный и количественный рост микробной массы в бутыли и проводят посев на стерильность.

Выращенные лептоспиры инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при 56 С. По истечении времени добавляют фенал до

0,3 о содержания.

Далее инактивированные штаммы, содержащие 7.10 — 8.10 лептоспир в 1 мл в

7 7 равных соотношениях сводят в одну емкость. Отконтролированный полуфабрикат разливают, запаивают, затем проверяют на стерильность, безвредность, физические свойства. Полученные результаты вносят в паспорт.

Полученный препарат используют для профилактики людей от лептоспиразнай инфекции.

Более высокая антигенность и иммунногенность позволит использовать штамм

382-В при производстве поливалентной противолептоспирозной вакцины вместо применяемого сейчас при изготовлении этого препарата нетипированнаго штамма

Крыса 17 серогруппы Ictегоhaemorrhagiae.

Формула изобретения

Штамм патогенных лептоспир Rattus

norvegicus НИИЭМ им, Н.Ф.Гамалеи

«гь 356/461, используемый для получения паливалентной противолептоспирозной вакцины.