Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr источник умеренного фага xi серотипа xii гетероиммунной категории

Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr источник умеренного фага xi серотипа xii гетероиммунной категории

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕ 1УЬЛИН.8}} л}232}} (51) 5 С 2 !! 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A ВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (46) 5 03. 9 Пк}}., 10

ГОсудАРстВенный нОмитет по изоеРетенюм и отиРьтичм

ПРИ ГИНТ СССГ (21) 4718624/13 (22) 11.07.89 (71) Всесок}зный научно-исследовательский противочумный институт нМикроб" и Ростовский научно-исследовательский противо «ум«}ый институт (72) Т.A.Кудрякова, Л.Л.Македонова, Н,tl,Остроум} на, Г.И.Коровкина, B.П.!!ороз и 8.}1, Пегтярев (53) 6!6.038 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР !! 822543, кл. С !2 N 7/00, 1979 (непублик, ) .

Авторское с«}идетельство СССР !! 761560, кл. С 12 К 7/00, 1978. (54) !ТЛ)!!1 БЛКТЕР!1}«V!BRIO СНОТ.ERAE

E1.TOR — ИСТОЧ!!ИК УМЕРГПНОГО ФАГА ХТ

СЕРОТИПА XII ГГТЕРОИММУ!!НОЙ КАТЕГОРИИ (57) Изобретение относится к микробиологии, в частности к лябораторной диагностике. Целью изобретения является дикий лизогенный неэпидемический штамм

9966 Vibrio сЬо1егяе el!.or,.несущий фаг ранее никем не описанной XII гетероиммунной категории 9966, отличающийся от фягов I 11, Illy IVy V Vly VII, VIII, 1Х, Х, XI гетероиммунных категорий спецификой иммунитета, соз. даваемого при лизогенизации, и пригодной для усовершенствования системы те1т-культур, применяемой в способе

Кэобретеиие относится к микробиологии, в частности к лабораторной дна гHoc THKp..

Целью изобрс тения является дикий лизогенный не мл}лемичесхий штамм ф 4 фаготипирования холернь}х вибрионов классического и эльтор биотипов. штамм 9966 получен иэ воды открытого водоема. При культивировании в бульоне Мартена (рН 7, 6+0, 2) при (37+1) С в течение (20 .2) ч штамм 9966 продуцирует умеренный фаг 9966, При лиэогениэации реципиентного штамма Vib.rio choleree eltor 570 фаг 9966 создает специфический иммунитет. Клетки, ли,or".}}íûe по фягу 9966, у той пивы к гомо}}ммун}«}}м фагам XII гет< } иммунной категории и чувстни. ел .н к гетероиммунпым фа гам 1-ХТ. кате го, }и. Субкультуру 570/99С6, л . з ге ни;. ю по фагу

9966, включ;,ют в систему тест -культур, несущих гет =роимм. }}г,}е фагн одиннадцати категорий и .ол ченнык путем лизогенизяцин рецип}«ентль}х штаммов эльтор 485 и 570, которую используют для прямого фаготипирования с целью дифференциации колер .лх вибрионол эльтор различной эпидемической значимости(эпицемические и незп«демические). !!тамм 9966 обладает типичны«}и для вида Vibrio cholerae культурально-морфологическими и физиологическими признаками, относится серологически к серовару Огавя. Фаг 9966 относится к XI серотипу холерных фагов III морфологи1}еской группы.

1 табл.

9966 Vibrio cholpr е! ог, несущий фаг ранее никем не о}}ися}}}п и XII гетероиммунной катег рии 9966, отличающийся от фагов 1, 1.1, 111, 1Ч, Ч, VI

VII, ЧИI, IX, Л и 1!! гетер«}имму}}ных

1623205 категорий спецификой иммунитета, создаваемого при лизогециэации, и пригодцой1 для усовершенствования системы тест-культур, применяемой в способе фаготипирования холерных вибрионов классического и эльтор биотипа, С помощью его искусственной лизогенизации реципиецтного шта11ма Vibrio

cholerae eltor 570 получают новую тест-культуру 570/9966, которую включают в указанную систему тест-культур, благодаря чему увеличивают процент фаготипирующих штаммов холерных вибрионов эльтор при ее использовании 1 на практике., Характеристика типа имму»ц1тета умеренного фага штам11а V.eltor 9966 приведена в таблице.

Для получения такого штамма изучено 35 штаммов вибрионов эльтор.

Полученный штамм 9966, депонированцый1 в музее живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумцогЬ института "Микроб" под цо- 25 мером . 1 112(9966) по большинству морфологических и физиологических ха" рактеристик соответстнует микроорганизмам вида Vibrio cholerae.

Культурально-морфологические признаки.

Подвижные, слегк» изогнутые палочки 1,3-2,2 мкм в длину и 0,2-0,3 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул це образует, грамотрицательць1.

На твердых питательных средах (arap Мартена, агар Хоттицгера pll

7,6+0,2) образуют через 18 ч выращи . вання при температуре 37+1 С круглые, диаметром 3,4+0, 1 м11 полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровньм краем, слегка уплотненным центром. lla жидких питательных средах (бульон Мартена, 1Х-цая пептонцая вода, бульон Хоттццгера рН 7,8+0,2) через 6 ч выращивания при температуре

37+1 С образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности. физиологические признаки.

Тест на оксидазу положителен, раэ- 50 лагает до кислоты беэ газа манцозу„ глюкозу, сахароэу, маннит, це разлагает арабинозу, инозит, лактоэу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде

Хью-Лейфсоца, ферментирует крахмал, желатииу, не образует дигидролаэу арГИНИНа, Обраэу1.т IIeКарбОКСИЛаЗЫ ЛИЭИна и овнитина, це растет При повышецной (7-107) концентрации хлорида натрия, гемолизирует эрйтроциты барана по Грейгу, агглютинирует куриные эритроциты, не чувствителен к полимиксину.

Серологические свойства.

Агглютицируется до титра холерными сыворотками 0 и агава, не агглютинируется холерными сыворотками кО и

Инаба.

Главным отличительным признаком от прототипа является способность спонтанно продуцировать умеренцый1 фаг 9966 ранее неизвестной XII гетероиммунной категории, который лизирует культуры холерных вибрионов, лизогенные по фагам I-XI категорий, при лизогениэации чувствительной культуры холерньм вибрионов 570 создает у нее иммунитет (резистецтцость) только к фагам своей иммунной категории и фагам VI иммунной категории и не создает иммунитета к фагам I-XI иммунцых категорий. Фаг

9966 используют при получении специ-фической тест-культуры 570/9966, примецяемой для прямого фаготипирования (дифференциации по умеренному фагу) холерных вибрионов биовара эльтор различной эпидемической значимости по эпидпокаэациям.

Умеренный фаг 9966 по электроннбмикроскопической структуре относится к III морфологической группе, по серологическим свойствам принадлежит к

Х1 серотипу холерцьм фагов.,На газон» индикаторного штамма Vibrio eholerae eltor 570 образует типичные колонии с мутным центром, окруженным узкой зоной неполного лиэиса 2,4+0,5 мм в диаметре.

Ра.--.1цожают штамм 9966 на бульоне и агаре Мартена рН 7,6+0,2, хранят в л11оф»1лиз ироианном состоянии.

Для получения специфической тесткультуры 570/9966 готовят фильтрат (фил» трацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37 С штамма 9966 и в количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста ин дикаторного штамма 570 и 5,0 мл 0,7Х агара Мартена (расплавленцого и охлажденного до 45 С), перемешивают и о выливают на 27. агаровую пластинку в чац|ке Петри, дают застыть и инкубируо ют 18 ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в

1623205 6 ров анные колонии лиэо генных по фл гу

9966 клонов штамма 570, отбор которых ведут по известному методу. центр негативной колонии забирают фагорезистентные вибрионы и переносят в пробирку с 1,0 мл бульона, из которого готовят десятикратные разведения в бульоне. Из каждого разве5 дения высевают на агаровые пластинки в чашках Петри по О,1 мп и распределяют шпателем по поверхности агара.

Через 13 ч инкубирования при 37 С на

0 поверхности агарл обнаруживают изолиФормула изобретения

Характеристика xvna иммунитета умеренного фага штамма Ч.eltor 9966

Субкуль- Лизогенна тура по фагу иммунной кате горин

I II III IV V VI VII VIII IX Х XI XII

4 1 70 222Н 132 98,х 611 893 583 6901 80 1564 9966

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

1 +

+ +

+ +

II +

+ +

t +

+ +

+ +

+ Ф

+ +

+ +

+ + + +

+ +

+. +

+ +

+ +

+ +

Ф +

+ +

+ + +

+ +

4 +

+ +

+ +

+.+

П р и м е ч а н и е: плюс - культура чувствительна к фагу; минус — культура резистентна к фагу.

Составитель И, Тареева

Редактор О. Стенина Техред А. Кравчук Корректор Н. Ревская

Заказ 1314 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

570 и 485

485/41

485/70

485/222Н

485/132

485/98,х

570/611

570/893

570/503

570/6901

570/80

485/1564

570/9966

I II +

IV + +

V + +

VI + +

Чц + + чш + +

IX + +

Х + +

XI .+ +

XI I + +

Бтамм бактерий Vibrio cho 1 erae

eltor И1 112 9966 источник умеренного фага XI серотипа XII гетероиимунной категории.