Способ приготовления питательного субстрата для культивирования растительных тканей рододендронов и азалий

Способ приготовления питательного субстрата для культивирования растительных тканей рододендронов и азалий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , в частности к культивированию растительных тканей in vitro. Целью изобретения является повышение интенсивности пролиферации и упрощение процесса культивирования. Способ состоит в тбм, что при приготовлении питательного суьстрата в качестве носителя используют целлюлозу с пористостью 0,55-1,40 см3/г. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU-„„163О711

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABT0PCHGMV СВИДЕТЕЛЬС ГВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И (ЛНРЦТИЯМ

ПРИ П(НТ СССР (21) 4678953/13 (22) 06. 03.89 (46) 28.02.91. Бюл. N - 8 . (71) Латвийский государственный уни верситет им.П.Стучки и Институт химии древесины АН ЛатвССР (72) Д.X.Гертнере, А.П.Трейманис, У.Э.Виестурс, М.К.Эисимонте, Е.М.Калниня и Р-.11.Кондратович (53) 581.143.6 (088.8) (56) Патент 1"ДР Р 225439, кл. С 12 Ы 5/00, 1985. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОГО СУБСТРАТА Д1И КУЛЪТИВИРОВАНИЧ

Изобретение относится к ьиотехнологии, в частности к поверхностному культивированию растительных тканей в стерильных условиях на искусственных питательных средах.

Цель изобретения - повышение интенсивности пролиферации и упрощение процесса культивирования, Спосоь состоит в том, что субстрат для микрокультивирования приготавливают заранее и он может храниться в холодильнике при положительных температурах длительное время, Для приготовления субстрата носитель — целлюлозное волокно со значением пористости во влажном состоянии в пределах

0,55-1,40 см /г - пропитывают питательной средой, содержащей минеральные элементы, органические добавки, сахарозу и воду. После этого комплексный субстрат высушивают.. при t. 4060 C. (51) A 01 Н 4/00, С 12 N 5/00

2, РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЕЙ РОДОДЕНДРОНОВ

И АЗАЛИЙ (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частно ти к культивированию растительных тканей ж ст го, Целью изобретения является повышение интенсивности пролиаерации и упрощение процесса культивирования Способ состоит в т6м, что при приготовлении питательного суьстрата в качестве носителя используют целлюлозу с пористостью 0,55-1,40 см /г. 1 табл.

Для стерильного выращивания растительных тканей ьерут заранее при1 готовленный комплексный субстрат, помещают в пробирки, заливают дистиллированной водой (на 1 г субстрата 10-20 мл воды) и автокг авируют при 0,11 МПа в течение 15 мин. После этого суьстрат готов для стериль„ной посадки растительных тканей.

Ввиду того, что целлюлоза в зависимости от марки и спосоьа получения имеет различную структуру и свойства, для данных целен выбирают или подготавливают целлюлозное волокно с пористостью в пределах 0,55-1,40 см /г, оЬеспечивающей оптимальные скорости . сорьцин и -диФжузии питательных ве-. щестВ.

Исследования показывают, что при пористости целлюлозных волокон во влажном состоянии ниже 0,55 см /г замедляется диааузия компонентов суб»

fb3u7» страта, а при пористости выше

1,40 cM /г увеличивается необратимая сорбция веществ. Последнее обстоятепьство снижает концентрацию компо5 нентов в жидкой фазе пительной среды.

Субстрат, содержащий предлагаемую целлюлозу с оптимальными структурными характеристиками, улучшает проли«рерацию микрочеренкав асептической культуры рододендронов.

1I р и м е р 1, Приготовление субстрата для микрокультивирования родо-. дендронов. Готовят жидкую питательную среду для пролиферации микрокультур 15 рододендронов, предложенную Экономоу и Ридом, мг/л: ИН 110э 400; КИО 220; (11Н4)g 80 4. 132»; СаС1а2НаО 440 «08804

7Н О 370;; КН РО4 4ОЫ; Ре1!аЭДХА 56;

«1 ьО 6,2; ИпЬО, Н 0 16,9; Лп$047Н О, 20

Й,ь; Иа Ио042Н О 0,25; САБО 5Н О, 0,025; СоС) 6Н О 0,025; мезо-инозит

100; тиамин-НСi 0,4; сахароза 20000, b-иэопентенил-аденин-10.

Б экспериментах используют указан-,25 ный состав и соотношения элементов пита-! тельной среды (1 Эк ° -Р.) и 2/3, 3/4, 5/4, 4/3 от полной концентрации питательной среды, сохраняя соотношения питательных элементов (2/3 Эк.-Р., 30

3/4 Эк.-V., 5/4 Зк.-P., 4/3 Эк.-P,), 100 г целлюлозных волокон со значением объема. субмикроскопических капилляров в пределах 0,40-1,50 см«/г пропитывают 1000 питатьной сре- 35 ды. Затем массу высушивают при 40—

60 С и дозируют по 0,25 г. Приготовленный комплексный субстрат хранят в холодильнике при положительных тем-, пературах. 40

Иикрокультивирование рододендронов (линия К-81/1) .

В каждой пробирке помещают 0,25 r субстрата и заливают 4 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают, 45 ватными пробками и автоклавируют при 0 11 МИа в течение 15 мин. После автоклавирования в стерильных условиях на субстрат высаживают декапитированные микрочеренки с 4 меж-! 0 доузлиями, полученные от асептичес- кой культуры рододендронов. Через

5 недель культивирования при 23-25 С, в 16-часовом фотопериоде с интенсивностью освещения 3 клк, оценивают количество, длину вновь образовавшихся микропобегов, Повторность 20кратная.

Пример 2. Все приемы и операции осуществляют аналогично примеру

1. Также исследуют возможность культивирования на питательном субстрате, содержащем в качестве носителя целлюлозу различной пористости . В исследования вовлекают тепличные азалии (линия А-88/1) .

Пример З..Культивирование проводят на агаризованной питательной среде Экономоу-Рида.

Пример 4. Культивирование ведут на питательном субстрате, содержащем в качестве основы среду

Экономоу-Рида, а в качестве носителя - вискозу с пористостью 0,350,40 см /г.

Результаты опытов приведены в таблице.

Таким образом, предлагаемый субстрат улучшает условия пролиферации микрокультуры рододендронов открытого грунта (R-81/1) .и тепличных азалий (А-88/1), на что указывают больший выход и длина микропобегов. Кроме того, заранее приготовленный комплексный субстрат сокращает трудозатраты на приготовление питательных сред, что особенно важно в условиях промышленного микроразмножения.

Формула изобретения

Способ приготовления питательного субстрата для культивирования растительных тканей рододендронов и азалий, включающий смешивание питательной основы и, целлюлозосодержащего носителя, отличающийся тем, что, с целью повышения интенсивности пролиферации и упрощения процесса культивирования, в качестве питательной основы используют среду

Экономоу и Рида; а в качестве носителя — целлюлозу с пористостью 0,551,40 смз /r.

1630/1i

Состав и кояцеятрацял питательной сраки а побегав ваость ксплая тов, l от ка

Tp OJI x

R-81/2 95

Иэвествал питательяаа сре.да (примеры

13, 4) 1 Эх.-P. агариэоваяяая

1 7к.-Pвискоза с пористостьв 0,35-0,40 смэ /г

2/3 Эк, Р. целлюлоза с ... пористостью 0,45 смз /г

3/4 Эк.-P. целлюлоза с пористостьв

0,55 акмэ/г

1 Эк,-P. целлюлоза с паристостью

0,,75 смз/г

5/4 Эк.-P целлюлоза с лорйстастьв

1,40 см /г

4/3 Эк.-р. целлюлоза с пористасть»

1.36Г eel

4 5+0 3

3,9+0,2

100

А-88/1

8-81/!

96

4,0 0 5

3,9+0>1

3,510,5

3,3+О,!

А-88/1 97 к81/1 95

А-88/1 94

R&t/t 99

А88/1 ° 100

8-81/1 100, А-88/1 100

4,0+0,3

4, 1+0,2

4,2+0,4

6,0+0,4

3,4 0,2 а

3,8+0,1

Предлагаеай

1субстрат .(примеры 1, 2) °

3,6+0,2 102

105

4 5 0 3

133

115

7, 1А0,3

123

177

4,3+0,2

5,2 0 1

6,1+0,2 ", 135

133

4,8+0,2 137

7,0+0,5

5,5+0,3

175

122

R-81 /1, 99

5,0+0,3

128

4,9+0,4 140

"88/1 100 бэ2+0,3, 4,1+0 4

4,5+0,8

К -81/t 93

4,0+0,3

Звз+0)4

1аг

А 88/1

112

Составитель В.Демкин

Редактор С.Лисина Текред,M.Èoðãåíòàë Корректор И.Муска

Заказ 505 Тираж 363 ., Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иоскваз Ж-35, Раушская наб., д. 4 !5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г;Ужгород, ул. Гагарина,101