Способ определения активности нейротоксической эстеразы

Способ определения активности нейротоксической эстеразы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к способу определения активности нейротоксической эстеразы, может быть использовано для выявления доклинического проявления замедленного нейтротоксического действия фосфорорганических соединений. Цель изобретения - упрощение способа определения активности фермента нейротоксической эстеразы в периферической крови человека.Это достигается тем, что активность фермента определяют не только в лимфощитах и тромбоцитах, как это было известно ранее, но и во всей лейкоцитарной взвеси (гранулоциты).

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1 рц у G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4443076/14 (22) 20.06.88 (46) 07.04.91. Бюл. И 13 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс (72) Д.В.Зинченко, Н.B,Êoêøàðåâà, И.И.Ткаченко и Ю.С.Каган (53) 612.015 (088.8) (56) Arch, ой Enviroment. Health, v. 40, N 3, р. 139-144. 1985. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

НЕЙРОТОКСИЧЕСКОЙ ЭСТЕРАЗЫ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выявления раннего (доклинического) проявления замедленного нейротоксического действия фосфорорганических соединений.

Цель изобретения — упрощение способа определения активности фермента.

Пример. Дпя получения лейковзвеси и осаждения эритроцитов в центрифужную пробирку с каплей гепарина вно сят 5 мл крови, доб авляют

0,2 мл 10Х-ной желатины и помещают на 30 — 35 мин н термостат при 37 С, G отсасывают надосадочный слой в пробирку и отмывают дважды лейковзвесь центрифугированием с трис-буфером с

ЭДТА (рН 8,0 при 1000 об/мин в течение 10 мин).

В выделенной лейковэвеси количество клеток составляет 8-10 млн. в

2 (57) Изобретение относится к способу определения активности нейротоксической эстеразы, может быть использовано для выявления доклинического проявления замедленного нейтротоксического действия фосфорорганических соединений. Цель изобретения — упрощение способа определения активности фермента нейротоксической эстераэы в периферической крови человека.Это достигается тем, что активность фермента определяют не только в лимфо цитах и тромбоцитах, как это было известно ранее, но и во всей лейкоцитарной взвеси (гранулоциты), 1 мл. Полученную взвесь гомогенизи- ( руют в стеклянном гомогенизаторе,добавляя 1,5-2,0 мл буфера трис-НС1 в ЭДТА, Активность нейротоксической эсте- >, разы (НТЭ) в белой крови определяют следующим образом: к парным пробам, р содержащим по 0,5 мл гомогената лей-< ковзвеси, добавляют — в первую:

0,25 мл 10 М раствора параоксона и

0,25 мл 10 M-раствора мипафокса; во вторую: 0,25 мл 10 И раствора па- 4 » раоксона и 0,25 мл буфера без мипафокса. Обе пробы инкубируют в тече- ние 30 мин при 37 С, а затем добавляют по 1 мл субстратного раствора, содержащего по 0,5 мг/мл фенилвале- 3. рата, и продолжают инкубацию в течение 45-60 мин. После этого реакцию останавливают добавлением 17 -ного раствора додецилсульфата натрия в, буфере, содержащем 0,25 ммоль 4-ами1640650

6E . .1000

А

1,39 ° Ь ° с

Способ определения активности нейротоксической эстеразы крови путем спектрофотометрического измерения продукта гидролиза фенилвалерата, отличающийся тем,что, с целью упрощения способа, определе- ние активности фермента проводят во всей лейкоцитарной взвеси.

Показатель Лимфоциты Гранулоциты

Вся лейкоци тарная взвесь

Активность фермента 23,1+3,9

7. от активности НТЭ в лимфоцитах

18,2+2,8

19,8+О, 9:, 100

85

Составитель В.Зотов

Техред С.Мигунова Корректор Л.Бескид

Редактор E..Хорина

Заказ 1264 Тираж 418 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101 ноантипирина. Для появления окраски во все пробы добавляют по 0,5 мл

0,47-ного водного раствора К Ре(СН) .

Через 15 мин пробы колориметрируют на двухлучевом спектрофотометре

СФ-18 (длина волны 510 нм, кювета

1 см). Контролем служит проба,содержащая оба инкубатора — параоксон и мип афок с, 10

Активность фермента (нмоль/мин кг) белка рассчитывают по формуле

15 где аŠ— разность экстинций за

1 мин;

1,39 — коэффициент молярной экстинции, фенола; .Ь вЂ” количество белка, мг в

1 мл пробы;

1000 — коэффициент перевода активности в нмоль; с - оптический путь луча в спектрофотометрической 25 кювете, см.

Для стандартизации полученных результатов определяли белок.

В таблице приведены данные активности нейротоксической экстеразы (нМ/мин мг белка) в лимфоцитах х с примесью тромбоцитов и моноцитов, гранулоцитах и всей популяции белой крови Х+ эх, и-I0

В эксперименте при введении курам и крысам афоса в дозах, вызывающих ингибирование экстеразы,наблюдалось однонаправленное изменение активности фермента как в лимфоцитах периферической крови, так и во всей лейковзвеси, что позволяет использовать определение активности НТЗ во всей лейковэвеси для прогнозирования замедленного нейтротоксического действия фосфорорганических соединений. формула из об ре тения