Способ получения метафазных хромосом клеток крови животных

Способ получения метафазных хромосом клеток крови животных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биологии, в частности к цитогенетике сельскохозяйственных ответных и может найти применение при проведении цитогенетического анализа животных для выявления хромосомных нарушений, приводящих к снижению продуктивности. Целью изобретения является повышение выхода метафазных хромосом Для этого клетки крови животных культивируют на среде , содержащей фитогемагглютинин, стрептомицин,пенициллин, среду 199, среду Игла, а перед внесением колхицина выдерживают в течение 12-15 мин при Р (-1Ы+1)°С, 6 табл„ (Л

щ) С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н astOPCtlOINY СВИДЕТВЪСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЬЩ4ЯМ

ПРК П(НТ СССР (21) 4679227/13 (22) 02.03.89 (46) 30.04.91. Бюл. В 16 (71) Иосковская ветеринарная академия им. К.И. Скрябина (72) В.П. Нихпсов, А.В. Каров, Б.Ç. Иткин, В.А. Крикун, З.Н. Меньшикова, Г.С. Петровский и Г.И. Марченко (53) 591.813(088.8) (56) Иутузкин Л.И. Актуальные вопросы этиологии, патогенеза и диагностики неоплазий сельскохозяйственных животных. Сб. научн. трудов МВА, 1984, с. 33-39.

Калгыкова Т.П. Исследование хромосом соматических клеток овец. Бюл.

ВИЭВ, 1980, Р 39, с., 56-58„

Изобретение относится к биологии, в частности к цитогенетике сельскохозяйственных животных, н может найти применение при проведении цитогенетическогo анализа животных для выявления хромосоиных нарушений, приводящих к снижению продуктивности.

Цель изобретения — повышение выхода метафазггых хромосом.

Для реализации способа используют питательную среду следующего состава: среда 199 18-22 мл; фитогемагглютинин 1,7-2,2 мл; пенициллин 10000 ед„ стрептомицин 5000 ед; кровь исследуемого животного 15-25 мл; остальное до 100 гш среда Игла и дополнительно проводят обработку прп (-1)-(+1) С в течение 12-15 мин..Я0.„1645297 А 1

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТАФАЗННХ ХРОИОСО1 KJIETOK КРОВИ ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к биологии, в частности к цитогенетике сельскохозяйственных животных и может найти применение при проведении цитогенетического анализа животных для выявления хромосомных нарушений, приводящих к снижению продуктивности. Целью изобретения является повышение выхода метафазных хромосом. Для этого клетки крови животных культивируют на среде, содержащей фитогемагглютинин, стрептомицин,пенициллин, среду 199, среду Игла, а перед внесением колхицина выдерживают в течение 12-15 мин при (-1) — (+1) С. 6 табл.

Пример 1. Из яремной вены животных берут кровь в стерильные пробирки. 15-25 мл крови вносят в питательную среду следующего состава: среда 199 18-22 мл; ФГА 1,7-2,2 мл; Ю пенициллин 10000 ед; стрептомицин К)

5000 ед; остальное до 100 нп среда Я

Игла. По 10 мп смеси помещают в культуральные матрасы и инкубируют 72 ч ! при 37,2 С. Через 20 ч после начала

|культивирования проводят холодовую рбработку, ставя матрасы с культурой на лед 12-15 мин. Затем продолжают культивирование при 37,2 С. На о

68 часу культивирования вносят колхицин 0,3 мкг/мл (на 1 мл смеси) для накопления митозов. После окончания культифирования смесь переносят

1645297

Исходя из данных табл. 1, видно, что митотический индекс культур клеток крови животных по предлагаемому способу выае и составляет 20 4+0,45, по прототипу 14,0+0,37. Это говорит о наличии наибольшего числа делящихся клеток, культивируемых предлагаемым способом, необходимых для анали25

sa кариотипа исследуемых животных.

Для получения оптимального варианта среды, используемой для получения наибольшего количества митозов, приводят пять примеров различного состава среды и различных параметров обработки.

В каждом препарате просматривают не менее 2000 клеток, учитывая число клеток, находящихся в состоянии митоза. Показателем активности деления 35 клеток служит митотический индекс, т.е. отношение числа клеток, находящихся в митозе, к числу исследованных клеток, выраженное в промилле.

Полученные результаты обработаны ста- 40 тистически по Рокицкому.

В следующих примерах последовательность обработки материала аналогична

t °

Пример 2. Среда 199 15 мп 45

ФГА 1,5 мп; пенициллин 10000 ед; стрептомицин 5000 ед; кровь 10 мл; остальное до 100 мп среда Игла.

Т

Митотическая активность кул крови животных

Способ получения метафазных хромосом клеток крови животных; включающий забор крови, культивирование ее на питательной среде с последующим внесением колхицина, гипотонизацией, фиксацией и окраской, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода метафазных хромосом, кровь берут в количестве 15-25 мп, культивирование проводят на среде следующего состава; среда 199 18-22 мл; фитогемагглютинин 1,7-2,2 мп; пенициллин

10000 ед; стрептомицин 5000 ед; среда Игла до 100 мл, а перед внесением колхицина культуру клеток в тече-! ние 12-15 мнн выдерживают при (-1)(+1) С. аблица 1 ьтур клеток

Иитотический индекс, промилле

Количествоо нсследоваииих клеток

Способ оличесто клеток делении

140 14, О+О, 37

204 $0,4+0,45

Прототип 10 000

Предпагаеэый 10 000 в центрифужные пробйрки и центрифугируют в течение 10 мин при 1000 об/мин.

Надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в 5 ип гипотонического раствора KCl 20-25 мин. 3атем клеточную суспензию вновь центрифугируют и осадок проводят трижды через фиксатор (метанол:уксусная кислота, 3: 1), осаждая клетки центри- 1О фугированием в прежних режимах. Когда осадок станет чистым, добавляют

2-3 мп фиксатора и каплю такой суспензии наносят на влажные предметные стекла. Готовые цитологические пре- 15 параты можно окрашивать.

Пример 3. Среда19918мл;

ФГА 1,7 мп; пенициллин 10000 ед; стрептомицин 5000 ед; кровь 15 мп; остальное до 100 нл среда Игла.

П р и и е р 4. Среда 199 20 мл;

ФГА 2 мл; пенициллин 10000 ед; стрептомицни 5000 ед; кровь 20 мл; остальное до 100 мп среда Игла.

П р н м е р 5. Среда 199 22 мл;

ЮГА 2,2 мл; пенициллин 10000 ед; стрептомицкн 5000 ед; кровь 25 мл; ,остальное до 100 ип среда Игла.

Пример 6. Среда 199 25 мл;

ФГА 2,5 мл пенициллин 10000 ед; стрептомицин 5000 ед; кровь 30 мп; .остальное до 100 мп среда Игла„

Исходя из данных, наиболее оптимальной средой является среда из примера 4. Иитотическая активность культуры клеток в данной среде при обработке от (-1) до (+1) С в течение

12-15 мин достигает 30,5+1,23.

В средах примеров 3 и 5 митотическая активность культур средняя и достигает 23,0+1,07 и 19,5+0,99. Минимальная активность культур наблюдается в средах примеров 2 и 6 17,0+0,92.

Формула изобретения

1645297

Та блица 2

Иитотическая активность культур клеток крови животных на данной среде при различных параметрах обработки

Температура, С

Время, мин

5 10 12 15 20

13,5+0,82

10,0+0,71

8,5+0,65

9,5@0,69

6,5+0,57

13,0+0,81

12,5+0,80

15,0+0,87

10,0+0,7Ф

9,5+0,69

12,0 0,77

15,0+0,87

14 0+0,84

15 0+0 87

8,0+0,63

Таблица 3

Иитотическая активность культур клеток крови животных на данной среде при различных параметрах обработки

Температура, С

5 10 12 15 20

9,5+0,69

10,0+0,71

10,0+0,71

16,5z0,91

13,0+О) 81

-2

-1

+12

Таблица 4

Иитотическая активность культур клеток крови животных на данной среде при различных параметрах обработки

Темперао тура, С

Время, мин

1г 1

5 ) 10

15 20

15,0+0,87

25 0+1,12

30,5+1,23 !

9,5+0,99

12,5+0,80

18, 5+0,96

23,0+1,07

28,5+1,19

25+1,12

19,5+0,82

18,0+0,95

15,0+0 87

16,0+0,89

18,5+0,96

14,0 0,84

Та блица 5

Иитотическая активность культур клеток крови животных на данной среде при различных параметрах обработки

Темпера тура, С о

Время, мин

5 1О 12 15 20

-2

-1

+1

18,5 0,96

16,0+0,89 ! 9,5+0,99

18, 0+0, 95

13,5+0,82

16, 0+О, 89

15, 0+0,87

15,5+0,88

19,5+0,99

15 0+0 87

13, 5+0,82

15 0+0 87

13,5+0,82

13,0+0)81

16,0+0)89

-2

-1

+1

-2

-1

О

+1

7 0+0 59

11,5+0,76

10,0+0,71

8,0+0,63

7,0+0,59

9,5+0,69

10,0+0,7!

12,5+0,80

12,0+0,77

10,5+0,72

15, 0 0,8 7

15,5+0,88

13,5+G,82

11,5+0,76

10,0+0,71

14, 0+0,84

12,5+0,80

14,0+0 84

12,5+0,80

13,5+0) 81

8,5+0,65

11,5+0,76

12,0i0,77

12)5+0,80

10,0+0,71

13,0+0,81

15, 0+0,87

13 5+0 81

13, 0+0,81

14,0+0,84

10,0+0,71

16,0+0,89

15 ОаОг87

14,0+0,84

13 5+0 82

16,5+0 91

18,0+0,95

13,5+0,82

23,0+1,07

13,5+0,82

8,5+0,65

10,0+0,71

10,0+0,71

9,5+0,69

7,0+0,59

15,0+0,87

18,5+0,96

16,0+0,89

18,0+0 95

14,0+0)84

4 Ъ

Таблица 6

1645297

Иитотическая активность куль гур клеток крови кивотных на данной среде при различных параметрах обработки

Время, мии

1г 1

15 20

Составитель И. Тараева

Редактор С. Лисина Техред М.Дидык Корректор М. Шароши

Заказ 1322 Тирах 380 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета по иэооретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.укгород, ул. Гагарина, 101

-2

-1

+1 +2

13) 5фО) 82

11,5+О, 76

14,/+0 84

13,5+0,82

10)5ф0)72

10 5+0 72

13,0+0,81

13,5+0,82

11,5 0 76

10)0+0)71

9,0+0,67

16)0+0,89

15,0+0 ° 87

13,010,81

12,5+0,80

10,5+0,72

15,5+0)88

15,5+0,88

17,0+0,92

13,0+0,91

11,0+0,74

13,0+0,81

13,0 0 81

13 ° 5+0,82

10,0+0,71