Способ выявления антителообразующих клеток на гистологическом препарате

Способ выявления антителообразующих клеток на гистологическом препарате

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине , а именно к иммунологиио Цель - получение четкого контраста клеток за счет ингибирования неспецифического сведения фона. Для этого обработку в специфической сыворотке проводят в течение 30-40 мин при 20 - 25°С. Далее препараты дополнительно инкубируют в среде, содержащей бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия, перекись водорода и воду Среда выявляет наличие миелопероксидазы в клетке. Данная обработка полностью снимает свечение фона, что позволяет точно определить наличие и содержание антителообразующих клеток на препарате. §

СООЗ СОВЕТСНИК

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН ((9)Я0(и(1 64

А1 (51) С 01 М 1 28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРИ ЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Н АВТОРСКОМУ/ СВИДЕТБЧЬСТВУ (2i) 4440818/14 (22) 13.06.88 (46) 15.05.91. Бюл. ¹ 18 .(71) Курский государственный медицинский институт (72) В,С.Барсуков и А.А.Барботько (53) 616-089.9 (088.8) (56) Кунс А.Н. Морфологические основы и особенности инфицированных вирусами клеток, выявляемых с помощью флюоресцирующих антител. Иностранная литература, 1958, с.214. (54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ АНТИТЕЛООБРАЗЖЩИХ КЛЕТОК НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью является получение четкого свечения антителообразувщих клеток за счет ингибирования неспецифического свечения окружающего фона °

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят мазки-отпечатки или криостатные срезы нефиксированной ткани.

Далее после 10 мин высушивания на воздухе мазки фиксируют в охлажденном абсолютном ацетоне в течение

10 мин. Обработку специфическими сыворотками проводят через 24 ч. Препарат ополаскивают в физрастворе, приготовленном на 0,05 М фосфатном буфере (рН 7,0 — 7,4). Сыворотку наслаивают на препарат и инкубируют с ней во влажной камере при комнат

2 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель -1 получение четкого контраста клеток за счет ингибирования иеспецифического сведения фона. Для этого обработку в специфической сыворотке проводят в течение 30-40 мин при 20—

25 С. Далее препараты дополнительно о инкубируют в среде, содержащей бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия, перекись водорода и воду.

Среда выявляет наличие миелопероксидазы в клетке. Данная обработка полностью снимает свечение фона, что позволяет точно определить наличие и содержание антителаобразующих клеток на препарате. ной (20 — 25 С) температуре 30—

40 мин. Затем препарат отмывают в трех порциях физраствора по 10 мин и помещают в инкубационную среду для выявления миелопероксидазы на

5 мин при комнатной температуре. Инкубационную среду готовят непосредственно перед употреблением.

Инкубационная среда содержит солянокислый бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия и перекись водорода.

Сначала 0,4 — 0,6 мг солянокислого бензидина растворяют в 20-21 мл д

96 этилового спирта. Затем 2 — 3 мг нитропруссида натрия разводят в 510 w. воды. Эти растворы смешивают.

К полученному составу добавляют воду

1 . 1 каплю (1 — 1,5 ми) 30%-ной перекиси водорода.

1649362

II р и м е р 2. Ребенок 6 мвс. Патологоанатомический диагноз: острый диффузный миокардит, серозно-гнойная пневмония. Приготовлены криостатные срезы бифуркационного лимфоуэла, которые обработаны люминесцирующей сыВороткои против иммуноглобулинов, человека.

Бензидин

Этиловый спирт щ Нитропруссид натрия

ЗОЖ-ная перекись водорода

Вода

0,4 — 0,6

20 - 21

2 - 3

1 — 1,5

Остальное

Составитель Л.Стеблева

Техред С.Мигунова

Редактор Т.Лазоренко

Корректор Л.Патай

Тираж 397

Заказ 1516

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужго- од, ул. Гагарина,101

Препараты в инкубационной среде выдерживают в течение 5 мин при комнатной температуре. После их ополаскивают в физиологическом растворе и заключают в глицерин. При просмотре используют фильтры СЗС-24-4; СЗС-212 и СС-15-4.

Пример 1. Больной, 23 года, огнестрельное ранение сердца. Иммунолюмисцентному исследованию на наличие антителопродуцирующих клеTQK была подвергнута селезенка. Криостатные срезы нефиксированной ткани селезенки после высушивания, фиксации в абсолютном ацетоне, ополаскивании в физрастворе, далее обрабатывали люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человека.

При просмотре отмытых препаратов селезенки B люмннесцентном микроскопе в красной пульпе обнаружено большое количество ярко светящихся клеток, Для исключения люминесценции зернистых лейкоцитов эти же препараты инкубировали в течение 5 мин.при комнатной температуре в инкубационной среде на миелопероксидазу. При повторном просмотре этих препаратов в люминесцентном микроскопе обнаружены лишь единичные светящиеся плазматические клетки в красной пульпе, что дало возможность выявить наличия антителообразующих клеток в селезенке.

Обнаружено умеренное количество светящихся клеток в мозговых тяжах и большое количество светящихся клеток в синусах. Для исключения люминесценции зернистых лейкоцитов эти же срезы обработаны на миелопероксидазу и вновь просмотрены в люминесцентном .микроскопе. Свечение клеток в мозговых тяжах сохранилось, а в синусах исчезло. В клетках синусов выявлена высокая активность миелопероксидазы, что указывает на принадлежность.их к антителообразующим клеткам

Способ позволяет более полно выявить антителообразующие клетки. Окраска .дополнительно в среде ° содержащей бензидин, снимает полностью неспецнфическое свечение фона.

Формула изобретения

Способ выявления антителообразую"; щнх клеток на гистологическом препарате путем его обработки специфической люминесцирующей сывороткой с последующей микроскопией, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью получения четкого свечения клеток за счет ингибирования свечения окружающего фона, обработку сывороткой

30 проводят в течение 30-40 мин при температуре 20-25 С, далее препарат дополнительно инкубируют в среде, содержащей бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия и перекись водорода при следующих соотношениях компонентов, мас.%: