Способ диагностики лептоспироза

Способ диагностики лептоспироза

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционной иммунологии для выявления лептоспироза. Цель изобретения - повышение точности способа. Инкубируют пробы цитратной капиллярной кроем обследуемых , в одну из которых добавляют убитую поливалентную лептоспирозную вакцину, в другую (в качестве контроля) - физиологический раствор, затем определяют количественную разницу числа поврежденных нейтрофилов в опытной и контрольных пробах, определяя показатель повреждения нейтрофилов (ППН). При этом при ППН, равном 0,14 и выше, диагностируют лептоспироз. Точность способа 100%, по прототипу-28-5%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)» G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

llPYi ГКНТ СССР

ФЖ0

МИНАМ. ,Б14БЛ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4456355/14 (22) 06.07.88 (46) 15.05.91, Бюл. N 18 (71) Кубанскийгосуда рственный медицинский институт им, Красной Армии (72) Л,П.Блажняя, Г.В.1Лельнлк и Ю.П.Арапов (53) 615.375 (088.8) (56) Дранкин Д.И., Гофлевская M.B, Лептоспироз. Саратовский университет, 1988. с, 201 — 209. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике инфекционных заболеваний специфическими реакциями нейтрофилов.

Целью изобретения является повышение точности диагноза лептоспироза.

Способ осуществляют следующим образом.

В 2 пробирки вносят по 0,02 мл 50 -ного раствора цитрата натрия, в каждую иэ них добавляют по 0,05 мл капиллярной крови, взятой из пальца, а затем в опытную пробирку добавляют 0,01 мл неразведенной убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную — 0,01 мл физиологического раствора. Пробирки со смесями инкубируют в термостате при 37 С в тече„„Я) „„1649439 А1 (57) Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционной иммунологии для выявления лептоспироза, Цель изобретения— повышение точности способа. Инкубируют пробы цитратной капиллярной KpGBM обследуемых, в одну иэ которых добавляют убитую поливалентную лептоспирозную вакцину, в другую (в качестве контроля) — физиологический раствор, затем определяют количественную разницу числа поврежденных нейтрофилов в опытной и контрольных пробах, определяя показатель повреждения нейтрофилов (ППН). При этом при ППН, равном 0,14 и выше, диагностируют лептоспироз. Точность способа 100, по прототипу — 28-5%.

° мааЪ ние 90 мин. Из содержимого каждой про- О» бирки готовят мазки крови, высушивают их Д на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова О в течение 1 мин и окрашивают по Романов- ф скому 5 мин. Показатель повреждения ней- (Ъ трофилов (ППН) подсчитывают по формуле

ППН Hl Н2

100 где Н1 и Нг — число поврежденных клеток в опыте и контроле соответственно на 100 подсчитанных клеток, Нейтрофильные лейкоциты по степени повреждения их под влиянием специфического диагностикума (поливалентной убитой лептоспирозной вакцины) делят на 2 группы: 1-я — неизменные нейтрофилы или нейтрофилы с начальными формами клаэма1649439

5 I0

25

Фj5

50 таза, 2-я — н ейтрофил ы с резко выраженным клазматозом.

Для изучения теста повреждения нейтрофилов (ППН) проведены обследования 9 здоровых лиц, 13 больных вирусным гепатитом и 24 больных лептоспирозом. Диагноз вирусного гепатита был поставлен клинически и эпидемиологически и подтвержден серологически в поздние сроки заболевания реакцией агглютинации-лизиса лептоспир.

Проведенные исследования позволили установить специфичность данного способа диагностики, поскольку у здоровых лиц и у больных вирусным гепатитом этот показатель был одинаков (Р > 005) а ч больных лептоспирозом был значительно выше (Р < 0,001). Изучение активности щелочной фосфатаэы нейтрофильных лейкоцитов M.Ã,Øóáè÷åì, Н.Б.Примаченко, В.В,Лебедевым позволило уст=.:»í.ot ëòb повь.шение ее активности у больных лептоспи"озом по сравнению с больными вирусным гепатитом (Р < 0,001), Реакция агглютинации-лизиса лептоспир была изучена у 23 больных лептоспироэом, положительные результаты получены в

15 случаях (65,270) преимущественно в 2-3 недели заболевания, Результаты исследования свидетельст" вуют о развитии специфической сенсибилизации нейтрофильных лейкоцитов у больных лептоспирозом уже на 1-й неделе заболевания, что можно использовать для повышения достоверности диагноза лептоспироза и дифференциальной диагностики лептоспироза от вирусного гепатита.

Пример 1. Больной Д, 29 лет, направлен в стационар на 4-й день болезни c .д,»-иагнозам: ОРЗ с менингеальными явлениями.

При поступлении жаловался на слабость, головную боль, тошноту, рвоту, озноб, повышение температуры тела. Заболевание началось с головной боли, тошноты, однократной рвоты, на следующий день повысилась температура тела до 39 С, усилилась головная боль, появились боли в мышцах всего тела, пояснице, все последующие дни температура тела держалась на высоких цифрах. За 2 недели до заболевания купался в реке. Состояние больного при поступлении тяжелое. Кожа обычной окраски, имеется инъекция сосудов склер, Зев гиперемирован, на задней стенке гнойные увеличенные фолликулы, кровоизлияния. В легких выслушиваются единичные сухие хрипы. Тоны сердца глухие, пульс 55-56 ударов в минуту, АД вЂ” 80/40 мм рт,ст. Печень ниже реберной дуги на 2 см. Отмечается выраженная ригидность мышц затылка, Анализ крови: эритроциты — 4,65 х 10 г/л, I2 гемоглобин — 153 г/л, ц.п. — 1, лейкоциты—

43 х 10 г/л, и 2 с-74, л-20, м 4, 9

С О Э-15 мм/ч. Общий билирубин -104 ммоль/л, прямой — О, тимоловая проба — 5 ед, сулемовая проба — 2,0, АЛТ вЂ” 1,2 ммоль/л, АСТ—

0,6 ммоль/л. Анализ мочи, уд. вес. 1021. зпит, кл. — единичные, лейкоциты — единичные, В стационаре у больного заподозрен лептоспироз, На 7-й день болезни взято по

0,05 мл крови из пальца в 2 пробирки с 0,02 мл 5 >-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную — 0,01 мл физиологического раствора. Пробирки инкубировали при 37

С в течение 90 мин, затем из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали в смеси Никифорова в течение 1 мин, окрашивали по Романовскому в течение 5 мин, Затем мазки крови микроскопировали, определяли показатель повреждения нейтрофилов.

Число поврежденных нейтрофилов в.опыте составило 50, в контроле — 36, ППН вЂ” 0,14, На 8-й день болезни реакция агглютинациилизиса лептоспир (РАЛ) положительна с лептоспирой иктерогеморрагия в разведении 1;100, Больному поставлен диагноз; лептоспироз.

Пример 2. Больной К. 17 лет, поступил в стационар на 5-й день болезни с подозрением на лептоспироз. Заболел остро с повышения температуры тела до 39 С, беспокоили головные-боли, боли в икроножных мышцах, на 4-й день болезни появились кровоизлияния в склеры, температура тела оставалась высокой, Иэ анамнеза выяснено, что больной купался в реке и пил из реки воду, При поступлении больной жаловался на слабость, головные боли, носовые кровотечения, головокружение. Состояние больного при поступлении средней тяжести, ближе к тяжелому. Зев гиперемирован, зернист, миндалины увеличены. В легких — везикулярное дыхание, тоны сердца чистые, пульс 101 удар в минуту, АД 100/60 мм рт.ст, Печень пальпируется ниже реберной дуги на 1 см, селезенка не пальпируется. Имеется ригидность затылочных мышц, симптом

Кернига положительный с обеих сторон.

Анализ крови: эритроциты 3,99 х 1012 г/л, гемоглобин — 133 г/л, цп — 1, лейкоциты—

6,6 х 10 r/ë, э-12, с-40, л-34, м-14, СОЭ-43 мм/ч.

Общий билирубин — 27,87 ммоль/л, прямой—

10,43 ммоль/л, тимоловая проба 23 ед, сулемовая проба — 1,74, АЛТ вЂ” 0,9 ммоль/л, АСТ—

0,4 ммоль/л, Анализ мочи: белок — 0,033 г/л, плоскийэпителий-ед.,лейкоциты -единичные. На 11-й день болезни взято по 0,05 мл крови из пальца в 2 пробирки с 0,02 мл

1649439

Составитель Г, Крюкова

Редактор Т. Лазаренко Техред M.Моргентал Корректор И.Муска

Заказ 1519 Тираж 418 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-.35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

5%-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептаспирозной вакцины, в контрольную — 0,01 мл физиологического раствора. Затем смеси инкубировали в термостате при 37 С в теченйе 90 мин. Из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали 1 мин в смеси Никифорова, окрашивали по Романовскому в течение 5 мин. Мазки микроскопировали и определяли (ППН). Число поврежденных нейтрофилов в опыте составйло 90, в контроле — 28, ППН = 0,62, На 15-й день болезни реакция агглютинации-лизиса лептоспир положительна с легтоспирой иктерогеморрагия в разведении 1:400, Больному постаьлен диагноз: лептоспироз.

Пример 3. Больной Б„27 лет, поступил в стационар на 4-й день болезни с диагнозом: вирусный гепатит, При поступлении жаловался на общую слабость, мышечные боли, головную боль. Заболевание началось с отсутствия аппетита, однократной рвоты, жидкого стула, тошноты, головной боли, повышения температуры тела до 39,6 С, болей в грудной клетке, пояснице, икроножных мышцах, наблюдалось снижение диуреэа. Из анамнеза выяснено, что больной в течение гюследнега месяца купался в рисовых чеках. Состояние бального при поступлении неудовлетворительное.

Склеры умеренно иктеричны, иньекцированы. Тоны сердца ясные, ритм правильный, пульс — 80 ударов в минуту. АД вЂ” 90/60 мм р,ст. В легких дыхание везикулярное, ослабленное. Язык подсушен, несколько обложен белым налетом, Живот мягкий, чувствительнь1й при пальпации в правом подреберье, печень у реберного кузя. Анализ крови: эритроциты — 4,56х10 г/л гемоглобин—

152 г/л, лейкоциты — 6,2х10 г/л, з-б, с-66, 1 л-23, м-4, плазм. кл.-1, СОЭ-49 мм/ч. Общий билирубин — 10,43 ммоль/л, прямой — 0, тимолавая проба — 5 ед. АЛТ вЂ” 0,2 ммоль/л, АСТ-0, сулемовая проба — 2,0. Анализ мочи; уд.вес 1 013. реакции кислая, белок — 0,033 г/л, лейкоциты — единичные. Реакция агглютинации-лизиса лептоспир HB 6-Й день отрицательна, на 25-й день — положительна с лептоспирой иктерогеморрагия 1:100. На 9-й день болезни взято па 0,05 мл крови иэ

5 пальца в 2 пробирки, сод "ðæàùèå по 0„02 мл

5%-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убигай полизаленгной лептаспирозной вакцины, в контрольную — 0,01 мл физиологического

10 раствора. Затем пробирки инкубировали в термостате при 37 С в течение 90 мин. Иэ содержимого каждой пробирки готовили мазки коови. высушивали их на воздухе, фиксировалй 1 мин в смеси Никифорова, 15 окрашивали по Романовскому в течение 5 мин. Мазки микроскопиравали и определяли число поврежденных нейтрафилав в опыте и контроле, катооае составило соответственна 60 и 36, ППН = 0,24, что

20 подтверждает диагноз лептоспироза, При повторном определении показателя повреждения нейтрофилав на 17-й день болезни число поврежденных нейтрофилов в опыте и контроле составило соответственна

25 бб и 28, ППН = 0,38. Бальному поставлен окончательный диагноз: лептоспироз.

Таким образом при использовании изобретения повышается точность диагноза лептоспироза, чта позволяя; своевременно

30 назначать адекватну о "-Tèîòðoãtíóþ и патогенетическую терапию и улучшает прогноз заболевания. Способ специфичен, не требует дефицитных реактивов, специального оборудования, легко выполним в любой ла35 баратории лечебна-профилактических учреждений.„Точность способа составляет

100% >poTDT<< 28 -.%

Формула г зобретения

40 Способ диагностики лептоспироза путем добавления исследуемого материала к клеткам лептоспир, а т л и ч а ю шийся тем. что, с целью повышения точности способа, исследуемую цитратную кровь доб.зляют к

45 убитой поливалентной лептсспиаазной вакцине, определяют показатель повреждения нейтрофилов и при показателе его, равном ,0,14 и выше, диагностируют лептоспироз,