Способ получения растений - регенерантов пшеницы из пыльцы в культуре пыльников

Способ получения растений - регенерантов пшеницы из пыльцы в культуре пыльников

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к культивированию растительных тканей и касается получения растений-регенерантов пшеницы из пыльцы . Целью изобретения является повышение выхода регенерантов за счет увеличения выхода эмбриональных структур . Способ состоит в гом, что в питательную среду, на которой культивируют пыльники, вносят стимулирующее количество 2,4-Д, предварительно определенное по степени отрастания корешков семчн 6 табл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з А О1 Н 4/00, С 12 N 5/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4471647/13 (22)15.08.88 (46)23.05.91, Бюл. М 19 (71)Институт биологии Башкирского филиала АН СССР (72)В.Ю.Горбунова, Г.P.Êóäîÿðîâà, С.Н.Надольская, P.A.Äîêè÷åâà и Н.Г.Кужлева (53}578.085.23(088.8) (56)Авторское свидетельство СССР

М 1036306, кл.А 01 Н 3/00, 1983. (54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ПШЕНИЦЫ ИЗ ПЫЛЬЦЫ В

КУЛЬТУРЕ ПЫЛЬНИКОВ

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению растений из пыльцы в культуре изолированных пыльников яровой пшеницы для ускоренного получения новых исходных форм и константных гибридных линий.

Целью изобретения является повышение выхода регенерантов за счет увеличения выхода эмбриональных структур.

Способ состоит sтом,,что проводят выделение колосьев донорных растений, у которых влагалище предпоследнего листа расположено на центральной части колоса, обработку колосьев пониженной температурой, вычленение пыльников, культивирование их на питательной среде для регенерации растений, при этом перед культивированием пыльников на питательной среде проводят определение дозы натриеeoh соли 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д), стимулирующей рост корешков— семян пшеницы с последующей добавкой соответствующего количества в питатель, ... Ж 1650051 А1 (57)Изобретение относится к биотехнологии, а именно к культивированию растительных тканей и касается получения растений-регенерантов пшеницы из пыльцы. Целью изобретения является повышение выхода регенерантов за счет увеличения выхода эмбриональных структур. Способ состоит в том, что в питательную среду, на которой культивируют пыльники, вносят стимулирующее количество 2,4-Д, предварительно определенное по степени отрастания корешков семян. 6 табл. ную среду для инициации эмбриоидов из пыльников в концентрации от 0,25 до

1,0 мг/л в зависимости от сорта, в низких концентрациях обладающей ауксиноподобным типом действия, Способ осуществляют следующим образом, Семена разных сортов проращивают в темноте на стеклянных плотиках при 27 С 0 в течение 3 сут. Затем измеряют длину С) центрального корешка и переносят проро- Ql стки в чашки Петри по 10 шт в 15 мл рас- в твора 2,4-Д в возрастающей концентрации от 0,1 до 12 мг/л и помещают в те же условия. Через два дня измеряют длину корня и определяют степень ингибирования или стимуляции роста корней под действием гербицида.

Сбор материала для культивирования может проводиться круглосуточно из открытого и закрытого грунта. Колосья, у которых влагалище предпоследнего листа расположено в центральной части колоса, срезают

1650051

50 и ставят в холодильник на 7-9 дней при температуре 4-5 С. Затем колосья с листовой оберткой промывают в автоклавированной дистиллированной воде, стерилизуют

70 -ным спиртом в течение 7 с, вновь промывают стерильной водой и продолжают стерилизацию 3 -ной перекисью водорода в течение 6 мин и дважды промывают дистиллированной водой. В стерильных условиях (в шкафах с ламинарным потоком стерильного воздуха) вычленяют пыльники и помещают на поверхность агаризованной питательной среды для инициации эмбриогенеза в биологические пробирки.

Среда I содержит минеральные соли, витамины по прописи Ns 10/,-ный картофельный экстракт, (9;/,-ную сахарозу, 0,7%ный агар и гормональные добавки в виде различных концентраций 2,4-Д (от 0,25 до 1 мг/л) в зависимости от культивируемых генотипов. Пробирки с образцами культивируют в темноте при температуре + 27 С.

Образовавшиеся через 21-29 дней культивирования эмбриоиды пересаживают на среду И, способствующую регенерации растений. Результаты приведены в табл.1. Она не содержит 2,4-Д. В качестве гормональных добавок включается кинетин и индолилуксусная кислота. Пробирки с эмбриоидами помещают на светоплощадку на 16-часовой фотопериод и при 10- t2 С.

Регенерировавшие при этих условиях растения высаживают в почву.

Пример 1. Определение чувствительности сорта Скала к различным концентрациям 2,4-Д и интенсивность эмбриоидогенеза на искусственных питательных средах с различной концентрацией 2,4-Д.

Чувствительность сорта к различным концентрациям 2,4-Д определяют описанным способом. Затем выясняют стимулирующую зону. В питательную среду для культивирования пыльников добавляют соответствующую стимулирующей зоне дозу

2,4-Д, как гормон ауксинового типа действия.

Для проверки изобретения пыльники сорта Скала культивируют и на альтернативной среде с содержанием 2,4-Д 1 мг на 1л среды. Полученные результаты представлены в табл.2.

Пример 2. Аналогичный эксперимент проводят для линии 35 (Иния 66 х Кавказ).

Полученные результаты приведены в табл.3.

Интенсивность змбриоидогенеза выше на среде, содержащей стимулирующую дозу

2,4-Д.

Пример 3, Выявляют стимулирующие дозы 2,4-Д для сорта Саратовская 29 по той же методике, что и в примерах 1 и 2. Определение интенсивности эмбриоидогенеза проводят на искусственных питательных средах, различающихся по 2,4-Д, Максимальный выход эмбриоидов для сорта Саратовская 29 наблюдают на среде, содержащей стимулирующую дозу 2,4-Д.

Результаты приведены в табл,4.

В результате проведенных исследований выявлены следующие ингибирующие и стимулирующие эмбриоидогенез концентрации 2,4-Д для различных сортов пшеницы. Результаты приведены в табл.5 и 6.

Преимуществом изобретения являются возможность культивирования любых генотипов с целью получения эмбриоидов для регенерации из них растений, идентичность растений-регенерантов и исходных форм, высокий выход эмбриоидов, быстрота процесса, занимающего от момента определения стимулирующей дозы 2,4-Д до образования растений 45-90 дней, возможность круглогодичного проведения работ, предсказуемость и интерпретируемость результатов эксперимента, многократное увеличение выхода эмбриоидов и растений по сравнению с прототипом, Ф ормула изобретения

Способ получения растений-регенерантов пшеницы из пыльцы в культуре пыльников, включающий выделение колосьев донорных растений, у которых влагалище предпоследнего листа расположено на центральной части колоса, обработку колосьев пониженной температурой, вычленение пыльников, культивирование их на питательной среде, получение эмбриоидов и пересадку на питательную среду для регенерации растений, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода регенерантов за счет увеличения выхода эмбриональных структур, перед культивированием пыльников на питательной среде предварительно определяют количество натриевой соли дихлорфенилуксусной кислоты, оптимальное для эмбриоидогенеза, но стимуляции роста корешков семян, после чего соответствующее количество ее вносят в питательную среду в концентрации (0,25—

1 0) мг/л в зависимости от сорта.

1650051

Компоненты среды

СеаИ

С е al

10 (,-ный

100

200

27,8

37,3

1,0

90000

7000

0,1 — 1,0

0,2

0;2

6,1

6,1

0,1

0,25

1,0

9,06

41,67

21,15

0,1

0,25

1.0

14,0

71,67

Картофельный экстракт

КЙОз

Са (МОз)2 4Н20

MoSO4 7Н20 (NH4)z SO4 йаН2 Р04 Н20

KHzPOp

Са СЬ 2Н20

FeS04 7НгО

Маг ЕДТА 2Н20

CuSO4 5Н20

MnS04- Н20

KCI

ZnSO4 ° 7HzO йа2МоО 2НгО

НзВОз

К!

Тиамин

Аскорбиновая кислота

Пиридоксин

Никотиновая кислота

Мезо-инозит

Сахароза

Агар

2,4-Д

Кинетин

Индолилуксусная кислота

Н о автоклави ования

Кон ент а ия,мг/л

Выход эмб иоидов,7

Кон ент а ия, мг/л

Выхо эмб иоидов,3

Й6 модифицированная, мг/л

Таблица 1

Гамборга-Эвелега

В5 мо и и и ованная

134

13,9

18,6

0,025

2,0

0,25

3,0

0,75

0,5

1,0

0,5

1,0

20000

Таблица 2

Таблица 3

1650051

Таблица 4

01

025

0,56

2,1

Таблица 5

Таблица 6

Корректор О. Ципле!

Редактор А, Мотыль

Заказ 1558 Тираж 373 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Кон ент а ия мг/л.

8ыхо эмб ои ов, Составитель В. Демкин

Техред M,Mîðãåíòàë