Способ размножения гречихи in viтrо

Способ размножения гречихи in viтrо

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений для ускоренного размножения ценных генотипов гречихи. Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса размножения при увеличении выхода регенерантов. Способ состоит в том, что в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование осуществляют на одной и той же модифицированной питательной среде Гамборга Bs, в которую дополнительно вносят 6-БАП в количестве 5-10 мг/л. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ИЬРЧ}, 4ца

4И1Г}.: ..

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

) ч >

0,025

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4485034/13 (22) 05.06.88 (46) 30.06.91. Бюл. ¹ 24 (71) Казанский институт биологии Казанского филиала АН СССР (72) Л,П.Белова и А.В.Богушевич (53) 578.085.23(088.8) (56) Каз. институт биологии КФ АН СССР, Казань, 1985. Рукопись деп. 16,12.85, № 8674-В. (54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ГРЕЧИХИ Ю

VITRO

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений, в частности для ускоренного размножения ценных экземпляров и сортов гречихи, а также в исследованиях по генетике и физиологии растений, Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса размножен. я при увеличении выхода регенерантов.

Способ состоит в том, что в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование их осуществляют на одной и той же модифицированной питательной среде Гамборга В5 с

6-.бенэиламинопурином (6-БАП) из расчета

5-10 мг/л среды, при последующих субкультивированиях концентрацию 6-БАП уменьшают до 1-2 мг/л.

Способ осуществляют следующим образом.

Иэ донорных стерильных или простерилиэованных растений гречихи вычленяют узел с частью стебля и листом (1,5-2 см), Затем узлы растений культивируют на моди„„я „„1658928 Al (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений для ускоренного размножения ценных генотипов гречихи.

Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса размножения при увеличении выхода регенерантов. Способ состоит в том, что в качестве зксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование осуществляют на одной и той же модифицированной питательной среде Гамборга В5, в которую дополнительно вносят 6-БАП в количестве

5-10 мг/л. 1 э.п. ф-лы. 1 табл. фицированной питательной среде Гамборга

В5, содержащей 5-10 мг/л 6-БАП. Эта величина получена экспериментальным путем.

При уменьшении количества 6-БАП в питательной среде процесс размножения идет менее интенсивно и при больших затратах времени, хотя при последующих субкультивированиях концентрацию уменьшают до

1-2 мг/л.

Состав среды для культивирования и субкультивирования узлов растений гречихи следующий, мг/л: . Мак росоли

NBK2P02 Н20 150

КИОТ 2500 (N Н4)2$04 134

MgS04 7Н20 250

CBCI2 . 2H20 150

FeSO4 7Н20 28 йагЭДТА 2Н20 37,3

Микросоли

НЗВОз

Мп$04 4Н20

CoClz 6HzO

1658928

Cu SO< 5Н20

ZnSO4 7HzO

Na2MoO 2Н20

Kl

Витамины

Тиамин-H CI 2

Пиридоксин-HCI 1

Никотиновая кислота 1

Миоинозит 100

Гидролиэат казеина 2000 10

Сахароза 30000

Агар 7000

БАП 5-10

Вода Остальное

Перед автоклавированием рН среды 15 доводят до 5,8-6,0.

Материал инкубируют в условиях 16-часового фотопериода при освещении 7000 лк и температуре 24 ":2 С в закрытых прозрачных сосудах, В случае появления на экс- 20 плантатах бактериальной или грибной инфекции их удаляют с частью прилегающей к ним питательной среды, Эксплантаты находятся на питательной среде 3 — 4 нед. К концу этого периода из 25 пазух листьев образуется 3 — 8 проростков до 2-5 см длиной, узел и нижняя часть стебля утолщаются, на нижней части стебля образуется каллус. Размножившиеся из пазух лисгьев регенеранты рассаживают на ага- 30 ризованную, разбавленную вдвое питательную среду Мурасиге и Скуга без гормонов для доращивания и укоренения.

Корни начинают образовываться приблизительно на 10-й день, а выращивание расте- 35 ний на данной среде продолжают 3-4 нед, после чего их переносят в почвенно-торфяную смесь.

Оставшуюся часть эксплантата разрезают на 2 — 3 части, отдельные кусочки пере- 40 саживают на исходную среду для регенерации и культивируют в укаэанных условиях. При этом в течение 3-4 нед объем этих кусочков увеличивается и образуются стеблевые почки, кучки проростков до 3 — 10 45 мм длиной, отдельные листья на черешках, После чего эксплантаты расчленяют на отдельные регенеранты и клоны почек и высаживают на среду Мурасиге и Скуга с половинной дозой ее компонентов, но без 50 гормонов, для доращивания и укоренения.

Подобное дробление эксплантатов со стеблевыми почками и попеременное культивирование на среде регенерации и на среде для доращивания и укоренения мож- 55 но проводить неСколько раэ, что в случае необходимости увеличивает количество получаемых растений-регенерантов от одного эксплантата.

Пример 1. В работе исследуется применение способа для сортов гречихи культурной Казанская групнозерная и

Майская, Работа осуществляется по указанной методике, при этом в среду Гамборга В5 вводят 6-БАП в количестве 1 мг/л.

Пример 2-4. Осуществляют аналогично примеру 1, результаты представлены в таблице.

Таким образом, наибольший выход регенерантов наблюдается при использовании 6-БАП в концентрации 5 — 10 мг/л.

Следует отметить, что инициация развития проростков при этих концентрация 6-БАП начиналась на неделю раньше. Эти побеги отделяют и рассаживают на агаризованную разбавленную среду Мурасиге и Скуга без гормонов для доращивания и укоренения.

При тех же температурных условиях и фотопериоде выращивание на данной среде продолжают 3 — 4 нед, после чего их можно высаживать в почвенно-торфяную смесь.

Оставшуюся часть эксплантата разрезают на части и отдельные кусочки опять помещают на исходн/ю среду для регенерации и культивирования в названных условиях, При этом за 3-4 нед. размеры этих кусочков увеличиваются, образуя конгломераты проростков разных размеров, стеблевые почки, отдельные листья на черешках.

Затем опять повторяют операцию отделения регенерантов от клонов почек с недоразвитыми проростками, Регенерационная способность эксплантатов сохраняется s течение длительного времени (часть эксплантатов культивируется уже около года), однако чеОез 3-4 субкультивирования на среде для регенерации наблюдают появление морфоэов, которые нарастают от пассажа к ассажу, особенно на среде с содержанием 6-БАП 10 мг/л. Предотвратить появление морфозов возможно путем снижения количества 6 — БАП в среде для регенерации(до 1-2 мг/л) при последующих субкультивированиях.

Таким образом, используя при последующих субкультивированиях пониженные концентрации 6-бенэиламинопурина в среде для регенерации можно получить большое количество регенерантов от одного эксплантата.

Формула изобретения

1, Способ размножения гречихи ln vitro, включающий вычленение эксплантатов, культивирование и субкультивирование их на модифицированной агариэованной питательной среде Гамборга Bs с последующим доращиванием и укоренением стеблевых почек и побегов на беэгормональной среде Мурасиге — Скуга с умень1658928

Влияние различных концентраций 6-БАП на морфогенез гречихи

Составитель В. Демкин

Техред М,Моргентал Корректор Т. Палий

Редактор Н. Швыдкая

Заказ 1793 Тираж 360 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 шенным вдвое содержанием компонентов, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса размножения, в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование осуществляют на одной и той же среде, в которую дополнительно вносят 6-БАП в количестве 5 — 10 мг/л.

2, Способ по и 1, отличающийся тем, что. с целью увеличения выхода регене5 рантов, после 3-4 пассажей проводят снижение количества 6 — БАП до 1-2 мг/л.