Способ получения активной фракции антираби- ческой сыворотки

Способ получения активной фракции антираби- ческой сыворотки

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 17,11I,1961 (№ 722231/31-16) с присоединением заявки ¹

Приоритет

Опубликовано 19.XI.1964. Бюллетень № 22

Кл, 30h, 6

МПК А 611:.

УДК

Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР

Дата опубликования описания 9.Xll.1964

:, Г(0 и," " !т-,.1тн1

Авторы изобретения

A. A. Никитенко и Г. Д. Кобринский

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВНОЙ ФРАКЦИИ АНТИРАБИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ

Подписная группа Л6 293

Известен способ получения активной фракции антирабической сыворотки путем осаждения спиртом и ферментации пепсипом.

Предлагаемый способ упрощает производство и позволяет получать активную фракцию антирабической сыворотки с большим выходом и со спи>ке!и!ыми апафилактогенными свойствами. Это достигается применением при осаждении большой ионной силы и ферментировапием готового продукта (гаммаили гамма-, бета-глобулппов), Для осуществления способа иммунную сыворотку животного разводят ледяной дистиллированной водой 1: 1 и ацетатным Оуфером с рl-1 4,0, доводят рН всей среды до 6,4 и при энергичном перемешивании (избегал вспенивапия) добавля!от 900 !гл 53%-ного этилового спирта на 1 л смеси. Осаждепие 11p÷èíàþò при 0 С и заканчивают при — 7 С. После прибавления спирта смесь перемешивают 1 час и центрифугируют прп — 7 С. В надосадочной жидкости получают альфа-, бета-глобул п1ы и альбумип, а в осадке Оелки, обладающ!!е наибольшей активностью. Получен;!Ый осадок суспспдируют и растворе хлористого 1 атрпя в отношении 1: 7,5 с таким расчетом, чтобы вся суспензия имела довольно высокую кош;ентрацию хлористого натрия, например 0,2 лоль.

Длл этОГО В 6 — 7 л,,исти !пиров;пп1сй вoдь! растворяют 99,45 г хлористого патрпл н в этом растворе суспендируют 1 кг осадка. Замеряют полученный объем суспензип, доводят весь объем водой до 8,5 л. После TllJ,àòåë!»hîãî размешивания при 0 С рН суспензии понижа5 ют ацетатным буфером до 5,01!-0,05, 1 час перемешивают при 0 С и при постоянном перемешивании добавляют 110 !!л 53%-ного спирта на 1 л суспензип. Осаждение заканчивают при — 4 С. После добавления спирта смесь

10 тщательно перемешивают 1 час, после чего центрнфугируют при — 5 С. Выпавший осадок

Hp. используют, а надосадочную ж;!дкость фильтруют через бумажное тесто прп --5 С и прозрачный фильтрат замеряют. Для ссажде15 ния белков с подвижностью гамма-глобулипов рН фильтрата повышают 1 моль бикарбонатом натрия до 7,0+0,1; если же надо осадить белки с подвижностью гамма- и бета-глобулппов, то рН фильтрата доводят до 5,0 +-0,05. В том

20 и другом случае добавляют равный объем

53%-ного спирта при энергичном персмешпвании. Осаждепие начинают прп 0 С и:-.ака!!чпвают при — 7 . Выпавший осадок отделяют на центрифуге при — 7 С. Электрофоретическая

25 картина осадков, выделенных из фильтрата при рН 7,0, обнаруживает наличие гамма-глобулипов, а при рН 5, 0-гамма и бета-гло ул!шов.

Полученный осадок растворяют прп 20"С в

0,15 л!огь растворе ХаС,1 до показателя пре30 ломлепия па рефрактометре равного 1,3530—

166463

Составитель С. В. Пыжев

Редактор А. И. Байнова Техред Л. К. Ткаченко Корректор Л. Е. Марисич

Заказ 3146/10 Тираж 425 Формат бум. 60 90 /q Объем 0,16 иад. л. Цена 5 коп.

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретечий и открытий СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2

l,3600. Полученный раствор прозрачен, ус.ойчив и содержит антитела, но обладает высокой анафилактогенностью. Для ослабления анафилактогенности проводят ферментацию.

Для этого полученный раствор разводят двумя объемами дистиллированной воды, поникают рН 10О/в-ной соляной кислотой,.о 3,0»0,05, нагревают на водяной бане до 37 С и добавляют при энергичном помещении 0,5в/р медицинского пепсина для производства сывороток. Смесь тщательно перемешивают при 37" С в течение 1 час с момента добавления пепсина. За 5 — 10 мин до истечения этого срока берут небольшую пробу раствора и титр ют Р3. ким натром 1 моль до рН 4,2 «0,05 и при этом рН всю смесь греют еще 1 час. Неооходимое количество щелочи на весь р-створ определяют путем расчета. По истечении 2 час с момента добавления пепсина рН всей смеси повышают 1 моль щелочью до 7,1+0,1 и быстро охлаждают до 0"С. Затем при постоянном перемешивании добавляют равный объем

53в/в-ного спирта. Процесс заканчивают при — 7 С. После прибавления спирта сме ь 1 час перемешивают и центрифугируют при — 7 С.

Полученный осадок растворяют в щелочном растворе 0,15 моль хлористого натрия до коэффициента преломления 1,3600. Щелочной раствор хлористого натрия готовят добавлением на 1000 ил 0,15 моль раствора хлористого натрия 1 моль бикарбоната натрия. Конечный рН белкового раствора должен быть

10 7,2 — 7,4. Полученный белковый раствор имеет цвет янтаря, прозрачен и обладает хорошей устойчивостью.

Предмет изобретения

Способ получения активной фракции из антирабической сыворотки путем осаждения спиртом и ферментации пепсином, отличаюи1ийся тем, что, с целью уменьшения анафи20 лактогенности препарата и упрощения производства, берут при осаждении ионную силу 0,2 и ферментируют гамма- или гамма+бета-глобулины.