Способ очистки @ i-раково-эмбрионального антигена

Способ очистки @ i-раково-эмбрионального антигена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии и медицине, а конкретно к методам очистки раково-эмбрионального антигена (РЭА), и может быть использовано в качестве компонента иммунной тест-системы для определения РЭА в сыворотке крови человека. Целью изобретения -является упрощение способа очистки <SP POS="POST">125</SP>J РЭА. Поставленная цель достигается исключением этапа гель-хроматографии опухолевого экстракта и использованием для сенсибилизации иммуносорбента моноклональных антител к РЭА штамма гидродомы С1.В8.С7.3 N ВСКК (П)46 Д.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

est)s G 01 N 33/531

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4612857/14 (22) 01.12.88 (46) 07.08.91. Бюл. N. 29 (71) Институт биоорганической химии

AH БССР, Хозрасчетное опытное производство Института биоорганической химии

АН БССР и Всесоюзный онкологический научный центр AMH СССР (72) А.И.Щербань, С.И.Марчук, И.M.Áåñàðàá, И.В.Судник, П.К.Иванов и T.Â,Ïèñêóíîâà (53) 615,475 (088.8) (56) Ochi Y, Fujiyama Y, Hasoda S. et al, Purification of carcinoembryonic autigen by

affinity chromatography with aufl а1 -acid

glycoprotein. — J. Jmunnol, Methods. — 1982, vol. 52, р. 213-221.

Изобретение относится к биохимии и медицине, конкретно к очистке меченного йодом-125 ракова-эмбрионального антигена (5I-РЭА), который может быть использован в качестве компонента радиодиагностических наборов для определения

РЭА в сыворотке крови человека.

Целью изобретения является упрощение способа очистки l-P3A за счет исклю125 чения этапа гель-хроматографии.

Проводят иммуноаффинную хроматографию непосредственно из реакционной смеси моноклональными антителами (монАТ) к РЭА, иммобилизованных на CNBr агарозе, исключают этап гель-хроматографии. Особе н ностью предлагаемого способа является проведение иммуноаффинной хроматографии на монАТ к РЭА, например, продуцируемых штаммов гибридных клеток

С1.88.С7.3 ¹ ВСКК/и/46Д.

Способ осуществляют следующим образом, „... Ж„„1668948 А1 (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ 1-РAKOBO-ЭМБРИОНАЛЬНОГО АНТИГЕНА (57) Изобретение относится к биохимии и медицине, а конкретно к методам очистки раково-эмбрионального антигена (РЭА), и может быть использовано в качестве компонента иммунной тест-системы для определения РЭА в сыворотке крови человека.

Целью изобретения является упрощение

125 способа очистки " -РЭА. Поставленная цель достигается исключением этапа гельхроматографии опухолевого экс1ракта п использованием для сенсибилизации иммуносорбента моноклональных антител к РЭА штамма гидродомы С1,В8.С7.3

N . ВСКК(И)46 Д.

МонАТ выделяют из асцитной жидкости мышей BALB/с, которым пересажены гибридные клетки, фракционированием сульфатом аммония и ионообменной хроматографией на колодке Моно QHR 5/5 с по- ъ мощью системы высокоскоростной Ос, белковой жидкостной хроматографии FPLC (), фирмы Pharmacla (Швеция). Иммуносорбент р

МонАТ к РЭА-агароза получают, иммобилизуя монАТ на CNBr-агарозе (отечественный аналог CN Br-сефарозы фирмы

Pharmacia) в условиях, рекомендуемыхфир- 0 мой Pharmacia при концентрации монАТ

1мг на 1 мг геля. Емкость иммуносорбента составляет 0,3 мг РЭА на 1 мг геля, Л

Реакционную смесь, содержащую РЭА, наносят на колонку с иммуносорбентом, после промывки элюцию антигена ведут 0,1 М глицин-HCI при рН 2,2.

Пример 1. РЭА радиойодируют с помощью хлорамин Т-метода. Радиохимический выход составляет 25-30 P. Реакцион1668948

Состав ;гель И. Башкаев

Техред 1"1. Моргентал Корректор Т. Палий

Редактор И. Шулла

Заказ 2653 Тираж . 94 Подписное

ВНИИПИ Госудэрственнои ком ;;ета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035 1;1»с,вл, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно изг,; те"i л комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ную смесь наносят на колонку (0,5х2 см) с иммуносорбентом моноАТ к РЭА-агароза.

Колонку промывают со скоростью 15 мл/ч последовательно 20 мл 0,05 M натрий-фосфатного буфера, рН 7,4, содержащем 0,1 M

NaC1; 10 мл 0,05 M натрий-фосфэтного буфера, рН 7.4, содержащего 0,3 холат натрия и 1 M NaCI, 10 мл 0,05 M натрий-фосфатного буфера, рН 7,4. Элюируют — I-РЭА с имму, носорбента 0,1 M глицин-НСI, рН 2,2. Элюат собирают по 1 мл в пробирки, содержащие по 1 мл 0,2 M натрий-фосфатного буфера, рН 7,4, содержащего 2% БСА и 0,05 NaN .

Иммунореактивность препарата IРЭА составляет 92% (иммунореактивность, определяют с избытком кроличьей энтисы, воротки к РЭА с системой разделения— сульфат аммония), неспецифическое связы, вание составляет 0,8 (неспецифическое

; связывание определяют при отсутствии антисыворотки к РЭА с системой разделения — вторые антитела, иммобилизованные на микрокристаллической целлюлозе).

Через 40 сут иммунореактивность меченого

; антигена составляет 71, а неспецифиче,ское связывание — 3,4, Пример 2. РЭА радиойодируют с помощью хлорэмин Т- или лактоперокси, дазного метода. Для очистки I-РЭА из, реакционной смеси используют иммуно; сорбент, а условия элюирования по примеру 1, Для промывки иммуносорбента используют следующие буферные системы: 0,05 M натрий-фосфатный буфер, рН 7,4, содержащий 1 М NaCI (а); 0,05 M натрий-фосфатный буфер, рН 7,4, содержащий 0,1-0,5 Твин-20 и 1 M NaCI (б); 0,05,М натрий-фосфатный буфер, рН 7,4, содержащий 0,1-0 5 тритонХ-100 и 1 M NaCI (в), 0,05 М натрий-фосфатный буфер, рН 7,4, содержащий 0,025-0,05 додецилсульфат натрия и 1 M NaCI (г). Остальные условия промывки по примеру 1, Иммунореактивность I-РЭА после

125 очистки с промывкой иммуносорбента по а составляет 73-77, неспецифическое связывание — 4,0-5,6 ; через 40 сут имму5 нореактивность составляет 50-56, неспецифическое связывание — 5,5-6,1,.

Иммунореактивность 1-РЭА после очистки с промывкой иммуносорбента по б составляет 76-83, неспецифическое свя10 зывание — 4,4-5,2 ; через 40 сут иммунореактивность составляет 55-62, неспецифическое связывание — 5,0-5,7 .

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет упростить процесс

15 очистки I-РЭА за счет сокращения на одну стадию — не проводится гель-хроматография реакционной смеси на сефадексе 0-200.

Общее время процесса очистки сокращается на 3 ч, т,е. приблизительно в два раза.

20 Способ гарантирует получение при использовании разных методов радиойодирования (хлорамин Т-метод, ферментативный метод) высокоимм нореэктивных, стабильных препаратов I-РЭА с хорошей вос1 5

25 производимостью, что делает возможным серийный выпуск радиодиагностических наборов для определения РЭА в сыворотке крови человека, 30 Формула изобретения

Способ очистки I-раково-эмбрионального антигена, включающий добавление опухолевого экстракта в колонку, содержащую сорбент, сенсибилизирован35 ный антителами к раково-эмбриональному антигену, промывание иммуносорбента и элюцию антигена, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет исключения этапа гель-хроматографии, имму40 носорбент сенсибилиэируют моноклональными антителэми к раково-эмбриональному антигену штамма гибридомы С1.В8.С7.3

М ВСКК(11)46Д.