Способ получения @ - n - ацетилглюкозаминидазы bacillus suвтilis вкпм в-2471

Способ получения @ - n - ацетилглюкозаминидазы bacillus suвтilis вкпм в-2471

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения очищенного бактериального ферментного препарата, β - N - ацетилглюкозаминидазы, который можно использовать при исследовании карбогидразной части гликолипидных и гликопротеиновых веществ, при лечении лизосомальных болезней, как эталон при диагностике раковых заболеваний. Цель изобретения - увеличение выхода целевого продукта и упрощение способа получения бактериальной β - N - ацетилглюкозаминидазы. Способ заключается в осаждении биомассы BACILLUS SUBTILIS ВКПМ В - 2471 ацетоном в соотношении 1:1, отделении ее центрифугированием и суспендировании в буфере. Далее суспензию биомассы обрабатывают препаратом β - N - ацетилглюкозаминидазы до перевода экзо - β -N - ацетилглюкозаминидазы в растворимое состояние, потом гелем фосфата кальция, для образования которого вносят 8 об.% хлористого кальция, затем фильтруют в присутствии 8 об.% фильтроперлита. Полученный фильтрат обессоливают диафильтрацией, фермент очищают хроматографией на депротеинизированном хитине, где сорбцию фермента проводят при рН 3,5 - 4,0, а элюцию - при рН 4 - 10. При использовании данного способа выход высокоочищенного препарата β - N - ацетилглюкозаминидазы повышается в 10 раз. К тому же упрощается способ выделения целевого продукта благодаря обработке биомассы ферментативным, химическим путем и аффинной хроматографии на хитине. При этом исключаются этапы центрифугирования, гельфильтрации и ионной хроматографии. 2табл.

СОК)Э СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4710366/13

1 (22) 26. )6.89 (46) 23.08.91. Бюл. 1,"- 31 (71) Всесоюзный научно — исследовательский институт прикладной энзимологии (72) В.Д.Паюодис, П.Д. Валанчюс и В.Б.Авиженис ,(53) 663. 13(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 622282, кл . С 12 11 9/00, 1/20, 1976

0rtiz J.И. et al. Biochemica et

Biophysica Acta., 1972, v. 289,. р. 174 — 186. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3-N-АЦЕТИЛГЛЫКОЗАЖШИДАЗЫ ВАСИЛА)Б 811ВТП?Б ВКПМ

В-2471 (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения очищенного бактериального ферментного препарата, 1з-М-ацетилглюкозаминидазы, который можно использовать при исследовании карбогидразной части гликолипидных и гликопротеиновых веществ, при лечении лизосомальных болезней, как эталон при диагностике раковых заболеваний. Цель изобретения — увеличение выхода целевого продукта и упрощение способа получения бактериальной j3-N-ацетилглюкоИзобретение относится к биотехно.логии, в частности к технологии полу-. чения очишенного бактериального ферментного препарата Р -N — ацетилглюкозаминидазы, который можно использовать .при исследовании карбогидразной части гликолипидных и гликопротеиновых ве„„SU„„1671691 А I (51) 5 С 12 М 9/14//(С 1 N 9/14, С 12 Р 1: 1 l5) 2 заминидазы. Способ заключается в осаждении биомассы Вас 11из выЬ д1 з ВКПИ

В-2471 ацетоном в соотношении 1:1, отделении ее центрийугированием и сус— пендпровании в буфере. Далее суспензию биомассы обрабатывают препаратом р-"-"-ацетилглюкозаминидазы до перевода экзо-Р— N — ацетилглюкозаминидазы в растворимое состояние, потом гелем фосфата кальция, для образования которого вносяr 8 об.Е хлористого кальция, затем фильтруют в присутствии 8 об.Х фильтроперлита. Полученный фильтрат обессоливают диафильтрацией, фермент очищают хроматографией на депротеинизированном хитине, где сорбцию фермента проводят при рН 3 5 — 4,0, а элю- Ж цию — при рН 4 — 1Ч. При использовании данного способа выход высокоочищенного препарата Р -11-ацетилглюкозами- С нидазы повышается в 10 раз. К тому же упрощается способ выделсния лев левого продукта благодаря обработке биомассы ферментативным, химическим путем и афинной хроматографии на хитине. При этом исключаются этапы цент- у рифугирования, гель-фильтрации и ионной хроматографии. 2 з.п. ф-лы.

2 табл.

I ществ, при лечении лизосомальных бо— лезней, как эталон при диагностике раковых заболеваний.

Цель изобретения — увеличение выхода целевого продукта и упрощение способа получения бактериальной /3 †N ацетилглюкозаминидазы.!

671691

Сll <«с об 3л к:11п

<<<<<<<<<<

<

<

<<

<<<<<<

<

<