Способ определения наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании в эксперименте

Способ определения наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании в эксперименте

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной пульмонологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Повышение точности определения наступления дыхательной недостаточности в эксперименте достигается тем, что из легких животных выделяют митохондрии, определяют скорость потребления кислорода в пробах с сукцинатом в присутствии АДФ и без него, рассчитывают величину отношения первого ко второму и при уменьшении отношения относительно нормы не менее чем на 20% определяют наступление дыхательной недостаточности. Точность прогноза 86,4% (по прототипу - 68,2%).

СОКЭЗ СОВГ ТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РГСГ1УБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ l КНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (, с V

M (л) (Л

1 ()> (21) 4489527/14 (22) 03.10.88 (46) 23.08.91. Бюл.М31 (71) Киевский научно-исследовательский институт фтиэиатрии и пульмонологии им. акад. Ф.Г.Яновского (72) В.И,Коржов, В.С.Деркач и Т.А.Сокирко (53) 612.015 (088.8) (56) Якушко В.Е. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1980, М 8, с. 146 — 149. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАСТУПЛЕНИЯ ДЫХАТЕЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ЕЕ МОДЕЛИРОВАНИИ В

ЭКСПЕРИМЕНТЕ.

Изобретение относится к медицине, а именно — экспериментальной пульмонологии, и может быть использовано для определения повреждения субклеточных структур легких у животных и наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании у экспериментальных животных.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Для моделирования дыхательной недостаточности используется распространенная модель с применением пестицида диквата, обладающего выраженным пневмотропны л действием. Подопытным животным (морским свинкам) указанный пестицид вводится в дозе 1/10 LDso (полулетальной дозы), т.е. 18 мг/кг массы перорально в течение 3 дней. Через 7 дней животные забиваются под легким эфирным наркозом, митохондрии из легких выделяются дифференциаль„, 51.) „„1672359 А1 (я)5 G 01 N 33/48//G 09 В 23/28 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной пульмонологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Повышение точности определения наступления дыхательной недостаточности в эксперименте достигается тем, что из легких животных выделяют митохондрии, определяют скорость потребления кислорода в пробах с сукцинатом в присутствии АДФ и без него, рассчитывают величину отношения первого ко второму и при уменьшении отношения относительно нормы не менее чем на 20% определяют наступление дыхательной недостаточности.

Точность прогноза 864 ь (по прототипу—

68,2%). ным центрифугированием, Непосредственно после выделения дыхание митохондрий записывается полярографически, для этой цели можно испольэовать отечественный полярограф ППТ-1. Митохондрии добавляют в кювету с инкубированной средой при 25 С (0.15М сахарозы, 0,005 М KCI;

0,005 КН2РО4; 0,001 МоС!2), Через 1 — 1,5 мин добавляют сукцинат (10 мМ) и через 1 мин—

200 мкМ аденозиндифосфата (АДФ). Затем делают необходимые вычисления: скорость дыхания с АДФ делят на скорость после исчерпания АДФ.

Полученная величина характеризует степень сопряженности дыхания и фосфорилирования, поэтому служит показателем интактности ткани.

При патологическом процессе в легких (дыхательной недостаточности) степень сопряженности дыхания и фосфорилирования снижается, отношение скоростеи дыхания митохондрий в присутствии сукцината при

1672359

55 добавлении аденозиндифосфата и без него— уменьшается, Степень снижения этого показателя и служит индикатором уровня повреждения субклеточных структур легких.

В норме этот показатель равен 2,05++ 0,12. в легких, поврежденных пневмотропным пестицидом, показатель сопряженности снижен до 1,58 +. 0,12.

При снижении показателя сопряженности относительно нормы не менее, чем 20;(„ определяют наступление дыхательной недостаточности, Анализ требует 20 — 30 мин.

С целью контроля за достоверностью предлагаемого способа определения повреждения субклеточных структур легких параллельно проводят морфологические исследования легких животных с экспериментальной дыхательной недостаточностью.

Морфологические исследования проводят общепринятыми методами световой микроскопии (окраска гематоксилин-эозином).

В легких свинок с дыхательной недостаточностью отмечена инфильтрация межал ьвеолярных перегородок, выраженные перибронхиальные и периваскулярные лимфоидно-клеточные инфильтраты. В просветах бронхов наличие слизи, Обнаруживаю1 ся периваскулярные изменения.

Степень морфологических изменений в легких соответствует степени нарушений изученных биохимических показателей, что свидетельствует об адекватности предлагаемого способа определения повреждения субкл еточных структур легких.

Повышение точности способа демонстрируется на полученных в результате статистической обработки данных по определению наступления дыхвтельной недостаточности предлагаемым способом и по известному способу (табл.1). Контролем достоверности определения служили данные морфологического исследования, проведенные общепринятыми методиками световой микроскопии.

Пример 1. Морская свинка (самец), вес 350 г, вводят дикват трехкратно по 6,3 мг (т,е. 18 мгlкг, что составляет 1/10 LDM).

Животное забивают через 7 дней. Определяют дыхание митохондрий легких в присутствии и отсутствии АДФ и рассчитывают отношение первого показателя ко второму.

Определя|от активность СОД s гомогенате ткани. Проба легкого поступает на морфологическое исследование. Патоморфологическое исследование установило, что легкие поражены пневмотропным пестицидом— выражена ды",àòåèüíàÿ недостаточность.

Показатель, характеризующий дыхание митохондрий, равен 1,50, т.е. против нормы

50 снижен на 26.8",, т.е. свидетельствует о наступлении дыхательной недостаточности.

Активность СОД в ткани легкого равна

0,68 ед. активности на 1 г белка, что не отличается достоверно от нормы (0,72 ед. акт.).

Пример 2. Морская свинка (самец), вес 300 r. Вводят дикват трехкратно в дозе

18 мг/кг, а именно по 5,4 мг. Через 7 дней определяют все указанные параметры, Показатель, характеризующий дыхание митохондрий, равен 1,45, т.е. снижен по сравнению с нормой на 29.3, что свидетельствует о дыхательной недостаточности.

Активность СОД равна 0.45 ед.активности, что соответствует активности при дыхательной недостаточности.

Патоморфологическое исследование установило характерное повреждение ткани легкого.

Пример 3, Морская свинка (самец). вес 300 r, Ввводят дикват трехкратно в дозе

18 мг/кг, т,е. 5,4 мг. Через 7 дней определяли все вышеуказанные параметры, Показатель, характеризующий дыхание митохондрий, равен 1,74, т.е. снижен меньше, чем на 20 (, по сравнению с контролем, дыхательная недостаточность не регистрируется. Активность СОД равна 0.67 ед., что не отличается достоверно от нормы. Патоморфологическое исследование установило наличие изменений в легких. свидетельствующих о наступлении дыхательной недостаточности, т.е. в данном случае оба показателя "не сработали".

В табл.2 приведены данные, характеризующие точность установления дыхательной недостаточности с помощью предлагаемого способа в зависимости от степени снижения показателя, характеризующего дыхание митохондрий. Видно, что способ работоспособен при снижении не менее, чем на 20, показателя сопряженности.

Формула изобретения

Способ определения наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании в эксперименте. включающий биохимическое исследование легких контрольных животных и животных с экспериментальной дыхательной недостаточностью, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, иэ легких животных выделяют митохондрии, определяют скорость дыхания и рассчитывают величину отношения потребления кислорода в пробах с сукцинатом в присутствии аденозиндифос1672359

Таблица 1

Составитель Н.Гуляева

Редактор С,Патрушева Техред М.Моргентал Корректор В.Гирняк

Заказ 2836 Тираж 396 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 1О1 фата и после его исчерпания и при уменьшении отношения не менее чем на 20 определяют наступление дыхательной недостаточности.