Способ получения пептидов или их фармацевтически приемлемых солей

Способ получения пептидов или их фармацевтически приемлемых солей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается производства пептидов или их фармацевтически приемлемых солей общей ф-лы I- RiR2CH-C(0)-NH- chr3-C(0)NH-CH(CH2R4)-CH(OH)-CH2-CH2-C

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я >s С 07 К 5/06, А 61 К 37/02

ГОС УДАРСТВЕ H> IblA КОМИТЕТ пО изОБРетениям и ОткРытиям

ПРИ ГКНТ СССР %ОРВИ « ® EA" <(1» »

"ИВЛИ Ъ i g li q

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (л (21) 3987362/04 (22) 28.11.85 (31) 59 — 252878; 59-268035; 60 — 15177 (32) 30.11.84: 19.12.84; 29.01.85 (33) JP (46) 07.09.91, Бюл, М 33 (71) Санкио Компани Лимитед (JP) (72) Ясухиро Морисава, Юитиро Ябе, Мипуро Катаока, Ясутеру Идзима, Тацуо Кокубу и

Кунио Хивада(JP) (53) 547.964.407(088.8) (56) Шедер Э., Лк". ке К. Пептиды. — М,: Мир.

1967, ч.1. с.116. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ

ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение касается производства пептидов или их фармацевтически приемлемых солей общей ф-лы 1: Й1Р2СН-С(0)-NHСН йз-C(0)NH-С Н(С Нуйа)-С Н(ОН) СН2-СН2-С (0)й5, где Rl = Rz — A-Вб при А — Cl-C4-алкиИзобретение относится к способу получения пептидов или их фармацевтически приемлемых солей — новых биологически активных соединений, которые могуг найти применение в медицине, Цель изобретения — способ получения новых производных пептидов, обладающих низкой токсичностью и более высокой реннин-ингибирующей активностью.

l1 р и м е р 1. Бис(1-нафтилметил)уксусная кислота.

2,86 г (0,12 ммоль) натрия растворяют в

250 мл безводно о этанола и при охлажде„„Я „„ ) 676454 АЗ лен ил, Вв - нафтил; йз — С1-Cz-ал кил, 5-имидаэолилметил, 4-тиазолилметил или 2-(метилсульфинил)-атил,R4 — иэо и ро и ил о в а я группа, КБ — N йвй9 при Яв — Н и йя — С1 — Саалкил (он может быть замещен С1-С4-алкокси-, окси-, диметоксифенильной или ди-((С1-Са-алкил)аминогруппой) 1-бензил-4пиперидинил, ингибирующих активность реннина для использования в медицине, Цель— создание новых более активных пептидов.

Их синтез ведут реакцией соединений ф-л

I I и III: RiRz СН-С(0)-Yr-OH(ll), НУб-NHCH(CHzR<)CH(OH)CHz-C(0)-Rs(lII), где Y — NHC H Вз-С(О)-; s = 0 или 1: Г = 0 или 1, (s + Г) = 1;

R>-КБ — см. выше. При необходимости превращают любую включенную группу в необходимую другую группу указанных определений для настоящего ряда веществ и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые пептиды до

99% (против 65% для известного Z-PheHis-лейцинола) ингибируют реннин. 1 табл. нии льдом к полученному раствору добавляют 19,95 r (0,12 ммоль) диэтилмалоната. Затем реакционный раствор перемешивают в течение 1 ч, после чего по каплям добавляют

22,00 г (0,12 ммоль) 1-хлорметилнафталина и полученный раствор перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, а затем перемешивают в течение 3 ч при 50 С.

Выделившуюся соль отфильтровывают, а полученный фильтрат концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью жидкостной хроматографии среднего давления на колонке с силикагелем до получения 15,2 r

1676454

35 (58%) указанного соединения в виде бес- 40 (41,3%) диэтип(1-нафтилметил)мапоната и

9,8 r (17,8%) диэтилди(1-нафтилметил)малоната.

9,8 г (22,2 г ммоль) диэтилди(1-нафтилметил)малоната растворяют в 100 мл смеси

1:1 по объему бутанола и воды, 10 г гидроокиси калия добавляют к полученному раствору и полученную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником при

150 С в течение 8 ч, Затем реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток смешивают с водой, а затем добавляют концентрированную соляную кислоту до рН 1. Выделившиеся кристаллы отфильтровывают до получения 6,2 г (82%) указанного соединения в виде белых кристаллов с т.пл, 172174 С.

Пример 2. 2-(1-Нафтилметил)-6-фенилгексановая кислота.

1,3 г(57 ммопь) натрия растворяют в 200 мл безводного этанопа, Этот раствор смешивают с 14,8 г (50 ммопь) диэтип(1-нафтипметил)малоната при охлаждении льдом и перемешивают в течение 1 ч. 11,7 г (55 ммоль) 4-фенилбутипбромида добавляют затем по каплям и полученную смесь перемешивают в течение 6 ч при 50 С, Выделившуюся соль отфильтровывают и полученный фильтрат концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очищают на хроматографической колонке с сипикагелем (злюируя смесью 1;4 по объему зтилацетата и гексана) до получения 15,4 г (71%) диэтил2-(1-нафтилметил)-2-(4-фен ил бутил)малоната.

Это соединение обрабатывают так же, как описано в примере 1, гидроокисью калия в водном бутаноле до получения 6,8 r цветного маслянистого вещества.

Пример 3, Диэтил-(1-нафтилметил)малонат.

Этилат натрия, полученный из 2,3 г (0,1 грамм-атом) натрия суспендируют в 250 мл диметилформамида. Добавляют 16,0 r диэ1илмалоната при охлаждении льдом до получения суспензии и полученную смесь перемешивают при 0 С в течение 30 мин, а затем при комнатной температуре в течение

1 ч. К этому раствору добавляют 100 мл

° диметилформамида, содержащего 17,6 r (0,1 ммоль) 1-хлорметилнафталина, в течение 2 ч. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток смешивают с водой, а затем экстрагируют этилацетатом.

Этилацетатный слой промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, су5

20 шат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. После выпаривания остатка при пониженном давлении получают 21,3 г указанного соединения в виде бесцветной вязкой жидкости с т.кип. 210 С (5 мм рт,ст„667

Па).

Пример 4. Диэтилбензил(1-нафтилметип)малонат.

1,05 г (25 ммоль) 55 мас,%/ìàñ. суспензии натрийгидрида в минеральном масле

rIpoMblBBloT трижды безводным гексаном, чтобы высушить ее, а затем смешивают с

100 мл диметипформамида. К этой суспензии добавляют 7,21 г (24 ммоль) диэтип(1нафтилметил)малоната при охлаждении льдом, После того, как выделение водорода прекращается, реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин, а загем добавляют 4,10 r (24 ммопь) бензилбромида и полученную смесь перемешивают в течение

pLLå 2 ч при комнатнои температуре. В конце этого промежутка времени реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток смешивают с водой и зкстрагируют этилацетатом, Этилацетатнь1й слой промывают насыщенным водным раствором натрийхпорида, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагалем (элюируя смесью 15:1 по объему гексана и этилацетата) до получения 7,3 г указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества.

Масс-спектр, m/å. 390 (fJl ).

Пример 5. Дизтип (2-(2-метоксиэтокси)этил)(1-нафтил метил)малонат, Повторяют реакцию, описанную в примере 4. HG используют 2,12 г (10 ммоль)

2-(2-метоксиэтокси)этипиодида и 2,0 г (6,7 ммоль) диэтип-(1-нафтилметип)малоната до получения 1,93 r указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на хроматографической колонке с силлкагелем (злюируя смес ..ю 10:1 по Объему гехсгна и зтилацетата).

Масс-спектр, и;/е: 402 M ).

П р и м " р 6. Диэтил(2-(2-бензилоксиэтокси)зтил,1 нафтилметил)мдлонат.

Повторяют реакцию, описанную в примере 4, но используют 3,98 г (10 ммоль)

2-(2-бензилоксиз-окси)этилиодидд и 3,0 Г (10 ммопь) дизтил(1-нафтилмети l)MBJIOHGTB до получения 3,62 - "указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на хроматографической колонкс с силикагепем (элюируют смесью 8:1 по объему сексa!Ia и этилацетата), 1676454

Масс-спектр, m/е: 478 (М ).

Пример 7. 1-Бензил-3-нафтилпропионовая кислота.

Смесь 7,3 r (18 ммоль) диэтилбенэил(1нафтилметил)малоната. 70 мл бутанола, 70 5 мл воды и 7 г гидроокиси калия нагревают на масляной бане (150 С) при кипении с обратным холодильником в течение 10 ч, Реакционную смесь охлаждают. а затем концентрируют, выпаривая при понижен- 1О ном давлении, после чего ее подкисляют концентрированной соляной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный слой промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, сушат над без- 15 водным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении.

Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем (элюируя смесью 1:1 по объему гексана и этилацетата) и получен- 20 ный твердый продукт перекристаллизовывают иэ смеси гексана и этилацетата до получения 3,29 г указанного соединения в виде бесцветных кристаллов с т.пл. 119120 С. 25

Масс-спектр, m/е: 290 (М ).

Пример 8. 2-(2-(2-Метоксиэтокси)этил)-3-(1-нафтил)пропионовая кислота.

Повторяют реакцию, описанную в примере 7, но используют 1,87 г (4,6 ммоль) 30 диэтил(2-(2-метоксиэтокси)этил)(1-нафтил— метил)малоната до получения 1,12 г указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на хроматографической колонке с силикагелем 35 (элюируют этилацетатом).

Масс-спектр, m/е: 302 (M ).

Пример 9. 2-(2-(2-Бензилоксиэтокси)этил)-3-(1-нафтил)п ропионовая кислота.

Повторяют реакцию, описанную в при- 40 мере 7, но используют 2,50 r (5,2 ммоль) диэтил(2-(2-бензилоксиэтокси)этил)(1-нафтилметил)малоната до получения 1,76 г указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на 45 хроматографической колонке с силикагелем (элюируют этилацетатом), Масс-спектр, m/е: 378 (М ).

Пример 10. 4(S)-(N-(Бис(1-наФтилметил)ацетил)-L-гистидил-амина)-3(S) окси-6- 50 метил-N-(2(S)-(-)-метил-бутил)гепатан мид (соединение 1).

Первая стадия. 4(S)-(N-Бензилоксикарбонил-L-гистидиламино) 3(S)-окси-6-метилЩ2(Я)-(+метил бутил)гепта н амид. 55

10 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 0,9 г (2,6 ммоль) (3S, 4S)-4-трет-бутоксикарбонила-мино-3-окси6-метил-N-(2($)- (-)-метилбутил)гептанамида. Затем реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. после чего ее выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл диметилформамида, а затем добавляют 0,26 г (2,6 ммоль) N-метилморфолина при охлаждении льдом до получения раствора (3S, 4Я)-4-амино-3-окси-6-метил-N-(2(5)- (+метилбутил)гептанамида. Этот раствор добавляют к 10 мл холодного раствора в диметилформамиде N-бензилоксикарбонил-L-гистидиназида, полученного из 0,91 г (3 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-гистидингидразида путем обработки иэопентилнитритом, и полученную смесь перемешивают в течение 5 дней при

4 С. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а затем к остатку добавляют насыщенный водный раствор карбоната калия и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный экстракт промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографически на колонке с силикагелем, элюируя смесью

20:1 по обьему хлороформа и метанола.

Нужные фракции концентрируют, выпаривая при пониженном давлении до получения сиропообразного остатка. Сироп отверждают, добавляя диэтиловый эфир, остаток собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,96 г указанного соединения в виде белого порошка, т.пл.

158-168 С

Вычислено, : С 62.89; Н 8,01; N 13.58.

СзтНюМ О

Найдено, : С 62.73; Н 7,94; N 13,67.

Вторая стадия 4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-l -гистидиламино}-3(S)-окси- 6метил-N-(2(S)-(+метилбутил)гептанамид, Бензилоксикарбонильную группу удаляют из соединения, полученного на первой стадии. обрабатывая его водородом при комнатной температуре в присутствии 5 мас. /мас, до палладия на активированном угле. 91 мг (0,2 ммоль) полученного соединения, 66,5 мг(0,2 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты и 39,4 мг (0,22 ммоль)

N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимида растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 1 мл диметилформамида и 6 мл метиленхлорида, и полученный раствор охлаждают на льду. К полученному раствору добавляют 44 мг (0,4 ммоль) N-метилморфолина и 45,4 мг (0,22 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в указанном порядке и полученную смесь перемешивают в течение

1 ч при охлаждении льдом, а затем в течение

10 дней при комнатной температуре Выде1676454 лившуюся дициклогексилмочевину отфильтровывают, а полученный фильтрат конденсируют, выпаривая при пониженном давлении, К полученному остатку добавляют 5 мас. объем водного раствора бикарбоната натрия, Выделившееся маслянистое вещество экстрагируют этилацетатом. Gpганический экстракт промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, Полученный остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь 10:1 по объему хлороформа и метанола. Нужные фракции собирают и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток отверждают, добавляя диэтиловый эфир, и полученный твердый продукт собирают фильтрованием до получения 35 мг целевого соединения в виде бледно-желтого порошка, т.пл. 130-15 С. (a) = -66 (С = 0,1, йеганол).

Вычислено, %: С 71,54: Н 7,68 N 9,70, С43Н5зй504 Н20

Найдено, : С 71,78; Р 7,61; N 10,00.

Получение соли, 722 мг (ммоль). 4(5)-(N-(бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-гистидиламино)- 3(S)-окси-6метил-N-(2(S)-метил бутил1гаптан амид моногидрата растворяют в 30 мл метанола.

10 мл холодной 4 н, соляной кислоты в диоксане добавляют в метанольный раствор.

Раствор вакуумируют, чтобы высушить, при пониженном давлении с получением 757 мг указанного соединения в виде белого порошкаа.

Пример 11. 4(S)-{М-(Бис(1-нафтилметил)ацетил) L-лейциламино)-3(5)-окси- 6-метил-N-этилгекптанамид (соединение 2).

Первая стадия, Этил-4(S)-(N-трет-бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(5)-окси- 6метил гептаноат, Трет-бутоксикарбонильную группу удаляют из 3,06 (10,1 ммоль) атил-(3S, 4S)-4трет-бутоксикарбониламино-3-окси-б-метилгептаноата обычными способами (так же, как и на первой стадии примера 10). Полученный продукт растворяют в метиленхлориде и нейтрализуют триэтиламином при охлаждении льдом. К полученному раствору добавляют 3,48 r (10,6 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-L-лейцин-N-owcucyaqv vvvga и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, Затем добавляют 1,1 мл 3$N,N-диметиламино)пропиламина и полученную смесь перемешивают еще в течение 1 ч. Реакционный раствор концентрируют, выпаривая при понижен5

55 ном давлении. Добавляют этилацетат для растворения остатка и этилацетатный раствор промывают 5 мас.%/объем водным раствором бикарбоната натрия, 10 мас, 7, обьем водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором натрйихлорида в указанном порядке. Затем сушат над безводным сульфатом натрия, Растворитель отгоняют при понижен ioM давлении и полученный остаток перекри-, сталлизовывают из смеси диэтилового эфира и гексана до получения 3,02 r указанного соединения в виде бледно-красного порошка, т.пл. 113 — 114 С, Вычислено, : С 60,55; Н 9,68; N 6,73.

Cr Н4ОМ 05

Найдено, : С 60,36; Н 9,70; N 6,66, Вторая стадия, 4(5)-(N-трет-Бутоксикарбонил-1-лейциламино)-3(S)-окси- бметилгептановой кислоты гидразид.

2,65 r (6,36 ммоль) соединения, синтезированного на первой стадии и 3,19 r (63,7 ммоль) моногидрата гидразина растворяют в 80 мл диметилформамида и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 19 ч, а затем еще 12,5 ч при

50 С. Реакционный раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, К остатку добавляют воду и этилацетат. Выделившийся нерастворимый продукт отфильтровывают, Полученныи фильтрат промывают водой, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток и нерастворимый продукт, который был выделен при фильтровании, обьединяют и суспендируют в кипящем диэтиловом эфире.

Выделившееся соединение собирают фильтрованием и сушат до получения 1,73 г указанного соединения в виде бесцветных призм, т.пл. 140-147 С.

Третья стадия. 4(S)-(N-трет-Бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(S)-окси- 6-метил-Nэтилгептанамид.

402 мг (1,00 ммоль) соединения, синтезированного на второй стадии, растворяют в 8 мл диметилформамида, а полученный раствор охлаждают до -60 С. К охлажденному раствору добавляют 0,62 мл 6 н.раствора соляной кислоты в диоксане и 0,18 мл (1,35 ммоль) изопентилнитрита и полученный раствор перемешивают в течение 10 мин при

-2С С, " затем снова охлаждают до -60 С.

Затем раствор нейтрализуют, добавляя 0,61 г N-метилморфолина, после чего добавляют

108 мг (1,32 ммоль) этиламингидрохлорида и реакционную смесь перемешивают при

5ОС в течение 20,5 ч. Затем реакционную смесь выливают в воду и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Этилацетат1676454

10 ную фазу промывают 5 мас.% объем водным раствором бикарбоната натрия, 10 мас. (,/объем водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток промывают гексаном. собирают фильтрованием и сушат до получения 345 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл. 193-197 С, Вычислено, %: С 60,69; Н 9,94; N 10,11.

С21Н411чЗО5

Найдено, о : С 60.46; Н 10,04; N 10,13.

Четвертая стадия, 4(S)-{N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(S)- окси-6-метил-N-этилгептанамид. трет-Бутоксикарбонил ьную группу удаляют из 99 мг (0,24 ммоль) соединения, полученного на третьей стадии. Полученный продукт растворяют в диметилформамиде.

К полученному раствору добавляют 91 мг (0,24 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты. 50 мг (0,28 ммоль) 90%-ного диэтилфосфороцианидата и 64 мг (0,63 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают в течение

14,5 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор последовательно обрабатывают, как описано в примере 10 (вторая стадия), и полученный продукт перекристаллизовывают из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и гексана, до получения 59 мг указанного соединения в виде бесцветных иголок, т.пл, 93-96 С. (а) = -157 С (С = 0,1, метанол).

Вычислено, %: С 75,32; Н 8,06; N 6,59.

С40Н51М304 1/2Н20

Найдено. : С 75,06; Н 8,08; N 6,60.

Пример 12. 4(S)-{N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-1 -лейциламино)-3(S) -окси-6-метил-N-(2-метилбутил)гептанамид (соединение 3).

Первая стадия, 4(S)-(N-трет-Бутоксикарбонил)-1 -лейциламино)-3(S)-окси -6-метил-N-(2 )(-метилбутил)гептанамид.

344 мг (1,23 ммоль) (3$, 4S)-4-амино-3о кс и-6-метил-N-(2-метил бутил) ге пт;- н а м и д моногидрохлорида растворяют в метипенхлориде, Этот раствор нейтрализуют триэтиламином при охлаждении льдом, а затем к нему добавляют 420 мг (1,28 ммоль) N-третбутоксикарбонил-L ëåéöèí-N îêñèñóêцини— мида. Полученную смесь перемешивают в течение 22,5 ч при комнатной температуре, а затем добавляют 0,2 мл 3 (N,N-диметиламино)пропиламина и полученную смесь перемешивают еще 1 ч. Затем реакционный раствор концентрируют выпариванием при пониженном давлении. Добавляют к остатку метиленхлорид и полученный раствор промывают 5 мас.$/oáüåì водным раство5 ром бикарбоната натрия, 10 мас. /îáüeì водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Раство10 ритель отгоняют при пониженном давлении. Полученный остаток промывают этилацетатом, отфильтровывают и сушат до получения 328 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл, 166 — 168 С.

15 Вычислено, %,: С 62,99; Н 10,35; N 9,18.

С24Н47И305

Найдено, %: С 62,92. Н 10,16; N 9,14.

Вторая стадия. 4(S)-{N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(S)- окси-6-ме20 тил-N-(2-метилбутил)гептанамид. трет-Бутоксикарбонильную группу удаляют иэ 100 мг (0,22 ммоль) 4(5)-(N-трет-бутоксикарбонил-L-лециламино)-3-(S)-окси6-метил-N-(2-метилбутил)гептанамида, пол-, 25 ученного на первой стадии, и полученный продукт растворяют в диметилформамиде.

К этому раствору добавляют 77 мг (0,23 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты, 42 мг(0,23 ммоль) 90%-ного ди этил фосфороцианидата и 52 мг (0.54 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают а течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционный раствор концентрируют выпаривани35 ем при пониженном давлении. К остатку добавляют этилацетат и полученный раствор промывают 5 мас.%/îáüåì водным раствором бикарбоната натрия, 1 н. соляной кислотой и насыщенным водным раствором

40 натрийхлорида в указанном порядке, после чего его сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а полученный остаток перекристаллизовывают из смешанного растворителя, со45 стоящего из метиленхорида и гексанз,qo получения 40 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл. 98-100 С. (гк) = -143 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, %: С 74,96; Н 8,49; N 6,10.

C43H57N3O4 1/2 Н20

Найдено, %: С 75,10; Н 8,56; N 6,10.

Пример 13. 4(S)-(N-бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино}3(Я)- окси-6-ме5 тил-М-(2-этоксиэтил)гептанамид (соединение 4).

Первая стадия. 4(S)-(N-трет-бутоксикарбонил- .-лейциламино)-3(S) îêñè-6- метил-N (2-этоксиметил) гептанамид, 1676454

L трет-Бутоксикарбонильную группу удаляют из 539 мг (1,56 ммоль) (3S, 45)-4-третбутоксикарбониламино-3-окси-сметил-N-(2-этоксиэтил)гептанамида обычным способом, а затем полученный продукт растворяют в метиленхлсриде при охлаждении льдом, и нейтрализуют триэтиламином.

К этому раствору добавля;от 534 мг (1,63 ммоль) N-трет -бутохсикарбонил-L-лейцинN-оксисукцинимида и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 22 ч, Затем добавляют 0,2 мл 3(N,N-диметиламино)пропиламина и полученную смесь перемешивают еще в течение 1 ч, Реакционный раствор концентрируют выпариванием при пониженном давлении.

К остатку добавляют метиленхлорид и полученный раствор промывают 5 мас, /обьем водным раствором бикарбоната натрия, 10 мас. /объем водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Полученный остаток перекристаллизовывают из смешанногс растворителя, состояще o иэ метиленхлорида и этилацетата до получения 294 мг указанного соединения в виде бесцветных иголок. т,пл. 172-173 С, Вычислено,,,: С 60,10; Н 9,87; N 9,14.

С23Н 45 3О6

Найдено, ; С 59,99; H 9,96; М 9,09.

Вторая стадия. 4(Я)-;й-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(5)-окси- 6-метил-N-(2-этоксиэтил)гептгнамид, трет-Бутоксикарбонильную группу > даляют из 105 мг (0,23 ммоль) 4(S)-(N-трет-бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(S)-окси6-метил-N-(2-этоксиэтил)гептанамида обычным способом, а затем полученный продукт растворяют в диметилформамиде. К этому раствору добавляют 78 мг (0,23 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты, 43 мг

,0,24 ммоль) 90 -ного диэтилфосфороцианидата и 50 мг (0,49 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают в течение 5,5 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор обрабатывают, как на второй стадии примера 12, а полученный продукт перекристаллизовывают из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и диэтилового эфира, до получения 58 мг указанног" cîåäèíåíèé в виде бесцветных иголок, т.пл, 168-169 С. (a)23 = -168 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, ; С 73,98; Н 8,13 N 6, i6.

С42Н55М305

Найдено, : С 73,85; Н 8,24: N 6,14.

Пример 14. 4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-1 -лейциламино)-3(S)-окси- 6-мегил-N-(3,4-диметоксифенэтил)гептанамид (соединение 5).

Первая стадия. 4(S)-(N-трет-Бутоксикарбонил-(-лейциламинo)-3(5)-окси-б-метил- N(3,4-диметоксифенэтил)гептанамид.

0,74 r (1,7 ммоль) (3S, 4S)-4-трет-бутоксикарбонил-амина-3-окси-б-метил-N-(3,4-д, имеiîêñèôåíýòèë)ãåïòàíàìèäç растворяют в 8 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане и полученную реакционную смесь после перемешивания в течение 20 мин при комнатной температуре выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяюг в 20 мл метиленхлорида и при охлаждени и льдом полученный раствор нсйтрализуют, добавляя 0,24 мл триэтиламина. Затем добавляют 0,58 г (1,8 ммоль)

N-трет-бутоксикарбо |ил-L-лейцин-N-окси сукцинимида, растворенного в 5 лл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре, после чего к смеси добавляют

0,2 мл 3-(N,N-диметиламино)пропиламина и реакционную смесь перемешивают еще в течение 1 ч. Реакционный раствор концентрируют выпариванием при пониженном давлении, а затем к полученному остатку добавляют воду и этилацетат. Выделившийся остаток отфильтровывают и собирают органический слой, Этот органический слой промывают 10 мас.%/обьем водным растворогл лимонной кислоты. 5 мас. / /обьем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным воднь,м раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгoHslloT при пониженном давлении, Остаток и осадок отфильтровывают, как описано, обьединягот и кристаллизуют из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и этилацетата, до получения 0,69 г указанного соединения в виде бесцветных иголок, т,пл. 192 †1"С.

Вычислено, : С 63,13; Н 8,95; N 7,62.

С29Н49М307

Найдено. : С 63,06; Н 8,83; N 7,56, Вторая стадия. 4(5)-(N-(Áèñ(1-нафтилметил)ацетил)- -лейциламино)-3(S)-окси- 6-метил-N-(3,4-диметоксифенэтил) гептанамид.

153 мг (0,28 ммоль) 4(S) (N-трет-бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(S)-окси-6- метил-N-(3,4-диметоксифенэтил)гептанамида растворяют в 1,4 мл 6 н. раствора соляной кислоты в дисксане и реакционный раствор перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре, а затем выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток

1 676454

5

55 растворяют в 3 мл диметилформамида и перемешивают при охлаждении льдом. К этому раствору добавляют 93 мг (0,27 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты, 49 мг (0,27 ммоль) 907;-ного диэтилфосфороцианидата и 59 мг (0,58 ммоль) триэтиламина и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при охлаждении льдом. а затем перемешивают еще 3 ч при комнатной температуре. Затем реакционный раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, К остатку добавляют этилацетат, полученный раствор промывают 5 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия. 1 н.соляной кислотой и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке и сушат на„безводным сульфатом магния, Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток промывают гексаном, а затем кристаллизуют из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и диэтилового эфира до получения 128 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл. 164 — 166"C. (cl) = -104 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, : С 74,49; Н 7,68; N 5,43.

С4ЯН5Л305

Найдено, : С 74,32; H 7,63; N 5,44, Пример 15. И (4(S)-(N-(Бис(1-нафтилмегил)ацетил)-L-норлейциламино)-3(S)- окси- б-метил гептаноилЦ-L-изолеицинол (соединение 6).

Первая стадия. N (4(S)-N òðåò-Бутоксикарбонил-!.-норлейциламино-3()-окси- 6метилгептаноил)-L-изолейцинол.

375 мг (1 ммоль) N-(4(S)-(N-трет-бутоксикарбониламино-3(5)-окси-6-метилгептанои л)- L изолейцинолэ обрабатывают б н, раствором соляной кислоты в диоксане до удаления трет-бутоксикарбонильной группы и получают (35, 4S)-4-ами но-3-окси-6-метилгептаноил-L-изолейцинолгидрохлорида.

231 мг (1 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-Lнорлейцина и 135 мг(1 ммоль) 1-оксибензотриазола добавляют к этому соединению и полученную смесь растворяют в 5 мл диметилформамида. Добавляют 101 мл (1 ммоль) триэтиламина при охлаждении льда 1 и 206 мг (1 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0"C, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют воду, реакционную смесь экстрагируют диэтиловым эфиром и нерастворимый GGTBTQK отфильтровывают, Органический экстракт промывают 10 мас. /îáüåì водным раствором лимонной кислоты, 5 мас.%/объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным волным раствором натрийхлорида в укаэанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом натрия. Этот раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. а затем переосаждают, добавляя смесь диэтилового эфира и гексана до получения 330 мг указанного соединения в виде белого порошка, т,пл. 139 — 144 С.

Вторая стадия. N-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-(-норлейциамино)-3(S)окси-б-метилгептаноил))-L-иэолейцинол.

163 мг (0,33 ммоля) Щ4(Я)(й-трет-бутоксикарбонил-L-нойролейциламино)-3(S)окси-6-метил гепта ноил)-L-изолейцинола обрабатывают так же, как на второй стадии примера 12, до получения 110 мг указанного соединения в виде белого порошка, т,пл.

135 †1 С. (a) = -124 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, : С 73,81; Н 8,40; N 5,87.

С44Н5вМ305 1/3 Н20

Найдено, %: С 73,92; Н 8,36; N 5,94, Пример 16. N-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-гистидиламино)- 3(S)-окси6-метилгептаноил)-L-изолейцинол (с оеди не н ие 7).

749 мг (2 ммоль) (4(5)-М-трет-бутоксикарбон илам и но)-3(S)-окси-6-метил гептаноил)-(-изолеицинола обрабатывают б н. раствором соляной кислоты в диоксане для удаления трет-бутоксикарбонильной группы и получения N-(3(S,4S)-4-амино-З-окси-бметилгептаноил)-L-изолейцинолгидрохлори да. К этому соединению добавляют 819 мг(2 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-Nim-тозил1.-гистидина и 359 мг (2,2 ммоль) диэтилфосфороцианидата, всю смесь растворяют в 10 мл диметилформамида. При охлаждении льдом к реакционной смеси по каплям добавляют 425 мл (4,2 ммоль) триэтиламина, а затем все перемешивают в течение 1 ч при

0 С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Эту реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, а остаток смешивают с этилацетатом. Этилацетатный раствор промывают

10 мас. /oáúåì водным раствором лимонной кислоты, 5 мас. /объем водным ðàñтвором бикарбоната натрия и насыщеннь;м водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. M"ñëÿíèñòûé остаток обрабатывают трифторуксусной кислотой в присутствии анизола для удаления трет-бутоксикарбонильной группы и получения 4(S)-(Nim-тозил-1 -гистидиламин)3(S)-окси-б-метилгепаноил-L-изолейцинолт— рифторацетата.

1676454

120 мг (0,35 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты и 60 мг (0,35 ммсль) диэтилфосфороцианидата добавляют к этому соединению и всю смесь растворяют в

2,5 мл диметилформамида, 70 мг (0,67 ммоль) триэтиламин" добавляют по каплям при охлаждении льдом к реакционной смеси, которую перемешивают втечение 1 ч при

0 С. Затем реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, а остаток смешивают с этилацетатом, Раствор этилацетата промывают 10 мас, /обьем раствором лимонной кислоты, 5 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, высушивают над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. К остатку добавляют 170 мг (1,28 ммоль) 1-оксибензотриазола, полученную смесь оастворяют в 5 мл тетрагидрофурана. Затем эту реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток смешивают с этилацетатом. Этилацетатный раствор промывают

5 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очишают с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле (используя смесь 8:1 по обьему хлороформа и метанола s качестве проявляющего растворителя) до получения 38,8 мг указанного соединения в виде белых кристаллов, т,пл. 175-179 С (а) = -70 (С= 0,1, метанол).

Вычислено, : С 69,45; Н 7.68; N 9,20.

С44НЮМО5 1,5 НгО

Найдено, : С 69,34; Н 7 38: N 8,78.

Пример 17. Щ4(Я)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)- а-метиониламино}-3(S)-окси6-метил гептаноил)-L-изолейцинол (соединение Ц).

Первая стадия. Щ4(5)-(N-трет-Бутоксикарбонил-L-метиониламино)-3(S)-окси-6метилгептаноил)-L-изолейцинол.

2 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 749 мг (2 ммоль) N(4(S)-(N -трет-бутоксикарбониламино)-3(S)окси-6-метилгептаноил)-» -изолейцинола, Затем реакционный раствор перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. а затем концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Затем к остатку добавляют 500 мг (2 ммоль) трет-бутоксикарбо5

55 нил-метионина и 270 мг (2 ммоль) 1-оксибезотриазола, Полученную реакционную смесь растворяют в 30 мл диметилформамида, а затем добавляют 412 мг (2 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при

40 С, В конце этого промежутка времени реакционную смесь выливают в ледяную воду и экстрагируют этилацетатом. Нерастворимый остаток отфильтровывают.

Этилацетатный экстракт промывают 10 мас. /объем водным раствором лимонной кислоты, 10 мас. /объем водн ы м раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом натрия. Этот раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, а затем остаток осаждают, добавляя смесь хлороформа и гексана, в результате чего получают 600 мг указанного соединения в виде белого порошка.

Вторая стадия. N-(4(S)-(М(Бис(1-нафтилметил)а цетил)-L-метион ил а минo j-3(S)- о кси6-метилгептаноил)-L-изолейцинол.

2 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 600 мг (1,19 ммоль) изолейцинола, полученного на первой стадии. Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем полученный раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. К остатку добавляют 403 мг (1,19 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты и полученную смесь растворяют в 20 мл диметилформамида. Добавляют при охлаждении льдом 300 мг (1,84 ммоль) диэтилфосфороцианидата и

2 мл тризтиламина при перемешивании.

Полученную смесь оставляют реагировать в те ение 1 ч при 400С, а затем выливают в ледяную воду и экстрагируют зтилацетатом.

Этилацетатный раствор промывают 10 мас. /объем водным раствором лимонной кислоты, 10 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, Затем экстракт очищают с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (используя в качестве проявляющего растворителя смесь хлороформа и метанола) и осаждают активную фракцию, добавляя смесь хлороформа и гексана, в.результата чего получают 520 мг указанного соединения в виде белого порошка т.пл. 76-„

80 C. (а)гз = -133 (С = 0,1, метанол).

Пример 18, й-(4(ЯНМ-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-3-(4-тиазолил)-Э - аленила17

1676454 мино)-3®-окси-6-метилгептаноил)-(-изол— ейцинол (соединение 9).

Первая стадия. Мет>1, овь>й сложныи эфир N-(бис(1-нафтилметил)ацетил)-3-(4-тиазr лил)-О(-аланин, 51 . м; (1,50 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты >п 389 мг (1,50 ммоль) ме илового слож>1ого эфира 3-(4-тиазог>ил)О -аланиндигидрохлорида суспендируют в

20 мл безводного тетрагидрофурана, 0,25 мл (1,65 ммоль) диэтилфосфороцианидата и

0,69 мл (4,95 ммоль) триэтиляминз при охлаж внии льдом добавляют затем к этой суспензии и полученную смесь перемешивают р. течение ночи при ко>лнятной т> 1ПЕрятурЕ В атМОСфЕрЕ аЗОта. В >.0>röÅ это о про;лежутvà времени рас T > ори гель отгоняют при пониженном давлении, а полученный остаток о >и>цзют на хромзтогряфической колонке с силикагалем (эл>оируя смесью 2:1 по обьему зтилацетята и гексана) до получения 630 мг указанно о соединения, т,пл. 110-112оС.

Вторая стадия. N-(Е ис(1-нафтилметил)а цетил)-3-(4-тиазолил)-DL-зла нина гидра ид.

620 мг (1,22 м non») метилового сложно>и эфира N-(бис(1-нафтилметил) цетил)-3-(4т;язолил)-D(-а-.>ни >а растворяют в 8 мл безводного диметилформамида. Этот ряст lop смешивают с 310 мг (6,19 ммоль) гидрази>1гидратя, пере>лешивают в течение 5 ч при 40 С. Растворитель отгоняют при понио женном давлении, к остатку добавляют воду. Выпавшие кристаллы собирают фильтрованием, промывают смешанным растворителем, состоящим из гексаня и диэтилового эфира, и сушат до получения 408 мг указанного соединения, т.пл. 118--121 С. о

Третья стадия. N-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-3-(4-тиазолил)-DL- алзнилямино)-3(S)-окси-6-метил-гептаноил)-(-изолейцинол, 393 мг (0,77 ммоль) N-(бис(1-нафтилметил)яцетил)-3-(4-тиазолил)-DL-алэн ин гид разида суспендируют в 10 мл безводного диметилформамида. К этой суспензии при -60 С о добавляют 0,66 мл 4 н.раствора соля ои кислоты в диоксане, а затем темпсратуру оеякционной смеси повышаюг до -20 С. Эту .о суспензи>о с>легвивают с 0,13 мл (О 97 ммоль) изопе>.тил>ч»1,> та и перемешивают в течение 10 мин. ";lucn> того, как подтверждено исчезновение гидразида, те>лперагуру реакции с >о»а снижа>о> до -60оС. Для нейтрализации добавляют 0,33 мл (3.00 ммоль)

N-метилморфолиня. а затем 328 мг (1,02 ммолb) N- (35, 4S)-4-ами о-3-окси-6-метилгепта> оил)-L-изолейцинолгидрохлорида и

0,12 мг (0,09 ммоль) N-метилморфолина и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при 4 С. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а остаток очищают с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле (используя смесь 10:1 по обьему хлороформа и метанола в качестве проявляющего растворителя) до получения

310 мг указанного соединения в виде белых кристаллов, т.пл. 94-98 С.

Пример 19. N-(4(S)-(2(RS)-(Бис(1-наф- . тилмет ил)ацетил)аминононаноил)-амино-3 (Я)-окси-б-метилгептаноил)-L-изолейцинол (соединение 10).

3 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 58,6 мг (0.156 ммоль)

И-(4(S)-трет-бутокси;арбониламино-3(S)-окси-6-метилгептаноил)- L- изолейцинола. Реакционный раствор перемешивают в течение 30 мин при комнатной те