Питательная среда для культивирования пыльников риса

Питательная среда для культивирования пыльников риса

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , в частности к культивированию in vitro зерновых культур, преимущественно риса, и может быть использовано в растениеводстве , физиологии растений. Целью изобретения является повышение интенсивности образования каллуса из пыльников. Питательная среда, согласно изобретению, включает в себя набор макрои микроэлементов , при этом в качестве дедифференциатора в ней дополнительно содержится крезацин. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4741010/13 (22) 27,09,89 (46) 23.09.91. Бюл. N 35 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт риса (72) П.Н.Харченко, Н.Е.Алешин, Э.P.Àâàêÿí, Е.П.Алешин и M.Ã.Âîðîíêîâ (53) 578.085,23(088.8) (56) Бутенко P.Ã. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. — М.: Наука, 1964, с. 272.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию ln vitro зерновых культур, преимущественно риса, и может быть использовано в растениеводстве, физиологии растений.

Цель изобретения — повышение интенсивности образования каллуса из пыльников.

В питательную среду, включающую азотнокислый кальций, азотнокислый калий, сернокислый магний, азотнокислый аммоний, фосфорнокислый однозамещенный калий, хлористый калий, сернокислый цинк, барную кислоту, сернокислый марганец, иодистый калий, этилендиамин-тетрацитат натрия (ЭДТА), сернокислое железо, тиамин, пиридоксин, никотиновую кислоту, глицин, сахарозу, агар-агар и 2,4- дихлорфеноксиуксусную кислоту, дополнительно вводят к резацин (трис-(2-оксиэтил)аммоний-2-метилфеноксиацетат) в качестве дедифференциатора при соотношении компонентов, мас.,(,, указанном в табл.1. Ы 1678256 А1 (5))5 А 01 Н 4/00, С 12 N 5/04 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПЫЛЬНИКОВ РИСА (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию in vitro зерновых культур, преимущественно риса, и может быть использовано в растениеводстве, физиологии растений. Целью изобретения является повышение интенсивности образования каллуса из пыльников. Питательная среда, согласно изобретению, включает в себя набор макро- и микроэлементов, при этом в качестве дедифференциатора в ней дополнительно содержится крезацин. 2 табл.

I О

Ъ,г

Крезацин — биологически активное вещество, по химической природе являющееся трис-(2-оксиэтил)аммоний-2-метилфено ксиа—

0цетат.. Относится к классу трис-(2-оксиэтил)аммониевых солей ароксиуксусных кислот. По механизму действия имитирует природные ауксины, обладая, однако, гораздо более высокой активностью. Крезацин применяется в животноводстве для регулирования метаболических процессов в 00 организме животных. : Ь3

Способ иллюстрируется следующими (Я примерами. 1©ь

Для экспериментальной проверки питательной среды готовят шесть сред. Опыты с .4 культивированием пыльников риса сорта

Старт и гибрида Е1 ВНИИриса 1588хМ-301 на средах проводят в трехкратной повторности.

Пример 1. Пыльники риса культивируют на среде, известной ранее, которую готовят по следующей технологии.

1678256

В 800 мл дистиллированной воды добавляют 8000 мг агар-агара и путем кипячения готовят агаровый гель. Затем в него добавляют ингредиенты, мас.%: Ca(NOa)zx

x4HzO 0,8500; КИОз 2,4403; MgS04 7Н О

0,0736; ЙН4МОз 2,4496; KHzP04 0,7323; KCI

0,1676; ZnS04 7Н20 0,0097; НзВОз 0,0051;

MnS04 4HzO 0,0110; KJ 0,0119; ИаЭДТА

0,0981; FeSO4 7HzO 0.0689; тиамин HCI

0,0002; пиридоксин HCI 0,0005; никотиновая кислота 0,0016; глицин 0,0049; агар-агар

19,5867; сахароза 73.4978, вещество-дедифференциатор — 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-0) 0,0002. Общий объем приготовляемой среды доводят до 1000 мл добавлением дистиллированной воды. Затем среду тщательно перемешивают. Растворами HCI u NaOH устанавливают рН среды 5,8.

Горячую питательную среду разливают в 16 мм пробирки, которые закрывают ватно-марлевыми пробками и автоклавируют при 1 атм 25 мин. Пыльники риса высаживают на застывшую агаризованную поверхность в стерильных условиях, Пробирки с пыльниками померцают в термостат при

28 С, через 25 — 30 дней подсчитывают количество пыльников, давших каллус (табл .2). Пример 2, Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в предлагаемой среде, мас.%, следующее.

Са(ИОз)г 4Н20 0,9935; КК Оз 3,1001; Mg S04x

x7HzO 0,0701; КНайОз 2,0974; КН2РО<

0,7102; KCI 0,1438; ZnSO4 7HzO 0,0089;

НзВОз 0,0023; MnS04 4Hz0 0,0197; К3

0,0061; йаЭДТА 0,2064; FeSOq 7Н О 0,0811; тиамин HCI 0,0008; пиридоксин HCI 0,0008; никотиновая кислота 0,0019; глицин 0,0060; сахароза 75,1344; агар-arap 17,4162; 2,4дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0002; крезацин 0,0001; сухого вещества в растворе 6,0 мас.%, остальное — вода.

Пример 3. Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в предлагаемой среде, мас.%, следующее, Са(ЙОф 4HzO 0,9741; КЙОз 3,0287; MgS04x х7НгО 0,0829; МН4МОз 2,1434; KHzP04

0,7226: KCI 0,1698; ZnS04 7HzO 0,()036;

НзВОз 0,0047; MnS04 4НгО 0,0120; KJ

0,0013; МаЭДТА 0,0920; Ре$04 7HzO 0,0651; тиамин HCI 0,00005, пиридоксин HCI

0,0005; никотиновая кислота 0,0018; глицин

0,0039; сахароза 74,1995; агар-агар 18,4938;

2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота

0,00005; крезацин 0,0002; сухого вещества в растворе 6,1 мас.%, остальное — вода.

Пример 4. Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов з предлагаемой среде, мас,%, следующее:

Са(ИОз)2 4HzO 0,8499; КИОз 2,4594; MgS04

7HzO 0,0857; - М Н4МОз 2,4493; КН2Р04

0,7348; KCI 0,1592; ZnSO4 7Н20 0.0039;

НзВОз 0,0039; MnS04 4Н О 0,0108; KJ

0,0019; КаЭДТА 0,0936, FeSO4 7НгО 0,0681; тиамин HCI 0,0002; пиридоксин HCI 0,0002; никотиновая кислота 0,0012; глицин 0,0049; сахароза 73,4797; агар-агар 19,5928; 2,4дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0001;

10 крезацин 0,0004; сухого вещества в растворе 6,15 мас.%, остальное — вода, Пример 5, Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но .содержание компонентов в предлагаемой среде, мас.%, следующее:

Са(ИОз)и 0,7659; КИОз 2,1047; MgS04 7HzO

0,1001; HqNOa 2,6594; KHzP04 0,8324; KCI

0,1490; ZnSO4 7Hz0 0,0049; НзВОз 0,0028;

20

MnSO< 4HzO 0,0101; KJ 0,0022; МаЭДТА

0,1110; FeS04 7 НгО 0,0606; ти ам и н H CI

0,0006; пиридоксин. HCI 0,0003, никотиновая кислота 0,0010; глицин 0,0057; сахароза

72,9353; агар-агар 20,2431; 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0002; крезацин

0,0006; сухого вещества в растворе 6,4 мас,%, остальное — вода

Пример 6. Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в

30 предлагаемой среде, мас.%, следующее:

Ca(NОз)г 0,7591; KNОg 2,0984; MgSOq 7НгО

0,1011; МН4КОз 2,6708; KHzP04 0,8397; KCI

0,0001, пиридоксин HCI 0,0001, никотиновая кислота 0,0008; глицин 0,0037; сахароза

71,3474; агар-агар 21,7241; 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота 0,0002; крезацин

0,0008; сухого вещества в растворе 6,6 мас.%, остальное — вода.

Результаты экспериментов представлены в табл. 2, где а — минимальное количество компонента в питательной среде, б— оптимальное, в — максимальное (согласно табл.1) 40

Как следует из экспериментальных данных, использование оптимального варианта питательной смеси обеспечивает увеличение каллусогенеза относительно известного способа на 67,5%. Последнее очень важно, так как количество пыльников отдельных гибридов и других форм, получаемых в еди-, ничных экземплярах, недостаточно. Кроме того, повышение частоты каллусогенеза позволяет уменьшить обьем приготовления среды, количество повторностей. лабораторной техники и рабсчего времени.

0,2799; Zn504 7Н20 0,0034; НзВОз 0,0051;

35 MnS04 4Н О 0,0099; KJ 0,0010; йаЭДТА

0,0902; FeS04 7HzO 0,0642; тиамин HCI

1678256

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования пыльников риса, включающая азотнокислый кальций. азотнокислый калий, сернокислый магний, азотнокислый аммоний, фосфорнокислый однозамещенный калий, хлористый калий. сернокислый цинк, 5 борную кислоту, сернокислый марганец, иодистый калий, этилендиамин-тетрацитат натрия, сернокислое железо, тиамин, пиридоксин, никотиновую кислоту, глицин, саха- 10 розу, агар-агар и 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту, дистиллированную воду, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью повышения интенсивности образования каллуса из пыльников, она дополнительно содержит креэацин 15 при следующем соотношении компонентов, мас.$:

Азотнокислый кальций 0,7659 — 0,9741

Азотнокислый калий 2,1047-3,0287

Сернокислый магний 0,0829-0,1001 20

Азотнокислый аммоний 2,1434-2,6594

Фосфорнокислый одноэамещенный калий 0,7226-0,8324

)(лористый калий 0,1490-0,1698

Сернокислый цинк 0,0036 — 0,0049

Борная кислота 0,0028-0,0047

Сернокислый марганец 0,0101-0,0120

Иодистый калий 0,0013 — 0,0022

Этилендиамин-тетрацитат натрия 0,0920-0,1110

Сернокислое железо 0,0651-0,0707

Тиамин 0,00095-0,0006

О, 0003-0, 0005

0.0010 — 0,0018

0,0039-0,0057

72,9353-74,1995

18,4938-202431

Яиридоксин

Никотиновая кислота

Глицин

Сахароза

Агар-агар

2,4-Дихлорфеноксиуксусная кислота 0.00005-0.0002

Креэацин 0,002-0,0006

Дистиллированная вода Остальное

Таблица1

Количество компонентов, мас.7.

Компоненты оптималь- максимальминимальное ное ное

0,0006

0,0002

0,0004

0,0001

Остальное

0,0002

0,00005

Са (NOg ) 4 1> О

KNO3

М@ ВО„?Н,О

ИН, МО, КН РО»

КС1

ZnSO4 7Н О

Нз 3

NnSO< 48 О

KJ

Na ЭДТА

Fe SO 71 О

Тиамин

Пиридоксин

Никотиновая кислота

Глицин

Сахароза

Агар-агар

Дедифференциаторы:

Крезацин

2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота

Дистиллированная вода

О, 7659

2, 1047

О, 0829

2, 1434

О, 7226

О, 1490

О, 0036

0,0028

0,0001

0,0013

0,0920

0,0651

0,00005

О, 0003

О, 0010

О, 0039

72, 9353

18,4938

0,8499

2,4594

О, 0857

2,4493

О,?348

О, 1592

0,0039

0,0039

0,0108

О, 0019

О, 0936

О, 0681

0,0002

0,0002

О, 0012

О, 0049

73,4797

19,5928

0,9741

3,0287

0, 1001

2,6594

0,8324

О, 1698

0,0049

0,0047

0,0120

0,0022

О, 1110

0,0707

0,0006

0,0005

0,0018

0,0057

74,1995

20,2431

1678256

Т а б л и ц а 2

Питательная среда

Гибрид риса Fq

ВНИИР 1588хМ-301

Сорт риса Старт образовали каллус, шт образовали каллус, ET ° посажено пыльнипосажено пыльни ков шт. ков, шт.

Известная

Предлагаемая б) (содержание крезацина 0,0001 мас.Ж) а б в б (содержание крезацина 0,0008 мас.%) 270

570

270

48

52

57

570

29

31

34

50.

270

570

Составитель В.Демкин

Твхред M. Ìoðãåíòýë Корректор Л.Бескид

Редактор E.Ïýïï

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

М».

Заказ 3154 Тираж 357 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5