Способ низкотемпературного консервирования эмбрионов

Способ низкотемпературного консервирования эмбрионов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение может найти применение для длительного хранения репродуктивных клеток редких и исчезающих видов животных . Цель - повышение сохранности биологических свойств эмбрионов до стадии бластоциста. Для достижения цели к эмбрионам мышей, полученным на стадии бастомеров, добавляют смесь криопротекторов: глицерина, пропиленгликоля, диметилсульфоксида и 0,4% раствор холина-хлорида, на стандартной фосфатно-солевой среде Дюльбекко до конечной концентрации 4:75- 5,5% каждый. Все процедуры осуществляют при температуре 4-8°С. После эквилибрации эмбрионы разливают в контейнеры, завзльцовывают их и погружают контейнеры на 5-10 с в порошок цинка, охлажденный до температуры жидкого азота (-196°С). Затем контейнеры перекосят для хранения в жидкий азот.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 А 01 N 1/00

ГОСУДАРСТВЕ kHbl Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4306495/14 (22) 25,09,87 (46) 15,10.91, Бюл, N - 38 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины AH УССР (72) В, И, Грищенко, Ю. В. Калугин, H. А, Лучко и Е, Н, Черныш . (53) 615.475(088,8) (561 Kraq К. T. Kochler I М, Wright R, W,—

FheriogenoIogI, 1985, 23, N 1, р. (94. . (54) СПОСОБ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО, КОНСЕРВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ (57) Изобретение может найти применение для длительного хранения репродуктивных клеток редких и исчезающих видов животных. Цель — повышение сохранности биоИзобретение относится к криобиологии и может найти применение для длительного хранения репродуктивных клеток редких и исчезающих видов животных.

Целью изобретения является повышение сохранности биологических свойств эмбрионов до стадии бластоциста.

Способ осуществляется следующим образом.

Эмбрионы мышей, полученные на стадии 32 бластомеров, разбавляют 1:1 тремя последовательно добавляемыми порциями с интервалом 3 мин, смеси криопротекторов: глицерина, пропиленгликоля и диметилсул ьфоксида (ДМ СО) и метилирующего агента — холина-хлорида на стандартной фосфатно-солевой среде Дюльбекко. Концентрация криопротекторов после смешивания с эмбрионами составляет 4 75—

„„« Я „„1683621 А1 логических свойств эмбрионов до стадии бластоциста. Для достижения цели к эмбри. онам мышей, полученным на стадии бастомеров, добавляют смесь криопротекторов: глицерина, пропиленгликоля, диметилсульфоксида и 0,4% раствор холина-хлорида, на стандартной фосфатно-солевой среде

Дюльбеккодо конечной концентрации 4:755,5% каждый. Все процедуры осуществляют при температуре 4-8 С, После эквилибрации эмбрионы разливают в контейнеры, завальцовывают их и погружают контейнеры на 5-10 с в порошок цинка, охлажденный до температуры жидкого азота (— 196 С). Затем контейнеры переносят для хранения в жидкий азот.

5,25%, а холина-хлорида 0,4 . Время разбавления составляет 15-20 мин и является 0 временем эквилибрации. Все указанные 00 процедуры осуществляют при 4-8 С. После (д) эквилибрации эмбрионы разливают в кон-; ()с тейнеры, изготовленные из пищевой фольги, объемом 0,1 мл, которые д завальцовывают и погружают на 5-10 с в порошок цинка, охлажденной до температу- с ры жидкого азота (— 196 С), а затем переносят в жидкий азот для хранения.

Размораживание осуществляют в водяной бане при 40 С в течение 5 — 10c.

Пример 1. 60 эмбрионов разделяют на 6 групп по 10 эмбрионов. В каждую из групп внесли по 5 капел фосфатно-солевой среды Дюльбекко, содержащий 10,5 глицерина (чда). 10,5% пропиленгликоля (чда), 10,5% ДМСО и 0,8% холина-хлорида, при

1683621

Формула изобретения

Составитель В.Фролова

Редактор М,Васильева Техред M,Moðãåíòàë Корректор С.Черни

Заказ 3450 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 этом концентрация каждого из криопротекторов составила 5,25 Д, а холина-хлорида

0,4 . Все процедуры проводят при температуре 4 С. Разбавленные эмбрионы переносят в контейнеры из пищевой фольги с толщиной стенок 0,03 мм и размерами

1 х1,5 см, обьемом 0,1 мл, Свободные края контейнера завальцовывают и погружают на 10 с в металлическую емкость, заполнен ную порошком Zn, и погруженную в жидкий азот. После этого контейнеры переносят в жидкий азот, где хранят в течение 2 недель.

Размораживали в водяной бане при 40 С.

После размораживания развитие в культуре составило 94,8 Д .

Для обоснования концентрации криопротекторов проводили эксперименты аналогично примеру 1, только брали различные концентрации криопротекторов (4,75 ).

Сохранность эмбрионов определяли по данным развития их в культуре до стадии бластоцисты.

Предложенный способ позволяет повысить сохранность эмбрионов после размораживания на 27 .

Способ низкотемпературного консервирования эмбрионов, включающий замо10 раживание до -196 С в фосфатно-солевой среде Дюльбекко с криопротектором глицерином, отличающийся тем, что, с целью повышения сохранности биологических свойств эмбрионов до стадии бластоцисты, 15 в среду добавляют 0,4 -й раствор холинахлорида, пропиленгликоль и диметилсульфоксид до конечной концентрации

4,75-5,25 каждый, а замораживание ведут в емкости с порошком цинка, предваритель20 но охлажденным до -196 С,