Способ определения содержания клеток в микробных препаратах

Способ определения содержания клеток в микробных препаратах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии и направлено на повышение точности определения содержания клеток в микробных препаратах. Дозированную пробу сухого препарата, содержащего микробные клетки, помещают в электродную ячейку, нагревают от комнатной температуры до 100° С и измеряют ток ячейки, возникающий при нагревании. По величине максимального тока, пользуясь градуировочным графиком , определяют содержание клеток в пробе препарата. Для каждого вида культуры снимают свою градуировочную кривую. 2 ил о, 2 табл.

СО103 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„1684676 А 1 (gl)g G 01 N 33/483

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И MHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4712781/13 (22) 03.07.89 (46) 15.10.91. Бюп. 11- 38 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) В.С. Андреев и T.À. Печорина (53) 663.1 (088.8) (56) Перт С. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. И., 1978, с. 31. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

КЛЕТОК В MHKPOBHblX ПРЕПАРАТАХ (57) Изобретение относится к микробиологии и направлено на повышение точности определения содержания клеток в микробных препаратах. Дозированную пробу сухого препарата, содержащего микробные клетки, помещают в электродную ячейку, нагревают от комнатной температуры до 100оС и измеряют ток ячейки, возникающий при нагревании. По величине максимального тока, пользуясь градуировочным графиком, определяют содержание клеток в пробе препарата. Для каждого вида культуры снимают свою градуировочиую кривую. 2 ил., 2 табл.

1 помещают в электродную ячейку и измеряют ток при нагревании от комнатной температуры до 100 С.

По величине максимального тока по градуировочному графику определяют содержание клеток в пробе препарата.

Для калдого вида культуры снимают свою градуировочную кривую.

Снятие градуировочной кривой производят следующим образом.

Выращенную на минеральной среде до стационарной фазы роста культуру концентрируют центрифугированием или с помощью сепаратора, а затем высушивают лиофильно. Высушенную биомассу размалывают в керамической ступке и .хранят в закрытой посуде в эксикаторе с поглотителем влаги (PzO ) .

Для замещения части порошка клеточной биомассы берут NaCl той же дисперсии и обезвоживают подсушивани -

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и пищевой промышленности для определения количественного содержания микробных клеток в различных композиционных препаратах.

Целью изобретения является повышение точности определения.

На фиг.1 изображен градуировочный график зависимости тока через измерительную ячейку от содержания клеток

Е. coli M 17 в пробе препарата; на фиг.2 - градуировочный график зависимости тока через измерительную ячейку от содержания клеток Bacillus

thuringensis в пробе препарата.

Сущность способа заключается в следующем.

Дозированную пробу сухого препарата, содержащего микробные клетки, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1684676 ем в эксикаторе с Р Оь. Готовят раз— личные пропорции клеточной биомассы и NaC1, содержащие 10%, 20,,..., 100 клеточной биомассы. Затем дозированную пробу каждой смеси поочередно помещают в измерительную ячейку и измеряют ток при нагревании от комо натной температуры до 100 С.

По величинам максимальных токов для каждой пробы строят градуировочный график зависимости величины максимального тока от количественного содержания клеточной биомассы в пробе препарата.

Пример 1. Построение градуировочной кривой для культуры Е. со1)

М-1 7, Культуру Е, coli М-17» выращенную на глюкозоминеральной среде до стационарной фазы роста» концентрируют центрифугированием (4000 об/мин в течение 30 мин полученный концентрат содерлмт около 90 влаги). Концентрат E. coli М-17 высушивают лио- 25 фильно. Высушенную лиофильную биомассу Е. со1i M-17 размалывают в керамической ступке и хранят в эксикаторе с Р О для исключения увлажнения.

Для количественного замещения части порошка E. coli М-17 берут

NaC1 той же дисперсности и подсушивают в эксикаторе с поглотителем влаги Р 05-. Готовят несколько композиций с различным содержанием Е.coli

М 17: 0» 20ý 33з 40> 50> 67> 100 °

Затем поочередную пробу каждой при.готовленной смеси с помощью дозатора помещают в измерительную ячейку.

Измерительная ячейка — двухэлект40 родная импедансометрическая ячейка имеет титановые электроды, находящиеся на фиксированном расстоянии во фторопластовом корпусе. Ячейка разъемная. Предусмотрена промывка, обработка и стерилизация. Наружный кожух и резьбовой крепеж обеспечивают наделчую фиксацию межэлектродного расстояния и достаточную герметичность места помещения пробы материала.

Объем пробы составляет 0,06 см .

Измерение тока производят на установке, состоящей из HMT-0,5 (измеритель малых токов), самопишущего милливольтметра н блока подключения ячейки, состоящего из контактной системы, помещенной н термостат с задаваемой скоростью нагрева и с диапазо— нои нагрева до 150 С.

Ячейку с препаратом подключают к контактной системе и измеряют ток в процессе нагрева от комнатной температуры до 100 С. В процессе нагрева

6 регистрируют самопишущим милливольтметром величину напряжения, пропорциональную току через ячейку с препаратом. Ток вычисляют по формуле н 1+ k5

1 ьк " RH kp ток через ячейку; где хИ и

И ток и сопротивление на выходе измерителя; фиксированное сопротивление, соответствующее диапазону измерителя тока;

ИЭМ

k > P - соответственно коэффициент усиления измерителя и коэффициент обратной связи (kPh1 ) .

По вычисленным значениям максимального тока для каждой из проб препарата, содержащего определенное количество клеток Е.coli M-17, строят градуи— ровочный график зависимости тока че— рез ячейку от содержания клеток в пробе препарата (фиг.1) .

Пробу препарата, содержащего микробные клетки Е,coli M-17, объемом

0,06 см помещают в ячейку, ячейку подключают к измерительной установке. Замеряют ток при нагревании от комнатной температуры до 100 С. Мако

-11 симальный ток составляет 3,62 ° 10 А.

По градуировочному графику определяют содержание клеток Е.coli M-17 в пробе препарата. Оно составляет 65,9

-Ф1, 5 ., Параллельно в пробе исследуемого препарата определяют содержание микробных клеток методом посева проб.

0Но составило 66,1 ..

В табл.1 приведены результаты по с пределению содержания микробных кг ток s препаратах данным способом н по способу посева проб.

Пример 2. Построение градуироночной кривой для Bacillus thur n1;ensis проводят по аналогии с построением градуировочного графика для

:. coli M-17.

Культуру В. thuringensis выращенную на глюкозоминеральной среде

1684676

40 концентрируют, сушат, приготавлива— ют порошок, который хранят в зксика— торе с поглотителем влаги Р О .

Для количественного замещения час5 ти лоро .ка В. thuringensis берут

NaCl той же дисперсности и подсушивают в эксикаторе с Р О5. Готовят несколько композиций с различным процентным содержанием В. thuringensis:

О, 20, 33, 40, 50, 6/, 1007. Затем поочередно так же как и в случае с

Е.coli М-17 пробу каждой приготовленной смеси с помощью дозатора помещают в измерительную ячейку, описание которой приведено вышее, и измеряют ток через ячейку в процессе нагрева от комнатной температуры до 100 С на установке н по методике, указанной в примере 1. 20

По вычисленным значениям максимального тока для каждой пробы грепарата, содержащего определенное количество клеток Bacillus thuringensis, ñòðîÿò градуировочный график за- 25 висимости тока через ячейку от cîдержания клеток в пробе препарата (фиг.2). .Пробу препарата, содержащего клетки В. thuringensis, объемом 0,06 см 3р помещают в измерительную ячейку, ячей)ку подключают к измерительной установке. Замеряют ток при нагревании

-от комнатной температуры до 100ОС.

Максимальный ток составляе7 0,64

-it 35 х10 A. По градуировочпому графику определяют содержание клеток В.СЬшingensis в пробе препарата. Оно составляет 34,7 1,57..

В табл.2 приведены результаты по определению содержания клеток

Bacillus thuringensis в препаратах данным способом и по способу посева проб.

".аким образом, данный способ позволяет повысить точность опрс . еленин сод ржания кле-.ок в микробных ирена, атах. формула изобретения

Способ определения содержания клеток в микробных препаратах, вклю ыющий приготовление пробы препарата, измерение параметра и оценку количества клеток по градуировочному граФику, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения содержания клеток, нагревают пробу сухого препарата до 100 С, опредепяют электрический ток, возникающии в пробе препарата в процессе нагрсвания, а в качестге измеряемого параметра используют максимальный ток в пробе препарата„

Т а б л и ц а 1

Г

Содержание клеток в препарате, 7.

Препарат данный способ способ по посеву проб

65,9 1,5 66,0+4,0

32,1%1,5 32,04-3,0

14, 8+1, 5 15, 0 .2, 0

Таблица2

Прела- Содержание клеток ч препарарат тах, Х данный способ способ по посеву проб

74,04-4, 0

35,0+3,0

15,0+2, 0

75,411,5

34,741,5

15,341,5

1ьй ь1ь

50 ?00

Доля E. col K-L7, %

1684676

Фиг.2

Составитель Н. Алкеев

Редактор В. Трубченко Техред JI,Ñåðäþêîâà Корректор Л.Пилипенко

Заказ 3502 Тирах Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 мах

° Ã0- 2Л

50 I00 доля Васс в Хйи 5 ФИиъйп еав в, %