Способ диагностики анкилозирующего спондилоартрита

Способ диагностики анкилозирующего спондилоартрита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике анкилозирующего спондилоартрита. Цель изобретения повышение точности диагностики У больных определяют в лимфоцитотоксическом тесте наличие HLA-B27 фенотип с лимфоцитами больного и тест-сывороткой к этому антигену. Затем в сыворотке больного определяют относительное количество антигена HLA- B27 в лимфоцитотоксическом тесте по конкуренции с HLA- В27 антигеном лимфоцитов здоровых лиц с HLA-B27 фенотипом и при его количестве, равном или больше 1500, диагностируют анкилозирующий спондилоартрит. По сравнению с прототипом количество ложноположительных диагнозов снижается на 44%.

СОК)3 СОВЕ 1СКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

PF CllYb JlMY. (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4650912/14 (22) 13.02.89 (46) 15.10.91. Бюл. ¹ 38 (71) Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови и Минский медицинский институт (72) B.È.Ëåâèí, Е.П.Иванов, Г.П.Матвейков, А.Н.Соловей, И.П.Титова, Л.Г.Атаманенко, Е.С.Калия и И.В.Кошлачева (53) 615.375(088.8) (56) Вопросы ревматизма, 1982, № 3, с.3739. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АНКИЛОЗИРУЮЩЕГО СПОНДИЛОАРТРИТА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике

Изобретение относится к медицине и касается совершенствования способов диагностики ревматических заболеваний, в частности анкилоэирующего спондилоартрита (АС).

Целью изобретения является повышение точности способа лабораторног .иагностики АС.

Способ осуществляют следующим образом.

После выявления у больных с помощью лимфоцитотоксического теста по Терасаки антигена HLA — В27, проводят количественное его определение в сыворотке крови. На первом этапе исследования определяют наибольшее разведение анти-HLA В27 тестсыворотки, вызывающее гибель не менее 80 клеток-мишеней. Для этого готовят ряд разведений тест-сыворотки, например 1,5-, 2-, 3-, 4-кратные на изотоническом растворе, „„SU „„1684683 А1 анкилоэирующего спондилоартрита, Цель изобретения -- повышение точности диагностики. У больных определяют в лимфоцитотоксическом тесте наличие HLA — В27 фенотип с лимфоцитами больного и тест-сывороткой к этому антигену, Затем в сыворотке больного определяют относительное количество антигена HLA Â27 в лимфоцитотоксическом тесте по конкуренции с HLA—

В27 антигеном лимфоцитов здоровых лиц с

HLA — В27 фенотипом и при его количестве, равном или больше 1500, диагностируют анкилозирующий спондилоартрит. По сравнению с прототипом количество ложноположительных диагнозов снижается на 44 (. например на среде 199. Неразбавленную сыворотку и каждое иэ приготовленных разведений вносят в объеме 1 мкл в лунки микрокамеры Терасаки. В каждую лунку добавляют по 1 мкл инактивированной общепринятым методом (при 56 С в течение 30 мин) кроличьей сыворотки и инкубируют смесь при 22 С в течение часа, после чего в каждую лунку добавляют по 1 мкл клетокмишеней в концентрации 2х10 в 1 мл. Клет6 ками-мишенями служат лимфоциты периферической крови здоровых людей, выделенные с использованием градиента плотности фиколл-верографина и имеющие в фенотипе антиген HLA — В27. Инкубацию с клетками-мишенями проводят в течение часа при 22 С. После инкубации в лунки вносят по 5 мкл кроличьего комплемента (пул сывороток крови от 10 — 15 животных), после чего инкубацию повторяют при тех же условиях Iln завершении вгех процедур клеткими пени окрашивают 1% нь м раствором

> рипанового синего в течение 10 мин и подсчи>ь>вают число мертвых окрашенных кле-;п> под микроскопом Rce методические приемы, использованные в настоящем способе. включая температурный режим, время инкубации. концентрацию клеток, оценку реакции, описаны в классической методике

Терасаки и являются общепринятыми.

После окрашивания отмечаю лунки, в которых обнаружено не менее 80 MBpl вых клегок, Наибольшее разведение тест-сыворотки. вызывающее гибель не менее 80 клеток-мишеней. обозначают как "К".

Одновременно к тем же разведениям тест-сыворотки вместо инактивированной кроличьей сыворотки добавляют по 1 мкл исследуемой сыворотки крови пациента.

Дальнейшие процедуры не отличаются от приведенных выше После окрашивания клеток-мишеней определяют наибольшее разведение тест-сыворотки вызывающее

>ибель не мене 80 клеток-мишеней после преинкубации ее с исследуемой сывороткой пациента и обозначают его как "К1".

В ряде случаев исследуемая сыворотка пациента полностью нейтрализует актив ность тест-сыворотки (как ее разведений, так и цельнои), ло не дает воэможности определить К1. В этих глучаях исследуемую сыворотку пациента разводят в 2. 4, 8 и 16 раз и тестируют каждое разведение описанным Bh>UJp. способом. Отмечают наименьшее разведение (обозначаемое как "С") исследуемой сыворотки пациента. при инкубации которого с >ест-сывороткой может быть выявлена ибель не менее 80% клетокмишеней (К>).

locne оп ределения всех указанных параметров относительное количество растворимого антигена MLA- В27 в мл сыворотки определяют по формуле где P — количество растворимого антигена в

1 мл исследуемои сыворотки пациента;

1000 коэффициент приведения результатов к 1 мл, С наименьшее разведение исследуемой сыворотки пациента, при инкубации которой с -.ест-сывороткой может быть выявлена ибель не менее 80% клеток-мишеней;

V наибольшее разведение тест-сыворогки, вызывающее гибель Hp менее 80 клеток-мишеней после преинкубации ее с инактивированной кроличьей сывороткой;

К1 наибольшее разведение тест-сыворотки. вызывающее гибель не менее 80

5 клеток-мишенеи после преинкубации ее с исследуемой сывороткой пациента.

Изобретение иллюстрируют следующими примерами, Пример 1. Больной Х., 35 лет, муж, 10 Жалобы при поступлении: боли в левом локтевом и коленном суставах, в правом тазобедренном суставе, в шейном отделе гозвоночника. Ограничение движений в позвоночнике и во всех суставах нижних ко15 нечностей, Объективно при поступлении; затруднения при ходьбе, щадит правую ногу. Болезненность и ограничение движений е коленном и правом тазобедренном суставax, ограничение активных движений до

20 - очти полного в позвоночнике. Положительные симптомы Шобера и Отто. Умеренная ригидность грудной клетки. Рентгенологические исследования; илеосакральные сочленения не просматриваются, деформация

25 с боих тазобедренных суставов за счет сужения суставной щели. субхондрального склероза, краевых разрастаний и узур. Ротация правого бедра кнутри, Остеоартроз коленных суставов Грудной отдел позвоночника

30 картина бамбуковой палки". Лабораторные исследования. гемоглобин — 125 г/л, СОЭ- 28мм/ч, лейкоциты -11,5х10 /л, эоэинофилы 3, палочкоядерные нейтрофилы

3, сегментоядерные нейтрофилы — 60, 35 лимфоциты — 30, моноциты — 4, СРП—

2+, общий белок - 79 г/л, альбумин — 56, а1-- 5.1 . а2 — 9,1, /3 11,4,У вЂ” 18,4 .

Ревматоидный фактор — отр„анти — ДНК антитела — 5 г/л.

40 Методом тканевого типирования но Терасаки в фенотипе обследуемого выявлен антиген HLA-B27.

Количественное определение антигена

Н3. А В27 в сыворотке крови пациента анти45 НЕА--B27 проводят как описано выше. В крови больного содержание растворимого антигена Н(А--В27 было равно 2000.

Клинический диагноз: АС, периферическая форма, II ст, активности, медленно про50 r рессирующее течение, IV стадия, функциональная недостаточность III степени.

Пример 2, Больная Ш., 44 л., жен.

;Калобы при поступлении: боли в коленных, .> .. >оленостопных суставах и мелких суставах кистей рук, боли в области крестцово-подвздошных сочленений, скованность по утрам общая слабость. Обьективно при поступлении: отечность, болезненность при

1684683

Следовательно, уровень антигена HLAВ27 в сыворотке крови свидетельствует об отсутствии у данной больной АС, Клиниколабораторное обследование больной подтвердило достоверность диэ ноэа ревматоидный артрит.

Таким образом, использование предлагаемого изобретения B лабораторной диагностике АС позволяет существенно повысить ее эффективность за счет увеличения точности диагностики. По сравнению с прототипом увеличивается точность диагностики. Так, по прототипу количество ложноположительных диагнозов составляет 44 (иэ 56 обследованных 25 были здоровыми), э по предлагаемому способу иэ 56 обследованных точный диагноз был установлен в

100-,ь. движениях в голеностопных суставах. В коленных суставах определяется хруст, треск, при пальпации — баллотирование надколенника, движения ограничены. иэ-за болезненности. В области крестцово-подвздошных 5 сочленений при пальпации отмечается болезненность. Боли при движениях в суставах кистеи рук, больше справа, Рентгенологические исследования: в коленных суставах резко сужена суставная щель, 10 имеются костные разрастания до 3 мм, сустэвные концы костей склерозированы, В пястно-запястных суставах некоторое сужение суставных щелей, В голеностоп.ных, крестцово-подвздошных, тазобедрен- 15 ных суставах патологии не выявлено, Лабораторные исследования: гемоглобин—

110 г/л, СОЭ вЂ” 56 мм/ч, лейкоциты—

6,6х10 /л, эозинофилы — 5ф„палочкоядер9 ные нейтрофилы — 6, сегментоядерные 20 нейтрофилы — 59 („лимфоциты — 23, моноциты — 7, СРП вЂ” 3+, общий белок — 70 г/л, альбумин — 437;, а1 — 9, а2 — 13";ь, р — 15 ь, у — 20 (,. Ревматоидный фактор: реакция Ваалера-Роуэе 1:128, латекс-тест 25

1:320, ДРФ 1:320.

У больной выявлен антиген HLA — В27.

В то же время при количественном определении антигена HLA-B27 в сыворотке крови обнаружено только 500 УЕ этого ан- 30 тигенэ.

Клинический диагноз: Ревматоидный артрит, полиартрит серопозитивный, !!! ст. активности, медленно прогрессирующее течение, стадия III, вторичный артроз колен- 35 ных суставов.

Формула изобретения

Способ диагностики энкилозирующего спондилоартрита, включающий забор крови, выделение лимфоцитов, определение

HLA — В27 фенотипэ в лимфоцитотоксическом тесте с тест-сывороткой к антигену

HLA — В27, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики у больного, содержащего HLA- B27 фенотип. дополнительно из крови выделяют сыворотку, определяют в ней относительное количество HLA-B27 антигена на 1 мл сыворотки в лимфоцитотоксическом тесте с тест-сывороткой и лимфоцитэми здоровых лиц, содержащих HLA-B27 антиген, и при величине, равной или выше 1,500, диагностируют анкилозирующий спондилоэртрит.

Составитель В, Литовченко

Редактор А. Маковская Техред М,Моргентал Корректор М. Кучерявая

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул. Гагарина, 101

Заказ 3503 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5