Способ определения функциональной активности клеток крови доноров

Способ определения функциональной активности клеток крови доноров

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и переливанию крови. и может быть использовано для оценки функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов (5 гл). Целью изобретения является повышение точности способа Способ заключается в определении суммарного коэффициента аминосодержания (СКА) больших гранулярных лимфоцитов цитохимическими методами и.если величина СКА находится в интервале от 2,1 до 3 6, БГЛ считают функционально активными, а кровь донора пригодной для трансфузии

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (н)ю G 01 N 33/50

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (Л

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1, ()»

le

1

i@ (21) 4405783/14 (22) 05.04.88 (46) 23,10.91. Бюл. ¹ 39 (71) Самарский медицинский институт им.

Д. И,Ул ья нова (72) И.П. Балмасова

I (53) 615.375(088.8) (56) Н. Kawai, А. Kamijata, M. Katou, А. Jabuhava, J. Miyagava, T. Akabauc. Juduction of

lymphokineactivated killer and natural killer dll

activities from cryopreserved lymphocytes.

Transfusion, 1988, v, 28, ¹ 6, р. 531 — 535.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии и трансфузионной терапии, и может быть использовано при переливании крови больным.

Цель изобретения — упрощение и повышение точности способа за счет расширения спектра оценки функций клеток.

Способ осуществляется следующим образом.

Из 10-15 мл гепариниэированной венозной крови человека получают суспензию лимфоцитов методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-гипака, Концентрацию лимфоцитов доводят до 2 10 клеток б в 1 мл среды 199 и по 0 2 мл разливают в четыре пробирки, после чего проводят инкубирование при 37 С в течение 40 мин. При этом в первой (контрольной) пробирке содержатся интактные лимфоциты, во вторую пробирку перед инкубированием добавляют 0,2 мл 10 з M раствора гидрохлорида адоеиалина, в третью пробирку — 0,2 мл 10 М рас„„5UÄÄ 1686361 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК КРОВИ

ДОНОРОВ (57) Изобретение относится к медицине, в «астности к иммунологии и переливанию крови, и может быть использовано для оценки функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов (5 гл). Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ заключается в определении суммарного коэффициента аминосодержания (СКА) больших гранулярных лимфоцитов цитохимическими методами и.если величина

СКА находится в интервале от 2,1 до 3,6, БГЛ считают функционально активными, а кровь донора пригодной для трансфузии. твора креатининсульфата серотонина, в четвертую -0,2 мл 10 М раствора гидрохлорида гистамина. После инкубации все четыре пробы подвергают центрифугированию, иэ осадков готовят мазки, последние фиксируют реактивом Севки (12 мл 40О/, -ного раствора формалина, 50 мл 5, -ного раствора двухромовокислого калия, 20 мл 1 M раствора уксуснокислого натрия, до 100 мл дистиллированной воды) в течение 16-18ч. Фиксированные мазки

1,5 ч отмывают в дистиллированной воде, затем 30 мин окрашивают по методу Романовского. В готовых мазках определяют раздельным подсчетом процентное содержание (по отношению к общему количеству лимфоидных клеток) БГЛ, имеющих гранулы фиолетового цвета - адреналинсодержащие, оранжевого цвета - серотонинсодержащие, красного цвета — гистаминсодержащие. По результатам определения рассчитывают СКА:

CKA = Кадр + Ксер+ Кгист, 1686361

В 24 проб исходная функциональная активность выражалась в величинах CKA больше 3 6, а в 16ф, — меньше 2,1. В этих пробах исходный процент жизнеспособных клеток статистически достоверно был ниже

P9+,1ô,) и начинал снижаться после 3 дн. консервации.

Таким образом, суммарный коэффициент аминосодержания, отражающий функциональную активность больших гранулярных лимфоцитов, может служить критерием при контроле клеток крови доноров в процессе консервации и при значениях от 2,1 до 3,6 показывает пригодность крови к трансфузии, Составитель Р, Гуменюк

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор M. Демчик

Редактор Н. Яцола

Заказ 3594 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производсгвенно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 где К вЂ” коэффициент. характеризующий количественное соотношение БГЛ для кажДого способа инкубирования в присутствии тестируемых биогенных аминов, В свою очередь а .с+с -r+а г 5 а с+с. г+а r где а — процент БГЛ, несущих гранулы адреналина; с — процент БГЛ, несущих гранулы серотонина; г — процент БГЛ, несущих гранулы гистамина. В числителе — результаты определения для лимфоцитов, инкубированных с одним из биогенных аминов; в знаменателе — показатели для интактных лимфоцитов.

Значения СКА в интервале от 2,1 до 3,6 говорят о пребывании натуральных киллеров в состоянии функциональной активности. СКА 2,0 расценивается как показатель насыщения гранулярного аппарата натуральных киллеров у данного субьектэ биогенными аминами, а СКА 2. 3,7 свидетельствует о6 20 истощении аминосодержащих гранул.

Пример. Проведено исследование функциональной активности больших гранулярных лимфацитов в крови 43 доноров в процессе консервации, у 60 проб исходная функциональная активность, выраженная в значениях СКА, находилась в интервале от

2,1 до 3,6. Исследования повторяли каждые

3 дн. Было показано, что в течение 6 дн. от момента забора крови СКА находятся в этом же интервале, а после 6 дн. консервации принимал значения выше 3,6 или ниже 2,1. В эти же сроки начинал статистически достоверно снижаться и процент жизнеспособных клеток с 872,3 до 75 -1,9ф„определяемый в пробе с трипановым синим, Фомула изобретения

Способ определения функциональной активности клеток крови доноров путем исследования больших гранулярных лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности за счет расширения изучения спектра функций клеток и упрощения способа, лимфоциты инкубируют параллельно в средах, содержащие адреналин, серотонин, гистамин и не содержащие их, в течение 40 мин при 37 С, далее пробы центрифугируют, из каждого осадка готовят мазок, обрабатывают по методу Севки, определяют в каждом количество больших гранулярных лимфоцитов, содержащих адреналин, серотонин и гистамин, вычисляют процент клеток, содержащих моноэмины во всех исследованных мазках, рассчитывают суммарный коэффициент аминосодержания и при его значении от 2,1 до 3,6 определяют клетки функционально активными,