Штамм гриба fusаriuм oxy sроruм (sснlеснт) snyd.ет наns.var.оrтносеrаs (арр ет w @ ) в @ @ , используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4666886/13 (22) 27.03.89 (46) 30.10.91. Бюл. М 40 (71) Институт экологической генетики АН

МССР. (72) Л. С. Корецкая, Ж. Г, Простакова и А. И.

Бронштейн, (53) 63.576.8(088,8) (56) Простакова Ж. Г. и др. Патогенная микрофлора сои. Кишинев, 1986, с. 11 — 19, 57.

Методика оценок устойчивости сои к 6олезням и вредителям (Методические рекомендации СГИ) /Под ред. Бабаянц Л. Г., Одесса, 1985, с. 30, (54) ШТАММ ГРИБА FUSARlUM

0XYSPORUM (SCHLECHTj SNYD. ЕТ HANS .-ЧАЯ. ORTHOC ERAS (APP. ЕТ, WR) В1 А1, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЦЕНКИ СОИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФУЗАРИОЗУ

Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd.

et. Hans. чаг. orthoceras (арр. et. Wr) ВИа1, используемый для создания искусстввнного инфекционного фона при оценке сои на устойчивость к фуэариозу..

Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое.

Штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd. et. Hans var. orthoceras(app.

et. Wr) Bllal 693 — 4 выделен из растений сои, пораженных фузариозом, идентифициро-. ван по системе Билай ВИ, депонирован в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии под N. 36.

„„Я „„1687195 А1 (я}5 А 01 N 63/04, С 12 N 1/14 (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Fusarium oxysporum, используемый для создания искусственного фона при оценке сои на устойчивость к фуэариозу.

Целью изобретения является получение нового штамма гриба, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое.

Штамм гриба Fusarium oxysporum (schiecht)

snyd. et Hans var. orthoceras (арр. et, nr) Bilai

693 — 4 выделен иэ растений сои, пораженных фузариозом, идентифицирован по сис ° еме Билай В. И., депонирован в коллекции

ВНИИСХМ под N. 36. В полевых условиях при заражении устойчивой линии сои ВИР—

К вЂ” 8845 через почву вирулентность штамма

Fusarium oxysporum N 693 — 4 (ВНИИСХМ

36 . превышала вирулентность природного иэолята 693 на 12,6;4. 4 табл.

Культурально-морфологические и физиолого-биохимические признаки штамма.

Хорошо растет на сусло-агаре, картофельно-декстрозном агаре, на стерилизованных отходах овса, пшеницы и на жидкой среде Чапека при поверхностном и глубинном культивировании.

При культивировании штамма на суслоагаре при 22 — 25 С в течение 7 сут образуются колонии размером 7,0 — 7,3 см, круглые с ровными краями, мицелий паутинистый, плотный, обратная сторона лилово-карминовая. Макроконидии отсутствуют на 15-й день культивирования, микроконидии одноклеточные, обильные образуются в воздушном мицелии (7,0М,04 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные.

1687195

На картофельно-декст1 озном агаре при выращивании в тех же условиях колонии размером:9,8-7,2 см, круглые, край ровный, невысокие, слабопушистые, поверхность темно-лилового цвета с карминовым оттенком, обратная сторона темно-лиловая.

Спорообрэзующий, макроконидии отсутствуют, микроконидии одноклеточные, обильные, образуются в воздушном мицелии (6,8+0,02 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные, На твердой среде Чапека колонии размером 5,0 — 6,1 круглые, невысокие, неровные, пленчатые, слабопушистые, с возрастом уплотня ющиеся от белого до слаборозового цвета, обратная сторона белая или желтоватая.

Спорообрэзук>щий, макроконидии огсутствуют, микроконидии одноклеточные, обильные, образуются в воздушном мицелии (7,6+0,03 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные, Штамм растет при 4 — 37,5 С, оптимальная температура роста 22 — 25" С, рН среды

5,4 — 8,2, оптимальное значение рН среды

6,0-6,2.

Отношение к источникам углерода: усваивает сахарозу и крахмал. Отношение к источникам азота: усваивает МайОз, К1чОз, казеин, соевый белок, альбумин.

Штамм не имеет маркерных признаков.

Обладает способностью к биосинтезу фузариевой кислоты, ее содержание в культурал ьной жидкости 14-дневно В кул ьтуры . 40,8 — 53,5 мкг/мл (при выращивании в стационарных условиях нэ жидкой среде Чапека при 22 — 25 С).

Активность протеолитических ферментов при использовании в качестве субстрата казеина — 0,590 усл, единиц, при использовании N2-бензоил-D,i=àðãèíèí-п-нитроанилида — 0,140 усл,ед.

Признаки штамма устойчивы, Штамм хранят на сусло-агаре под вазелиновым маслом при 4 С 3-6 мес, затем пересевают.

Штамм гриба Fusariurn oxysporurn (schlecht) Snyd. е;. i4ans var. ortoceras (Арр.

et. Wr) В11а1 693 — 4 отобран из 451 изолятов, . выделенных из больных растений сои на стадии всходов и в фазе цветения в различных экологических зонах Молдавии.

Этими изолятами проведено искусственное заражение изолированных корней сои устойчивой линии К-8409 и восприимчивого сорта Букурля оо модифицированному методу Kendall, еэФ 1984, Выделенные изоляты гриба выращивают на чашках Петри на твердой среде сусло-агар в течение 2

30 качалке или 10 дн. в стационарных условиях.

Увлажненный субстрат (отходы пшеницы, Пример использования штамма для

40 оценки сои на устойчивость к фузариозу.

50 а

55 нед. при 25 С, Для заражения отдельных корней, помещенных в чашках Петри, используют диски мицелия, вырезанные сверлом диаметром 1,5 мм.

Для искусственного заражения сои используют корни 5-дневных растений, выращенных в проСтерилизованном песке при увлажнении до 60% или в рулонах увлажненной фильтровальной бумаги при 25 С из семян, предварительно простерилизованных в течение 2 мин последовательно 96%ным зтиловым спиртом и водным раствором

КМп04

Результаты, полученные при инфицировании корней сои восприимчивого сорта и устойчивой линии сои, представлены в табл, 1 и 2.

Из полученных данйых следует, что наибольшую длину гниения корня при контакте с культурой гриба (без нанесения повреждений) восприимчивого сорта Букурия и устойчивой линии К-8409 вызывает штамм F. oxysporum чаг. orthoceras N 693, превышающий по патогенности все выделенные и исследованные изоляты (табл. 1).

Пример использования штамма для йолевого инфекционного фона, Рассевают хранящиеся культуры на жидкую среду Чапека, выращивают 5 дн . на овса — 1 ч. воды нэ 2,5 ч. субстрата) стерилизуют при 1 атм., 1 ч. Заражение субстрата проводят жидкой средой, содержащей

10000 спор/1 мл культуральной жидкости.

Выращивают при комнатных условиях (1825ОС) в течение 15 дн.

Полученный описанным способом инокулюм вносят в почву при посеве семян из расчета 100 r инфекционного материала на

1м.

Оценку поражаемости сортов сои проводят по поражению корневой системы при раскапывании 10 растений из каждого ряда и оценки поражаемости по площади поражения данного органа:

0 — растения здоровые, без признаков заболевания.;

1 — поражение очень слабое, наблюдаются отдельные мелкие точечные пятна, занимающие не более 10%. поверхности органов растения;

2 — поражение слабое — 11-25% поверхности;

3 — поражение среднее — 26 — 50%;

4 — сильное поражение (свыше 50%, но ие более 75%), растения сильно угнетены;

1687195

Так как оценка поражаемости проводится по максимальному индексу развития болезни, более высокий уровень патогенности возбудителя позволяет более четко дифференцировать устойчивость сорта и проводить индивидуальный отбор линий— источников устойчивости к фузариозным корневым гнилям. При этом определяется,что Хабаровская-53 х Adepta, Чайка х

Adepta являются восприимчивыми, а не средневосприимчивыми, Pridesoy Приморская 520 — средневосприимчивыми, а не устойчивыми, ч-о имеет место при использовании прототипа. Сорта и гибриды со стабильным уровнем реакции подтверждают свою характеристику. Поэтому использование для создания инфекционного фона штамм- N. 693-4 обеспечивает более четкую иммунологическую характеристику, т.е. достигается ускорение селекционного процесса с меньшими затратами труда, полевыми площадями и инфекционной нагрузкой на природную среду.

Формула изобретения

Штамм гриба Ризаrlum oxysporum (s chIecht) snyd. et Hans var. orthoceras (арр.

et Nfr) Biiat, ВНИИСХМ N-36, используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу.

Таблица

Характеристика выделенных природных изолятов F. охузрогша

var.orthoceras по способности к поражению корней сои при искусственном .заражении

Изолят

Величина пс ажения корня, мм

Повторности

Х- тп х

Реакция

У

В

У

У

В

У

В

У

В

У

В

У

В

У

240 21 0. 300 300

35,0 34,0 33,0. 33,0

100 100 100 150

4,0 0 0 0,6

20,0 25,0 35,0 25,0

0 0 . 5,0 10,0

100 10,0 150 150

10,0 15,0 10,0 20,0

20,0 45,0 20,0 30,0

50 20 3 0 40

5,0 5,0 8,0 9,0

0 0 0 0

20,0 15 ° 0 20,0 20,0

15,0 30,0 20,0 20,0

30,0 30,0 30,0 31,0

693

165

706

4?3

627

702

У вЂ” устойчивая линия;

 — восприимчивый сорт

5 — очень сильное поражение (свыше

75 ), наблюдается гибель растений.

Для диагностики резистентности набора сортов использовали шкалу (табл. 3), где развитие (индекс болезни), в котором число 5 () больных растений и степень (балл) пора- . жения, вычислялось по формуле

R= Х- О, n k где  — развитие болезни; 10 — сумма произведений числа растений с одинаковыми признаками поражения на соответствующий им балл поражения; п — общее число растений;

К вЂ” высший балл шкалы учета. 15

Набор из 12 исследованных сортов соии гибридов распределялся по группам устойчивости следующим образом: средневосприимчивые — Pridesay, Приморская 529, гибрид 676, Nair-2; 20 восприимчивые — Скынтея, Хабаровская-53 х Adepta, Чайка х Adepta, Аурика, Mapi Presto; сильновосприимчивые — Кишиневская16, Букурия, Бельцкая-82.(табл. 4), 25

В полевых условиях при заражении через почву показатели патогенности на

12,6о превышали показатели, полученные при заражении природным изолятом.

20,0

35 0

20,0

40,0

10,0

15,0

30,0

5,0

10,0

30,0

20,0

20,0

25,0+2,1

34,0+0,4.

13,0+2,0

29,0+3,6

14, и- 1, 8

21,0+3,5

21, О+2, 4

28,2 2,0

4,79

1,0

4,47

1,74

8,21

4,47

2,73

4,1.

5,2

1,3

2,3

7,8

5,4

4,6

Таблица 2

1б87195

Определение патогенности моноспоровых клонов изолята 693 по результатам искусственного заражения корней сои

Номер клонов

Длина гниения корня, мм осприимчивый сорт Устойчивая ли(Букурия) . ния К-8409

Та блица 3 йкала для диагностики устойчивости образцов сои к фузариозу з витие боезни, Ж

Обозначен

Иммунологическая характеристика образцов

0-10

11-25 уу у

Высокоустойчивые

Устойчивые

Средневосприимчивые

1?rid.esoy

Зо сприимчив ые

Сил е но в О с и р и (и Еч ив ые

26-50

5.1-75

76-1 00

С

В

ВВ

2

4

7

9

11

12

13

14

16

17

18

19

21

22

23

24

26

27

28

29

30,0

5,0

15,0

34,0

30,0

30,0

30,0

16,0

30,0

25,0

30,0

25,0

30,О

25 0

25,0

15,0

10,0

25,0

25,0

25,0

25,0

25,0 30, 0

28,0

30,0

15,0

30,0

30,0

30,0

30,0

10,0

10,0

12, 0

25,0

12i 0

10,0

10 0.

0,0

11,0

10,0

10,0

0,0

10,0

11,0

10,0

10,0

10,0

11,0

12,0

10,0

10,0

10,0

10,0

10,0

11,0

10,0

12,0

12,0

12,0

12,0

1687195

Та блица 4

Поражение проростков сои при искусственном заражении через почву штаммов 693-Н по сравнению с исходным известным штаммом

1 нтенсивность развития корневых гнилей, 7

Сорта, гибриды сои

Штамм 693-4

Пр евышен ие риродный золят 693

7,4

30,0

5,9

69,2

80,0

9t 9

61,8

50,0

86,0

П р и м е ч а н и е. среднее значение превышения = 12,6Х.

Составитель Т. Полянская

Техред М.Моргентал Корректор О. Кравцова

Редактор М. Келемеш

Заказ 3657 Тираж 351

ВНИИПИ Гос да ственног

Подписное осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "П " . У атент, г. жгород, ул.Гагарина, 101

Скынтея

Кишиневская-16

Букурия

Хабаровская-53 х

Adep ts

Чайка х Adept

PridesoyПриморская 529

Бельцкая-82

Аурика

Ивр1 Presto

Гибрид 670

Noir-2

34,0

40,0

20,0

20,0

67,0

65,4

52,0

47,5

28,4) 58,9

61,0

28,3

28,3

85,3

67,8

62,7

48,5

41,2 24, 9

21,0

8,3

8,3

18,3

2,4, 10,7

1ъо

13 2