Способ получения клеточной культуры

Способ получения клеточной культуры

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии, касается приготовления первичных и перевиваемых клеточных культур, необходимых в производстве вирусных вакцин, а также проведения диагностических и научных исследований в медицине. С целью ускорения способа при получении первичных перевиваемых культур культивируют клетки почечной ткани в питательной среде, проводят дезагрегацию клеток и снятие со стекла осуществляют при помощи протеолитического фермента Xanthomonas campestris ВКПМ В 4102 в конечной концентрации 0,01%

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для приготовления первичных и перевиваемых клеточных культур, необходимых в производстве вирусных вакцин, а также для проведения диагностических и научных исследований в медицине. Целью изобретения является ускорение способа при получении первичных и перевиваемых культур. Пример получения первичной клеточной культуры из ткани почек зеленых мартышек. В стерильных условиях извлекают почку, после снятия капсулы делают продольный разрез и извлекают из почки мозговое вещество с сосудами и мочеточником. Оставшееся корковое вещество нарезают до величины кусочков 2 мм, переносят в колбу и промывают 0,01 М натрий фосфатным буфером рН 8,0. Процесс проводят при комнатной температуре. Перемешивают на магнитной мешалке 7 мин в 0,01 М натрий фосфатном буфере рН 8,0. Затем эту порцию выбрасывают вместе с отделившимися клетками, а в колбу добавляют препарат протеолитического фермента из Xanthomonas campestris ВКПМ В-4102 до конечной концентрации 0,01% Отделившиеся клетки собирают через каждые 5 мин, чередуя обработку коркового вещества раствором фермента с раствором натрий фосфатного буфера. Жидкость с отделившимися клетками собирают в центрифужные стаканы емкостью 50 мл, содержащими 20 мл среды, состоящей из 5% гидролизата лактальбумина и 10% сыворотки крупного рогатого скота. Диспергирование продолжают до момента, пока не прекратится отделение клеток, отделившиеся клетки центрифугируют при 700 тыс. оборотах/мин в течение 10 мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют, фильтруют, подсчитывают число клеток и разводят так, чтобы в 1 мл содержалось 500 тыс. клеток посевная концентрация для одной пробирки. Клетки, получаемые из ткани почек зеленых мартышек, культивируют без смены среды. Через 6-7 дней после формирования плотного монослоя на 1,5-литровых матрасах при эксплуатации в них 30-10⁶ клеток, культуру используют для заражения вирусами. Морфологическое состояние культуры контролируют с помощью светового микроскопа. Видимых морфологических изменений клеток не обнаружено. Предлагаемый способ позволяет сократить время, необходимое для получения первичных культур на стадии дезагрегации, в 3 раза, перевиваемых клеток культур со стекла в 3-10 раз по сравнению с известным способом.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ путем культивирования клеток почечной ткани на стекле в питательной среде, дезагрегации клеток с последующим снятием их со стекла с помощью протеолитического фермента, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа при получении первичных перевиваемых культур, дезагрегацию клеток и снятие их со стекла осуществляют с помощью фермента, выделенного из Xanthomonas campestris ВКПМ В-4102, взятых в концентрации 0,008-0,11%